Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:06:45Z : No. of bitstreams: 1 dellaquajr_ja_dr_botfmvz.pdf: 670093 bytes, checksum: e66aa1acd7f261d1156564e3e811bc30 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o intuito de verificar a ação do acetato de prednisolona e do plasma seminal sobre a resposta inflamatória uterina de éguas inseminadas com sêmen congelado, desenvolveu-se os seguintes procedimentos: inicialmente 36 éguas foram aleatoriamente divididas em 6 grupos experimentais: G1 grupo controle, éguas não inseminadas; G2 éguas inseminadas com 800 x 106 de espermatozóides in natura; G3 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação; G4 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + adição de 20 mL de plasma seminal; G5 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + corticóide-terapia; G6 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + adição de 20 mL de plasma seminal + corticóide-terapia. A corticóide-terapia foi iniciada quando os animais apresentavam folículos de 35 mm e edema uterino, neste momento, se efetuava a administração da gonadotrofina coriônica humana (hCG) e concomitantemente 0,1 mg/kg de acetato de prednisolona por via intramuscular (Predef ), e repetia-se o corticóide a cada 12 horas até a ovulação. Os animais dos grupos tratados com corticóide G5 e G6, demonstraram um decréscimo significativo na função neutrofílica, frente ao teste da redução do tetrazólio nitroazul (NBT). O plasma seminal não alterou a intensidade da resposta inflamatória em nenhum dos testes realizados. No teste de fertilidade foram realizados dois grupos de inseminação, no primeiro, foram utilizadas éguas sem histórico de resposta inflamatória intensa pós-inseminação e não foi vista diferença estatística nos resultados de prenhes. Entretanto, no segundo teste de fertilidade, onde foram usadas éguas problemas, com... . / Aiming to verify the action of prednizolone acetate and of seminal plasma on the uterine inflammatory response of mares inseminated with frozen semen, the following procedures were developed. Thirty six mares were randomly allocated in 6 experimental groups: G1 control groups, with non-inseminated mares; G2 mares inseminated with 800 x 106 in natura sperm cells; G3 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells; G4 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + 20 mL seminal plasma; G5 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + cortico-therapy; G6 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + 20 mL seminal plasma + cortico-therapy. The therapy with 0,1 mg/kg of prednizolone acetate (IM) (Predef ), was performed when the mares presented follicles with 35 mm and uterine edema. At this moment the ovulation was induced with human corionic gonadotrophin (hCG), and the corticoid administrations repeated every 12 hours until ovulation. In G5 and G6 when the animals were treated with corticoid, it was observed a significant decrease on the neutrophil function, analyzed by the tetrazolio nitroazul test (NBT). The infusion of seminal plasma did not modify the uterine inflammatory response in any of the performed tests. For the fertility test, two groups of inseminated mares were used. On the first one, mares with no history of intense uterine inflammatory response after insemination were used. No statistic differences were observed on pregnancy results. However, on the second group of fertility test when problem mares, with history of post-insemination endometritis, were used, the corticoid-treated group presented a significant high pregnancy rate when compared with the control group (67% and 0% respectively). The cortico-therapy showed to be a safe method with no side effects on treated animals, representing an adequate choice for animals... (Complete abstract, click electronic address below).

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-25T16:41:27Z No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-31T19:17:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:17:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_AdalmyrMoraisBorges.pdf: 5438238 bytes, checksum: d936e356826ef0abd06970160cde3b2b (MD5) Previous issue date: 2018-07-25 / O estudo buscou avaliar diferentes alternativas para o congelamento do sêmen de jundiá amazônico e de pintado e a melhoria da qualidade pos-descongelamento, contribuindo para o desenvolvimento de protocolos para as duas espécies. Entre as abordagens avaliadas foram: (1) a caracterização morfológica dos espermatozoides de jundiá amazônico com o uso de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão; (2) a utilização de diferentes agentes crio protetores, para o jundiá amazônico: metanol, dimetilsulfoxido e etilenoglicol a 10%, associados a solução de glicose a 5% e para o pintado: metanol, dimetilsulfoxido e dimetilacetamida a 5%, 7,5% e 10%, associados a solução de BTS a 5%; e (3) a adição de substancias antioxidantes nos meios de congelamento para o pintado: trealose 100 mM, acido ascórbico 1 mM e α-tocoferol 0,1 mM. Para ambas espécies, o sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL e congelado em vapor de nitrogênio, utilizando botijão dry shipper, e descongelado a 40oC por 12 segundos. No jundiá amazônico, o espermatozoide apresentou o comprimento total de 25,46 } 2,54 μm, cabeça esférica (1,51 } 0,18 μm) ausência de acrossoma, peca intermediaria de formato cônico, ligeiramente assimétrica com presença de vesículas, e comprimento de 0,93 } 0,17 μm, e flagelo com arranjo típico e comprimento de 21,48 } 2,45 μm. O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (p<0,05) para duração, vigor e taxa de mobilidade espermática com os crio protetores metanol 10% e dimetilsulfoxido 10% quando comparado com o etilenoglicol 10%. No pintado, o sêmen criopreservado com metanol 7,5% e 10% apresentou valores para duração e taxa de mobilidade maiores (p<0,05) comparado com o dimetilsulfoxido e dimetilacetamida. O tratamento com os três antioxidantes associados proporcionou taxa de mobilidade maior (p<0,05) em relação ao tratamento sem antioxidantes. Para os parâmetros de duração e taxa de mobilidade foi observada interação significativa (p<0,05) entre o acido ascórbico e o α-tocoferol. Assim, os resultados obtidos na criopreservação de sêmen de jundiá amazônico não foram suficientes para estabelecer um protocolo para a espécie. Na criopreservação de sêmen de pintado e recomendado o uso do metanol a 7,5% associado a solução de BTS a 5%, e a adição conjunta dos antioxidantes trealose (100mM), acido ascórbico (1mM) e α-tocoferol (0,1mM). / This study aimed to evaluate different alternatives for the semen freezing of amazon catfish and spotted catfish, contributing to the development of protocols for both species increasing the process efficiency in both species. Among the approaches used are (1) morphological characterization of amazon catfish spermatozoa using scanning and transmission electron microscopy; (2) use of different cryoprotectant agents, 10% methanol, dimethylsulfoxide and ethyleneglycol, associated 5% glucose solution in amazon catfish, and 5%, 7,5% e 10%, methanol, dimethylsulfoxide and dimethyacetamide, associated 5% BTS solution in spotted catfish; and (3) addition of antioxidants in the freezing media, trehalose (100 mM), ascorbic acid (1 mM) and α- tocopherol (0.1 mM) in spotted catfish. In both especies, semen samples were loaded in 0.25 mL plastic straws, frozen in nitrogen vapour (dry shipper) and thawed at 40oC for 12 seconds. In the amazon catfish, fresh spermatozoon was 25.46 } 2.54 μm long, head was spherical (1.51 } 0.18 μm) with no acrosome, midpiece was coneshapped with presence of vesicles, slightly asymmetric, 0.93 } 0.17 μm long and the single fagellum was 21.48 } 2.45 μm long with the typical arrangement. Postthawed semen presented higher values (p<0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO, when compared to 10% ethyleneglycol. In the spotted catfish, the cryopreserved semen with 7,5% and 10% methanol presented higher values (p<0.05) for latency time and motility rate compared to dimethylsulfoxide and dimethyacetamide. The treatment with associated antioxidants provided a higher motility rate (p<0.05) compared to the antioxidant-free treatment. For the parameters of latency time and motility rate, a significant interaction (p<0.05) was observed between ascorbic acid and α-tocopherol. In conclusion, the results observed in semen cryopreservation of amazon catfish were not satisfactory to establish a protocol for the specie. For the semen cryopreservation of spotted catfish, it is recommended the use of 7.5% methanol with the 5% BTS solution and the addition of the antioxidants trehalose (100 mM), ascorbic acid (1 mM) and α-tocopherol (0.1 mM).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-17Bitstream added on 2014-06-13T20:26:15Z : No. of bitstreams: 1 leao_km_dr_botfmvz.pdf: 386064 bytes, checksum: b28e7cb954d9efa0cb24da2fd791dd16 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Em eqüinos existe um grande interesse em se desenvolver e aprimorar técnicas de inseminação artificial que possibilitam a obtenção de bons índices de fertilidade utilizando um baixo número de espermatozóides. O presente trabalho teve como objetivos avaliar: 1) a viabilidade, in vitro, do sêmen congelado de garanhões após a diluição em fluido folicular pré-ovulatório de éguas; 2) a população espermática no oviduto de éguas, utilizando diferentes técnicas de inseminação; 3) a fertilidade de éguas após a utilização de diferentes técnicas de inseminação artificial, utilizando um baixo número de espermatozóides; 4) a reação inflamatória na cavidade peritoneal após as inseminações intrafoliculares e intraperitoneais; 5) averiguar o efeito da presença de espermatozóides dentro do folículo pré-ovulatório, na capacidade de fertilização do oócito. No experimento 1 foram realizadas análises laboratoriais da viabilidade espermática, de sêmen congelado de garanhões sem diluição (GI), diluído em Kenney (GII) e diluído em fluido folicular (GIII). Observou-se que porcentagem de espermatozóides com membrana plasmática íntegra não diferiu significativamente entre os grupos (p>0,05). Também não foi observado diferença estatística (p>0,05) entre os grupos na porcentagem de espermatozóides vivos com membrana acrossomal íntegra. A motilidade total foi significativamente inferior (p<0,05) no grupo em que o sêmen foi diluído em fluido folicular (GIII) apenas no primeiro momento, logo após a diluição (T0). A motilidade progressiva foi significativamente maior (p<0,05) no grupo diluído com Kenney (GII) do que nos demais grupos em T0 e três horas após (T3). A velocidade espermática ao longo de uma trajetória média (VAP) foi significativamente maior (p<0,05) em GIII do que em GI nos momentos T0, após uma (T1) e duas horas (T2) da diluição. / The objective of the present study was to evaluated the viability, in vitro, of stallion frozen semen after dilution in mare's pre-ovulatory follicular fluid; assess sperm population in mares's oviduct using differents artificial insemination techinics; verify the fertility of of differents artificial insemination techinics in mares with low sperm number; assess if mares develop an inflamatory reaction in the peritoneal cavity after intraperitoneal and intrafollicular insemination and to verify if the presence of sperm in pre-ovulatory follicle could interfere on oocyte fertilization capacity. In experiment 1, frozen-thawed semen viability was evaluated without dilution (GI) and after dilution with Kenney or Mare's pre-ovulatory follicular fluid. The percentage of sperm with plasmatic membrane integrity was not different between the groups (p>0,05). No statistical difference (p>0,05) was observed between the groups in percentage of live sperm with intact acrosome. Total motility (MT) was significantly lower (p<0,05) in follicular fluid group (GIII) just in the first moment (T0). Progressive motility was significantly higher (p<0,05) in group diluted with Kenney (GII) than the other groups in T0 and 3 hours after (T3). Average path velocity (VAP) was significantly higher (p<0,05) in GIII than GI in moments T0, T1 and T2. Straight line velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL) and Beat cross frequence (BCF) were significantly lower (p<0,05) in GI in moments T0, T1 and T2, when compared with GIII. No statistical difference (p>0,05) were observed in amplitud of lateral head (ALH), straightness (STR) and percentage of sperm with linear (LIN) and rapid (RAP) movement between GI and GIII in any moment. In T3 no statistical difference was observed (p>0,05) between all groups in any motility parameters analyzed.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Fabrícia da Silva Costa Feitosa (fabriciascf@gmail.com) on 2010-01-14T20:26:08Z No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) Previous issue date: 2007-07-04 / Este trabalho teve por objetivo avaliar in vitro e pela inseminação artificial (IA) em ovelhas com estro sincronizado o efeito da adição do plasma seminal (PS) na descongelação do sêmen ovino criopreservado em “pellets”. Foram realizados dois trabalhos. No primeiro foi avaliado in vitro a adição do PS. Não houve diferença significativa para o parâmetro de motilidade entre os tratamentos. Mas com relação à integridade do acrossoma a adição do PS proporcionou uma média superior de espermatozóides vivos com acrossoma integro (P<0,05) em relação ao tratamento com PBS nas 2 e 6 horas de incubação. No segundo trabalho foi realizado a avaliação in vitro e in vivo com IA em ovelhas com estro sincronizado. Os resultados in vitro confirmaram os resultados encontrados no primeiro trabalho. As IA foram realizadas em tempo fixo a partir das 50 horas após a retirada dos pessários vaginais, pelo método transcervical sem tração. Conforme o grau de penetração do aplicador de sêmen no canal cervical das ovelhas considerou-se três graus de profundidade caracterizados como: grau 1: superficial; grau 2: intermediário; grau 3: profundo. Como grupo controle 61 ovelhas foram inseminadas com sêmen fresco/diluído com solução salina fosfatada (PBS). Das 100 restantes, metade foi inseminada com sêmen congelado/descongelado com PBS e a outra metade com sêmen congelado/descongelado com PS. Após 45 dias da IA, foi realizado o diagnóstico de prenhez, por ultra-sonografia. As ovelhas inseminadas apresentaram os percentuais de prenhez de 60,0% (50/30), 74,0% (50/38) e 67,2% (61/41), respectivamente, para sêmen congelado/descongelado, com PBS, com PS e fresco/diluído. Os índices de prenhez não diferiram entre os tratamentos (PBS/PS/FRESCO) nos graus 1 e 2 de penetração. No entanto, as percentagens de prenhez diagnosticadas nas ovelhas inseminadas com sêmen fresco (95,6%) e com sêmen congelado com PS (94,1%) foram superiores as obtidas com sêmen congelado com PBS (60,0%; P<0,05) no grau 3 de penetração. Tendo como base os resultados obtidos, conclui-se que, o sêmen congelado utilizado via cervical, adicionado de PS obteve índices de gestação satisfatórios no mesmo nível que o sêmen fresco, é capaz de proporcionar os mesmos índices obtidos com o sêmen fresco e realizar um efeito protetor nos espermatozóides contra a reação precoce do acrossoma. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of the present experiment was to evaluate in vitro and artificial insemination (AI) in sheep with synchronized estrus the effect of addition of seminal plasma in ram semen frozen-thawed criopreserved at pellets. Two works were made. On the first was evaluate the addition of seminal plasma in vitro. To motility there wasn’t difference among treatments. But about the acrossome intact the addition of seminal plasma had a higher average of spermatozoa alives with acrossome intact (P<0,05) than PBS treatment at 2 and 6 hours of incubation period. On the second experiment was evaluate in vitro and in vivo with artificial insemination in sheep with synchronized estrus. The results in vitro confirmed the results found in the first experiment. The AI was in fixed time, at 50 hours after removing the vaginal device, by the method trans-cervical without traction. The penetration degree of the semen applicator in the ewe cervical channel was classified as following: degree 1: superficial; degree 2: intermediate; degree 3: deep. In control group 61 ewes were inseminated with fresh semen diluted with PBS and the other 100, half ewes were inseminated with frozen-thawed semen with PBS, and the other half ewes was inseminated with frozen-thawed semen with seminal plasma. The diagnosis of pregnancy was performed 45 days after AI with ultrasound. The pregnancy rate was 60.0% (50/30), 74.0% (50/37) and 67.2% (61/41), respectively for frozen semen and thawed without seminal plasma, with seminal plasma and fresh semen. The pregnancy rate did not differ among treatments in degrees 1 and 2. However, the pregnancy in ewes inseminated with fresh semen (95.6%) and with frozen-thawed semen with seminal plasma (94.1%) were higher than with frozen-thawed semen without plasma (60.0%; P<0.05) in degree 3. Based on results, the conclusion is, frozen semen additioned of seminal plasma used at cervical way had satisfactory pregnancy rates similar that fresh semen and had a protector effect on spermatozoa against the premature acrossome reaction.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-graduação em Ciências Animais, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-23T14:52:03Z No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-13T16:34:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T16:34:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_NathaliaHackMoreira.pdf: 1519593 bytes, checksum: 340e21c403b82dcc31053576b92f741d (MD5) / A inseminação artificial é uma poderosa ferramenta para os programas de melhoramento genético e conservação de raças, porém, é menos difundida em ovinos. Isso ocorre devido aos resultados irregulares e baixos de fertilidade após a sincronização do estro e inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Um dos fatores que pode contribuir para a piora nesse resultado é a assincronia do estro e da ovulação após o tratamento hormonal. Neste estudo objetivou-se avaliar diferentes alternativas para aumentar a eficiência dos protocolos de sincronização do estro utilizados em programas de IATF em ovinos. Entre as abordagens utilizadas estão (1) o uso de diferentes promotores do desenvolvimento folicular (eCG e FSH:LH) em diferentes épocas do ano (períodos chuvoso e seco); (2) o uso do protocolo longo com MAP em diferentes épocas do ano (períodos chuvoso, seco e transições); (3) o uso do estradiol associado a progesterona (4) o uso de diferentes doses de eCG e momentos de aplicação; e (5) o uso de dois protocolos curtos com diferentes fontes de progesterona (MAP e P4). Em todos os experimentos, diferentes avaliações quanto a manifestação estral, condição folicular, lutea e hormonal foram realizadas para determinar a eficiência das alternativas propostas. Apesar do protocolo longo com MAP apresentar um melhor desempenho na sincronia do estro e/ou ovulação na época seca do que na época chuvosa, os resultados mostraram que esse protocolo não sincroniza eficientemente a ovulação, o que poderia afetar negativamente as taxas de fertilidade após IATF. A sincronia do estro e ovulação também é prejudicada quando se utiliza 400 UI de eCG, 24 horas antes da remoção do pessário de progesterona. O uso de diferentes fontes de estradiol, em conjunto com a progesterona, auxilia no recrutamento de uma nova onda e padroniza a condição folicular ovariana, portanto essa abordagem pode ser usada em estudos futuros, para atingir essa finalidade. A utilização da progesterona tanto em um protocolo longo, quanto no curto, resulta em uma boa sincronia da ovulação, contudo, o protocolo curto parece apresentar uma maior eficiência em sincronizar o tempo das ovulações. Essa abordagem em um programa de IATF com a utilização de sêmen congelado, não melhora as taxas de fertilidade utilizando a inseminação artificial por via cervical superficial, contudo, quando a inseminação é realizada por via laparoscópica resulta em valores próximos a 70% de taxa de fertilidade. / Artificial insemination is a powerful tool for breeding programs and conservation of breeds, however, it is less widespread in sheep. This is due to irregular and low fertility results after estrus synchronization and fixed-time artificial insemination (FTAI). One of the factors that may contribute to the decline of this result is the is the asynchrony of estrus and ovulation after hormonal treatment. This study aimed to evaluate different alternatives to increase the efficiency of estrus synchronization protocols used in FTAI programs in sheep. Among the approaches used are (1) the use of different promoters of follicular development (eCG and FSH:LH) in different seasons (rainy and dry); (2) using the long-term protocol with MAP in different seasons (rainy, dry and transitions); (3) the use of estradiol associated with progesterone (4) the use of different doses of eCG and application times; and (5) the use of two short-term protocols with different sources of progesterone (MAP and P4). In all experiment, different assessments of the estrous manifestation, follicular, luteal and hormonal condition were performed to determine the effectiveness of the proposed alternatives. Despite long-term protocol with MAP perform better in synchrony of estrus and/or ovulation in the dry season than in the rainy season, the results showed that this protocol does not effectively synchronize ovulation, which could negatively affect fertility rates after TAI. Synchrony of estrus and ovulation is also impaired when using 400 UI of eCG 24 hours before removal of progesterone pessaries. The use of different sources of estradiol in combination with progesterone, helps to recruit a new wave and standardizes the ovarian follicular condition, so this approach can be used in future studies to achieve this purpose. The use of progesterone in both a long protocol as in short, results in a good synchronization of ovulation, however, the short protocol seems to have a higher efficiency in synchronizing the time of ovulation. This approach in a FTAI program with frozen semen does not improve fertility rates using superficial cervical artificial insemination, however, when insemination is performed laparoscopically it results in values close to 70% fertility rate.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_rafael_tonieto.pdf: 295673 bytes, checksum: cde6d39f839653a9d49de2dfbef8ef62 (MD5) Previous issue date: 2008-10-24 / The low pregnancy rates obtained with artificial insemination using frozen ram semen make its routine use unfeasible. As the cryopreservation process causes injuries in the sperm cells, the development of extenders that include state-of-the art cryoprotectant solutions is justified. This study tested the inclusion of low density lipoprotein (LDL) and trehalose in extenders for freezing ram semen, by evaluating parameters of post-thawing semen quality. In the first experiment, 3 treatments were compared: Tris including 20% egg yolk and 5% glycerol (T1); Tris including 10 mM trehalose (T2); and T1 including 50 mM trehalose (T3). Sperm motility did not differ across treatments (P > 0.05), but T2 presented higher proportion of sperm cells having membrane integrity (P < 0.05). In the second experiment, 4 treatments were compared: Tris including 20% egg yolk (T1); T1 including 5% glycerol (T2); T1 including 100 mM trehalose (T3); and t1 including 100 mM trehalose and 5% glycerol (T4). Sperm motility and membrane integrity were higher for T2, T3 and T4 than for T1 (P < 0.05), but acrossome integrity did not differ among treatments (P > 0.05). In the third experiment, four treatments were compared: Tris including 20% egg yolk and 100 mM trehalose; and T1 with the replacement of egg yolk by LDL including 5% glycerol (T2); 100 mM trehalose (T3); and 100 mM trehalose and 5% glycerol (T4). Sperm motility and membrane integrity were higher for T2 and T3 than for the other treatments (P < 0.05), but there was no further difference among the LDL treatments (P > 0.05). Acrossome integrity did not differ across treatments (P > 0.05). Therefore, the inclusion of LDL and trehalose as cryoprotectants in extenders for frozen ram semen was associated with improvement in post-thawing sperm motility and membrane integrity. / Em ovinos, as baixas taxas de prenhez obtidas com inseminação artificial com sêmen congelado inviabilizam o seu uso como rotina. Provocando o processo de criopreservação lesões nos espermatozóides, o desenvolvimento de diluentes que incluam crioprotetores de excelência se justifica. Este trabalho testou a inclusão da lipoproteína de baixa densidade (LDL) e da trealose em diluentes para congelamento de sêmen ovino, a partir da avaliação de parâmetros de qualidade seminal pós-descongelamento. No primeiro experimento, foram comparados 3 tratamentos: Tris com 20% de gema de ovo e 5% de glicerol (T1); Tris com 100 mM de trealose (T2); e T1 com 50 mM de trealose (T3). A motilidade não diferiu entre os tratamentos (P > 0,05), mas o T2 apresentou maior proporção de gametas com membranas íntegras (P < 0,05). No segundo experimento, foram comparados 4 tratamentos: Tris com 20% de gema de ovo (T1); T1 com 5% de glicerol (T2); T1 com 100 mM de trealose (T3); e T1 com 100 mM de trealose e 5% de glicerol (T4). A motilidade e a integridade da membrana espermática do T2, T3 e T4 foram superiores a do T1 (P > 0,05), mas a integridade do acrossoma não diferiu (P > 0,05) em todos os tratamentos. No terceiro experimento, foram comparados 4 tratamentos: Tris com 20% de gema de ovo e 110 mM de trealose (T1); Tris com 8% de LDL, incluindo 5% de glicerol (T2); Tris com 8% de LDL, incluindo 110 mM de trealose (T3); Tris com 8% de LDL, incluindo 110 mM de trealose e 5% de glicerol (T4). A motilidade dos espermatozóides para o T2 e para o T3 foram superiores aos demais tratamentos (P < 0,05), mas, com relação à integridade de membrana, não houve diferença entre os tratamentos com LDL (P > 0,05). A integridade do acrossoma não diferiu entre os tratamentos (P > 0,05). Portanto, o uso de LDL e trealose como crioprotetores foi associado com melhorias na motilidade e na integridade da membrana espermática, no sêmen ovino, após o descongelamento.

A criopreservação dos espermatozóides eqüinos gera alterações nas membranas semelhantes às que ocorrem durante o processo de capacitação (criocapacitação). Sabe-se que o plasma seminal possui fatores decapacitantes. Além disso, é citado na literatura a possibilidade melhorar a preservação dos espermatozóides com membrana plasmática íntegra e motilidade, após refrigeração ou criopreservação, quando adicionado plasma seminal de animais que apresentam boa resposta à congelação ao sêmen de animais que apresentam espermatozóides com baixa capacidade de congelação. Assim, o presente experimento verificou se a criopreservação gera modificações semelhantes à capacitação e se a adição ao sêmen pós-descongelação de plasma seminal autólogo ou adquirido de um animal com boa resposta à congelação (homólogo) diminuía estes efeitos. Para isso, foram realizadas 5 colheitas de sêmen de 4 garanhões. O sêmen in natura foi avaliado e então, processado e submetido à congelação. Após a descongelação o sêmen foi novamente avaliado e então dividido em três tratamentos: adicionado de diluidor de criopreservação sem crioprotetor (DIL), deste com 20 % (v/v) de plasma seminal homólogo (PH) ou com 20 % (v/v) de plasma seminal autólogo (PA). Em seguida, o sêmen foi incubado em banho-Maria (37°C) e submetido as avaliações nos três diferentes períodos de amostragem (0, 60 e 120 minutos de incubação). As avaliações do sêmen consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA) e nas análises por citometria de fluxo da reação acrossomal, do potencial de membrana mitocondrial, da estabilidade da membrana plasmática, da peroxidação lipídica e na detecção da fosforilação do aminoácido tirosina presente na superfície da célula espermática. As variáveis foram submetidas à análise de variância e ao teste LSD para comparação das médias, ao nível de 5 % de significância. A criopreservação não aumentou a população de células viáveis com membrana acrossômica reagida, nem a população de células viáveis com aumento na desordem da membrana plasmática (capacitadas). Entretanto, a criopreservação levou a uma redução na quantidade de células com potencial de membrana mitocondrial e aumentou a peroxidação das membranas, além de induzir o aumento na fosforilação de proteínas presentes na superfície da célula. A criopreservação ocasionou uma redução de todas as variáveis analisadas pelo CASA, incluindo a população identificada como hiperativada. A adição do plasma seminal, indiferentemente da origem, melhorou a integridade da membrana plasmática, reduziu a população com aumento na desordem da membrana plasmática (capacitados), além de reduzir a quantidade de proteínas fosforiladas na superfície do espermatozóide. Porém esta melhora só foi encontrada nas análises iniciais (tempo 0), com o tempo o plasma seminal mostrou não ser um meio adequado para se manter o sêmen armazenado levando a um prejuízo na maioria das variáveis estudadas. Baseado nos resultados, pode-se sugerir a adição de plasma seminal com o intuito de reduzir os efeitos da criocapacitação. Contudo, ao adicionar o plasma seminal ao sêmen, este deve ser depositado no trato reprodutivo da fêmea o mais breve possível. / Cryopreservation of equine spermatozoa leads to capacitation-like changes (cryocapacitation). Seminal plasma contains decapacitating factors. Moreover, it has been known that addition of seminal plasma from stallions with good post-thaw semen quality to semen of stallions with low post-thaw semen quality preserve progressive motility and membrane integrity better. Therefore, this study was intended to find out whether the cryopreservation process induces capacitation-like changes and if addition of autologous seminal plasma or seminal plasma from stallion with good post-thaw semen quality (homologous) reduces cryocapacitation effects. For this, five ejaculates were obtained from each of four mature stallions. Samples of in natura semen were analyzed, and submited to cryopreservation. Post-thawed semen was analyzed again so divided in three treatments: only cryopreservation media without cryoprotectants, cryopreservation media without cryoprotectants added 20 % (v/v) of seminal plasma homologous, and cryopreservation media without cryoprotectants added 20 % (v/v) of seminal plasma autologous. All samples were maintained in water bath (37°C) for 120 minutes, while semen analyzes were assessed at time 0, 60 and 120 min. The assessment of each sample was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA) and flow cytometry analyzes of acrosome reaction, mitochondrial potential, increased membrane fluidity, lipid peroxidation and degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface. The variables were submitted to analysis of variance and LSD test at 5% level of significance. Cryopreservation did not increase viable cells with acrosome reaction, neither viable cells with increased membrane fluidity (capacitated). However, cryopreservation led an decrease of cell with mitochondrial potential and an increased in lipid peroxidation, besides increase tyrosine phosphorylation of the equine sperm surface proteins. The cryopreservation caused a reduction of all variables assessed by CASA, including hyperactivated cells. Seminal plasma addition, regardless of origin, improved integrity of plasma membrane, reduced number of viable cells with increased membrane fluidity, besides decrease phosphorylation of sperm surface proteins. Nevertheless, the improved created only was found in the initial analysis (time 0), seminal plasma shown a harmful effect in maintenance of sperm during incubation. Incubation of sperm in seminal plasma damaged majority of variables assessed. Based on results, seminal plasma could be added to post-thawed semen to decrease the cryocapacitation effects. However, post-thawed semen has to be deposited as soon as possible in female reproductive tract when the seminal plasma is added.

A criopreservação dos espermatozóides eqüinos gera alterações nas membranas semelhantes às que ocorrem durante o processo de capacitação (criocapacitação). Sabe-se que o plasma seminal possui fatores decapacitantes. Além disso, é citado na literatura a possibilidade melhorar a preservação dos espermatozóides com membrana plasmática íntegra e motilidade, após refrigeração ou criopreservação, quando adicionado plasma seminal de animais que apresentam boa resposta à congelação ao sêmen de animais que apresentam espermatozóides com baixa capacidade de congelação. Assim, o presente experimento verificou se a criopreservação gera modificações semelhantes à capacitação e se a adição ao sêmen pós-descongelação de plasma seminal autólogo ou adquirido de um animal com boa resposta à congelação (homólogo) diminuía estes efeitos. Para isso, foram realizadas 5 colheitas de sêmen de 4 garanhões. O sêmen in natura foi avaliado e então, processado e submetido à congelação. Após a descongelação o sêmen foi novamente avaliado e então dividido em três tratamentos: adicionado de diluidor de criopreservação sem crioprotetor (DIL), deste com 20 % (v/v) de plasma seminal homólogo (PH) ou com 20 % (v/v) de plasma seminal autólogo (PA). Em seguida, o sêmen foi incubado em banho-Maria (37°C) e submetido as avaliações nos três diferentes períodos de amostragem (0, 60 e 120 minutos de incubação). As avaliações do sêmen consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA) e nas análises por citometria de fluxo da reação acrossomal, do potencial de membrana mitocondrial, da estabilidade da membrana plasmática, da peroxidação lipídica e na detecção da fosforilação do aminoácido tirosina presente na superfície da célula espermática. As variáveis foram submetidas à análise de variância e ao teste LSD para comparação das médias, ao nível de 5 % de significância. A criopreservação não aumentou a população de células viáveis com membrana acrossômica reagida, nem a população de células viáveis com aumento na desordem da membrana plasmática (capacitadas). Entretanto, a criopreservação levou a uma redução na quantidade de células com potencial de membrana mitocondrial e aumentou a peroxidação das membranas, além de induzir o aumento na fosforilação de proteínas presentes na superfície da célula. A criopreservação ocasionou uma redução de todas as variáveis analisadas pelo CASA, incluindo a população identificada como hiperativada. A adição do plasma seminal, indiferentemente da origem, melhorou a integridade da membrana plasmática, reduziu a população com aumento na desordem da membrana plasmática (capacitados), além de reduzir a quantidade de proteínas fosforiladas na superfície do espermatozóide. Porém esta melhora só foi encontrada nas análises iniciais (tempo 0), com o tempo o plasma seminal mostrou não ser um meio adequado para se manter o sêmen armazenado levando a um prejuízo na maioria das variáveis estudadas. Baseado nos resultados, pode-se sugerir a adição de plasma seminal com o intuito de reduzir os efeitos da criocapacitação. Contudo, ao adicionar o plasma seminal ao sêmen, este deve ser depositado no trato reprodutivo da fêmea o mais breve possível. / Cryopreservation of equine spermatozoa leads to capacitation-like changes (cryocapacitation). Seminal plasma contains decapacitating factors. Moreover, it has been known that addition of seminal plasma from stallions with good post-thaw semen quality to semen of stallions with low post-thaw semen quality preserve progressive motility and membrane integrity better. Therefore, this study was intended to find out whether the cryopreservation process induces capacitation-like changes and if addition of autologous seminal plasma or seminal plasma from stallion with good post-thaw semen quality (homologous) reduces cryocapacitation effects. For this, five ejaculates were obtained from each of four mature stallions. Samples of in natura semen were analyzed, and submited to cryopreservation. Post-thawed semen was analyzed again so divided in three treatments: only cryopreservation media without cryoprotectants, cryopreservation media without cryoprotectants added 20 % (v/v) of seminal plasma homologous, and cryopreservation media without cryoprotectants added 20 % (v/v) of seminal plasma autologous. All samples were maintained in water bath (37°C) for 120 minutes, while semen analyzes were assessed at time 0, 60 and 120 min. The assessment of each sample was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA) and flow cytometry analyzes of acrosome reaction, mitochondrial potential, increased membrane fluidity, lipid peroxidation and degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface. The variables were submitted to analysis of variance and LSD test at 5% level of significance. Cryopreservation did not increase viable cells with acrosome reaction, neither viable cells with increased membrane fluidity (capacitated). However, cryopreservation led an decrease of cell with mitochondrial potential and an increased in lipid peroxidation, besides increase tyrosine phosphorylation of the equine sperm surface proteins. The cryopreservation caused a reduction of all variables assessed by CASA, including hyperactivated cells. Seminal plasma addition, regardless of origin, improved integrity of plasma membrane, reduced number of viable cells with increased membrane fluidity, besides decrease phosphorylation of sperm surface proteins. Nevertheless, the improved created only was found in the initial analysis (time 0), seminal plasma shown a harmful effect in maintenance of sperm during incubation. Incubation of sperm in seminal plasma damaged majority of variables assessed. Based on results, seminal plasma could be added to post-thawed semen to decrease the cryocapacitation effects. However, post-thawed semen has to be deposited as soon as possible in female reproductive tract when the seminal plasma is added.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-27Bitstream added on 2014-06-13T21:08:05Z : No. of bitstreams: 1 villaverde_aisb_me_botfmvz.pdf: 995611 bytes, checksum: 95781868451ff6d5037fde5a7435a721 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência das técnicas de inseminação artificial intra-vaginal (IAIV) e intra-uterina (IAIU) com sêmen congelado/descongelado em gatos domésticos através da taxa de prenhez. O ejaculado de dois gatos adultos foi colhido com vagina artificial e o sêmen avaliado para motilidade (CASA), morfologia espermática e integridade de membrana plasmática. Após diluição em meio TRIS/OEP (4% de glicerol), as amostras foram envasadas em palhetas francesas de 0,25 mL (25 x 106 de espermatozóides móveis) as quais, após 20 minutos à 5ºC, permaneceram por 15 minutos em vapor de nitrogênio líquido, sendo posteriormente mergulhadas. Para cada IA, quatro palhetas do mesmo gato foram descongeladas por 12 segundos à 46ºC e centrifugadas a 250xg por 8 minutos. O pellet ressuspendido em 100 æL do meio foi analisado como descrito anteriormente. Nas gatas, o estro e a ovulação foram induzidos com 100 UI de eCG e, após 84 horas, 100 UI de hCG. Após 30 horas da indução da ovulação, as gatas foram inseminadas pelo método intra-uterino ou intra-vaginal, com o sêmen obtido do gato A ou B (n=8 gatas para cada método de IA). Para a análise estatística os testes de Tukey e de Wilcoxon foram utilizados para as variáveis de qualidade espermática, enquanto o teste de Fisher foi usado para comparar os métodos de IA, estabelecendo diferença significativa quando p<0,05. Embora tenha sido observada uma queda acentuada de motilidade, integridade de acrossomo e integridade de membrana plasmática nas amostras seminais descongeladas de ambos os gatos, um índice de prenhez de 75% foi alcançado quando utilizado o método de IA intra-uterino, contra 0% com o método intra-vaginal. / The aim of this study was to compare the efficiency of the intravaginal and the intrauterine artificial insemination methods using domestic cat frozen/thawed semen by determining the pregnancy rate. The sperm was collected from two tom cats using an artificial vagina and the samples were assessed for motility (CASA), sperm morphology and plasma membrane integrity. After dilution with TRIS/OEP (4% of glycerol), the sperm samples were loaded into 0.25 mL straws (25 x 106 of sperm cells presenting motility) which, after 20 minutes under 5ºC, were placed in liquid nitrogen vapour for 15 minutes, being afterwards immersed. For each AI, four straws from the same male were thawed during 12 seconds at 46ºC and centrifuged at 250xg for 8 minutes. The pellet was ressuspended in 100 æL of the extender and analyzed as described above. In the queens, estrus and ovulation were induced using 100 UI of eCG and, after 84 hours, 100 UI of hCG. After 30 hours from the ovulation induction, the females were inseminated by the intrauterine or by the intravaginal methods, using the semen obtained by male A or B (n=8 females for each AI method). For statistical analysis the Tukey test and the Wilcoxon test were used for the sperm quality results, while the Fisher test was used to compare the two AI methods, with p<0.05 taken as significant. Although a pronounced decrease in motility, acrosome integrity and plasma membrane integrity were observed for the sperm samples from both cats, a pregnancy rate of 75% was achieved when using the intrauterine AI method, against 0% with the intravaginal AI method.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_karina_lemos_goularte.pdf: 361604 bytes, checksum: c1cf54e456adc029afb9c9829a7d4c67 (MD5) Previous issue date: 2009-03-11 / The expansion of artificial insemination (AI) programs with frozen ram semen has been limited by the need of intrauterine semen deposition and by the inconsistency of the association between the conventional methods used to evaluate semen quality and in vivo fertility. An alternative to improve the efficiency of AI programs would be the profiling of the protein content of the seminal plasma to search for fertility markers. The objective of the present study was to study the protein profile of ram seminal plasma and to evaluate its association with parameters of frozen semen quality. Ejaculates were split in two samples. The first sample was frozen in two extenders: T1 (Tris + egg yolk + glycerol); and T2 (Tris + egg yolk + threalose). The second sample was submitted to unidimensional electrophoresis to identify proteins in the seminal plasma. The presence of the identified proteins was associated with parameters of semen quality: sperm motility and membrane integrity, both prefreezing and post-thawing, and post-thawing acrosome integrity. Post-thawing sperm motility did not differ (P > 0.05) for T1 (18.6 ± 2.3) and T2 (23.4 ± 2.7). Post-thawing sperm membrane integrity was similar (P > 0.05) for T1 (12.6 ± 1.4) and T2 (15.3 ± 1.7). There was also no difference (P > 0.05) between T1 and T2 with regard to postthawing acrosome integrity (23.0 ± 1.5 e 21.3 ± 1.8, respectively). An intra-ram analysis identified 17 proteins associated with the evaluated parameters: 10 of them presented similar associations for distinct rams. In the inter-ram analysis, an 11 kDa band was associated with lower pre-freezing sperm membrane integrity, a 24 kDa band was related to reduced post-thawing sperm motility and membrane integrity, and a 45 kDa band was associated with lower pre-freezing sperm membrane integrity (P < 0.05). Thus, those three protein factors would be potential markers for ram infertility with frozen semen because their absence was associated with improved semen quality, regardless of individual ram effects. / A expansão de programas de inseminação artificial (IA) em ovinos com sêmen congelado tem sido limitada pela necessidade de deposição intrauterina do sêmen e pela associação inconsistente entre as técnicas convencionais de avaliação da qualidade do sêmen e a fertilidade in vivo. Uma das alternativas para incrementar a eficiência de programas de IA seria o mapeamento do conteúdo protéico do plasma seminal, em busca de marcadores para fertilidade. O objetivo do presente trabalho foi estudar o perfil protéico do plasma seminal de machos ovinos e avaliar a sua associação com a qualidade de amostras de sêmen congelado. Os ejaculados dos machos ovinos foram divididos em duas alíquotas. A primeira foi utilizada para criopreservação, em dois diluentes: D1 (tris+gema de ovo+glicerol); e D2 (tris+gema de ovo+trealose). A segunda alíquota foi usada para a busca de proteínas do plasma seminal através da eletroforese unidimensional. A presença ou ausência das proteínas foi associada com parâmetros de qualidade seminal: motilidade e integridade da membrana espermática, ambas pré-congelamento e pósdescongelamento, e integridade de acrossoma pós-descongelamento. A motilidade espermática pós-descongelamento não diferiu (P > 0,05) entre D1 (18,6 ± 2,3) e D2 (23,4 ± 2,7). A integridade da membrana espermática pós-descongelamento foi semelhante (P > 0,05) para D1 (12,6 ± 1,4) e D2 (15,3 ± 1,7). Também não houve diferença (P > 0,05) entre D1 e D2 quanto à integridade do acrossoma pósdescongelamento (23,0 ± 1,5 e 21,3 ± 1,8, respectivamente). A análise intra-machos identificou 17 bandas proteicas associadas com os parâmetros avaliados, sendo que 10 destas associaram-se da mesma maneira, em diferentes machos. Na análise inter-machos, a banda com 11 kDa foi associada com menor integridade da membrana espermática pré-congelamento, a banda com 24 kDa foi associada com a redução na motilidade e na integridade da membrana pós-descongelamento e a banda com 45 kDa foi associada com menor integridade da membrana précongelamento (P < 0,05). Portanto, essas três bandas protéicas seriam potenciais marcadores para infertilidade com sêmen congelado, pois sua ausência foi associada com incremento na qualidade seminal, independentemente do efeito dos machos doadores de sêmen.