CATUNDA, Ana Glaudia Vasconcelos.Composição bioquímica do plasma seminal de caprinos sem padrão racial definido (SPRD) em clima tropical úmido.2007. 51f. Dissertação(Mestrado em Zootecnia)- Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Maria Naires Souza (marianaires@ufc.br) on 2011-11-18T23:07:31Z No. of bitstreams: 1 2007-dis-agvcatunda.pdf: 221535 bytes, checksum: 6f77da2ffca14b30f7c8abf6781dd60d (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2011-11-21T11:22:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007-dis-agvcatunda.pdf: 221535 bytes, checksum: 6f77da2ffca14b30f7c8abf6781dd60d (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-21T11:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-dis-agvcatunda.pdf: 221535 bytes, checksum: 6f77da2ffca14b30f7c8abf6781dd60d (MD5) Previous issue date: 2007-02-16 / Goat seminal plasma (SP) biochemical composition observed to very in high latitudes due to seasonality. In low latitudes this variation has been attributed only to the low nutritional value of diets in the dry period. The aims of this study were to evaluate the occurrence of variation in the SP biochemical composition of SPRD goats breed intensively in the State of Ceará, Brazil. The experiment was carried out in the facilities of Dep. of Zootecnia of the Federal University of Ceará - UFC. Twenty male SPRD goats were used, they were fed according to NRC/goats (1981). Ejaculated were collected weekly in artificial vagina and eletroejaculador, and evaluated, measure, centrifuged and separated the SP (sobreswing) from the cells spermatic (precipitate), being stored in eppendorff tubes at -18°C, during one year (Sep/2005 the Aug/2006). For analyses purpose weekly sample were mixed to constitute a monthly individual pool, from which were evaluated the concentrations of Ca, P, Mg, PTt, CA and fructose. Significant variation was observed (p <0,05) in the biochemical composition of the SP among the periods of the year, registering the highest levels of biochemical parameters in the rainy period. The individual variation was significant (p <0,01), only having significant interaction animal/period to the fructose (p <0,05). The study of correlations showed significant associations (p <0,0001) among PTt, CA and fructose, among the ejaculate volume and of SP with the components, and of temperature, humidity, precipitation and ITU with the biochemical parameters of the SP. It is concluded that fructose is a good biochemical parameter for the study of seminal quality. However, more studies are necessary to identify the causes of this variation, and to better understand the role of the fructose, citric acid and total proteins in the metabolism spermatic / Em altas latitudes tem-se observado uma variação na composição bioquímica do plasma seminal (PS) de caprinos por influência da estacionalidade. Em baixas latitudes essa variação tem sido atribuída unicamente ao baixo valor nutricional das dietas na época seca. Objetivou-se por meio deste estudo avaliar a ocorrência de variação na composição bioquímica do PS de caprinos SPRD criados intensivamente no Estado do Ceará, Brasil. O experimento foi conduzido nas instalações do Dep. de Zootecnia da Universidade Federal do Ceará – UFC. Foram utilizados 20 bodes SPRD, alimentados segundo o NRC/caprinos (1981). Os ejaculados foram coletados semanalmente em vagina artificial e letroejaculador e em seguida avaliados, mensurados, centrifugados e separados o PS (sobrenadante) das células espermáticas (precipitado), sendo acondicionados em tubos eppendorffs a -18°C, durante um ano (Set/2005 a Ago/2006). Para realização das análises as amostra semanais passaram a constituir um pool individual mensal, onde foram avaliadas as concentrações de Ca, P, Mg, PTt, AC e frutose. Foi observada variação significativa (p<0,05) na composição bioquímica do PS entre as épocas do ano, registrando-se os níveis mais elevados dos parâmetros bioquímicos na época chuvosa. A variação individual foi significativa (p<0,01), só havendo interação significativa, animal/época para a frutose (p<0,05). O estudo das correlações mostrou associações significativas (p<0,0001) entre PTt, AC e frutose, entre os volumes de ejaculado e de PS, com os componentes, e de temperatura, umidade, precipitação e ITU, com os parâmetros bioquímicos do PS. Concluindo-se que a frutose é um bom parâmetro bioquímico para o estudo da qualidade seminal, entretanto, mais estudos são necessários para identificar as causas desta variação, e compreender melhor o papel da frutose, acido cítrico e proteínas totais no metabolismo espermático

VILAR, E. L. Quantificação e efluxo de colesterol total e HDL dos espermatozóides do ejaculado de caprinos. 2010. 52 f. Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-12-10T19:05:38Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_elvilar.pdf: 952843 bytes, checksum: 18be34474bf83abf639d5c19e3054db8 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-03-18T23:20:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_elvilar.pdf: 952843 bytes, checksum: 18be34474bf83abf639d5c19e3054db8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-18T23:20:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_elvilar.pdf: 952843 bytes, checksum: 18be34474bf83abf639d5c19e3054db8 (MD5) Previous issue date: 2010 / The objective was to measure the rate of cholesterol present in seminal plasma (SP) goats, and verify whether cholesterol efflux from sperm to the PS, and as such event occurs individually after one hour incubation at 38 ° C. The experiment was conducted at the Laboratory for Animal Reproduction, UFC. Eight goats were used intensively reared and fed according to NRC / goat (1981). The ejaculates collected were divided into three aliquots. The was first centrifuged to obtain the PS, which was packed in tubes eppendorfs and stored at -18 ° C. The second aliquot was incubated at 38 ° C / 1 h and then centrifuged to obtain the PS. These two samples were analyzed the level of total cholesterol and HDL. The third aliquot was diluted in sodium citrate - glucose and subjected to heat resistance test for evaluation of force, mobility, normal sperm cells and morphological changes in total. The design trial was a randomized block design to data analysis was used The statistical program SAS @ 9.0. There were significant reductions of force and motility between incubation times. However, in most animals parameter stabilization occurred after 60 min of incubation. Small difference was observed among individuals for these parameters. Cholesterol Total found in PS of goats increased significantly after incubation in 50% of animals. Before and after incubation, the level of total and HDL cholesterols ranged significantly among individuals. The proportion of HDL cholesterol in the ER was very high values ​​were 83.79% and 78.41% respectively. We observed a association (p <0.01) positive and moderate between the proportion of HDL and sperm vigor (r = 0.30) and between the motility and the proportion of HDL was considered small (r = 0.19). It was concluded that PS goats contains a high proportion of cholesterol and cholesterol This is the main HDL. / Objetivou-se mensurar a taxa de colesterol presente no plasma seminal (PS) de caprinos, e verificar se ocorre efluxo de colesterol dos espermatozóides para o PS, e como tal evento ocorre individualmente após uma hora de incubação a 38 °C. O experimento foi conduzido no Laboratório de Estudos em Reprodução Animal da UFC. Foram utilizados oito bodes criados intensivamente e alimentados segundo o NRC/caprinos (1981). Os ejaculados coletados foram divididos em três alíquotas. A primeira foi centrifugada para obtenção do PS, que foi acondicionado em tubos eppendorfs e armazenado a -18 °C. A segunda alíquota foi incubada a 38 °C / 1 h e depois centrifugada para obtenção do PS. Essas duas alíquotas foram analisadas quanto ao nível de colesterol total e HDL. A terceira alíquota foi diluída em citrato de sódio – glicose e submetida ao teste termorresistência, para avaliação do vigor, motilidade, células espermáticas normais e alterações morfológicas totais. O delineamento experimental empregado foi de blocos casualizados, para a análise dos dados utilizou-se o programa estatístico SAS@ 9.0. Foram observadas diminuições significativas do vigor e da motilidade entre os tempos de incubação. Entretanto, na maioria dos animais ocorreu estabilização dos parâmetros a partir de 60 min de incubação. Pequena diferença foi observada entre os indivíduos para estes parâmetros. O nível de colesterol total encontrados no PS de caprinos aumentou significativamente após a incubação em 50% dos animais. Antes e após a incubação, o nível de colesteróis total e HDL variaram significativamente entre os indivíduos. A proporção de colesterol HDL no PS foi muito elevada, os valores foram 83,79% e 78,41%, respectivamente. Foi observada uma associação significativamente (p<0,01) positiva e moderada, entre a proporção de HDL e o vigor espermático (r = 0,30) e entre a motilidade e a proporção de HDL foi considerada pequena (r = 0,19). Concluiu-se que o PS de caprinos contém uma alta proporção de colesterol e o principal colesterol presente é o HDL.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / As proteÃnas do plasma seminal participam da regulaÃÃo de diversos processos associados à fisiologia reprodutiva. Neste sentido, o presente estudo tem por objetivo avaliar as variaÃÃes do perfil protÃico e determinar se ocorrem mudanÃas na atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT) e superÃxido dismutase (SOD) no plasma seminal de caprinos Saanen criados em clima tropical, em diferentes perÃodos do ano. Amostras de sÃmen de oito caprinos Saanen foram coletadas ao longo de 12 meses e o plasma seminal foi obtido atravÃs de centrifugaÃÃo e submetido à eletroforese bidimensional. Os gÃis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados por meio do aplicativo PDQuest. A atividade antioxidante da CAT e da SOD tambÃm foi determinada no plasma seminal. Avaliou-se as variaÃÃes ao longo do ano no perfil protÃico e atividade enzimÃtica antioxidante atravÃs de delineamento em blocos casualizados. DiferenÃas significativas foram observadas com relaÃÃo Ãs intensidades de 34 âspotsâ dos mapas protÃicos entre os perÃodos do ano. Dentre desses âspotsâ, verificou-se maior nÃmero de âspotsâ que diferiram entre os perÃodos seco e chuvoso, num total de 19 âspotsâ. A expressÃo de âspotsâ protÃicos com valores de kDa e pI equivalente ao das proteÃnas âheat-shock proteinâ 70 kDa, glutamato carboxipeptidase e arilsulfatase A foi maior no perÃodo seco em comparaÃÃo ao chuvoso, enquanto que a clusterina apresentou maior intensidade no perÃodo chuvoso. A atividade enzimÃtica da SOD foi maior no plasma seminal (p < 0,05) no perÃodo de transiÃÃo chuvoso-seco em comparaÃÃo com o perÃodo chuvoso. Verificou-se tambÃm menor atividade da CAT no perÃodo chuvoso quando comparado ao perÃodo seco. Considerando o conjunto de resultados obtidos no presente estudo, conclui-se que as caracterÃsticas seminais, perfil protÃico e atividade de enzimas antioxidantes do plasma seminal de caprinos Saanen criados em clima tropical variam ao longo do ano, sendo registrada a maior intensidade das proteÃnas do plasma seminal e atividade da catalase no perÃodo de maior temperatura ambiente (transiÃÃo seco-chuvoso e seco), coincidente com reduÃÃes na qualidade seminal. / Seminal plasma proteins are involved in the regulation of different mechanisms associated with reproductive physiology. Thus, the present study was designed to investigate the protein profile and determine variations on catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) antioxidant activity on seminal plasma from Saanen goats raised under tropical conditions, in different periods of the year. Semen from eight goats was collected along 12 months (during dry and wet seasons and transition periods), seminal plasma was obtained through by centrifugation and submitted to 2-D electrophoresis, as well as analyses of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) antioxidant activity. Gels were stained with colloidal Coomassie blue, scanned and analyzed using tools of the PDQuest software. Data were analyzed using randomized block designs to evaluate possible variations in the protein profile and antioxidant activity. Intensity of 34 spots of protein maps was significantly different among periods of the year. From these 34 spots, 19 spots were different between the dry and rainy periods. The expression of protein spots with values of kDa and pI similar to heat-shock protein (70 kDa), glutamate carboxypeptidase and arylsulfatase A proteins was higher during the dry period in comparison to rainy season, while the clusterin showed more intensity in the rainy period. The SOD antioxidant activity was higher in the seminal plasma (p<0.05) during the rainy/dry transition in comparison to rainy period. Also, CAT activity was lower in the rainy when compared to dry period. Considering the results obtained in the present study, we conclude that protein profile and antioxidant activity in the seminal plasma from Saanen goat breed raised under tropical conditions varies throughout the year, given that we observed more intensity of seminal plasma proteins and CAT activity in the period with higher environmental temperatures (dry/rainy transition and dry), coincident with decrease in the semen quality.

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

O presente trabalho constou de três estudos. No primeiro estudo, cinco ejaculados de 30 machos foram analisados conforme a manutenção da MOT a 17ºC, sendo classificados em três tipos: MOT <60% nas 72h (EI); MOT ≥60% nas 72h e <60% nas 144h (EII) e MOT ≥60% nas 144h (EIII). Doze machos foram selecionados e distribuídos em três grupos: MAIOR, MÉDIA e MENOR sensibilidade espermática ao resfriamento. Em seguida, foram coletados cinco ejaculados de cada macho, sendo a MOT avaliada a cada 24h, e a integridade da membrana espermática (IM) e de acrossomas normais (NAR) nas 24, 72, 120 e 168h. Machos menos sensíveis ao resfriamento apresentaram menor variação na MOT do período pré- para o pós-seleção. Diferenças entre os machos foram observadas desde as 24 até 168h para MOT, nas 120 e 168h para MI e nas 72 e 168h para NAR. A MOT foi mais afetada que MI e NAR durante o armazenamento do sêmen in vitro. No estudo 2 foi avaliada a possibilidade de reverter a sensibilidade espermática ao resfriamento pela troca de plasma seminal (PS) entre machos com diferente manutenção da MOT a 17ºC. Foram utilizados ejaculados de cinco cachaços selecionados e classificados como: menor (MES) e maior sensibilidade ao resfriamento (MAS). Foram utilizados seis tratamentos, com cinco repetições cada. Nos tratamentos T1 e T3, o sêmen dos machos MES e MAS, respectivamente, foram processados de acordo com o protocolo convencional. Foi efetuada centrifugação (800g por 10 min) e adição do PS (10mL) homólogo para os espermatozóides MES e MAS, respectivamente, nos T2 e T4. Após a centrifugação, foi realizada a troca do PS, sendo que espermatozóides dos machos MES foram expostos ao PS dos machos MAS (T5) e o PS dos machos MES foi adicionado aos espermatozóides dos machos MAS (T6). A MOT foi avaliada a cada 24h, durante sete dias de conservação. NAR e de IM foram avaliados nas 24, 72, 120 e 168h. Diferenças na MOT, entre os machos MES (T1) e MAS (T3), foram observadas após armazenamento de 48h. Não foram observadas alterações em MOT e IM, quando foi efetuada a troca de PS entre os machos MES e MAS. Não foi possível reverter a maior sensibilidade ao resfriamento de espermatozóides suínos, após a ejaculação, com a adição de 10% do PS de machos com sêmen de menor sensibilidade. No terceiro estudo, foi avaliada a fertilidade de sêmen suíno pelo teste de ligação de espermatozóides a um substrato sintético. A MOT e o percentual de espermatozóides ligados (PEL) foram avaliados nas 5, 24, 48 e 72 horas de armazenamento a 17ºC. O PEL foi determinado em soluções contendo 6,25 ou 12,5 milhões de espermatozóides/mL, com ou sem albumina sérica bovina (BSA), preparadas a partir de dois a cinco ejaculados de cada um dos quatro machos. Houve correlação positiva (r=0,33) entre a MOT e o PEL. Os machos diferem quanto à capacidade de ligação de seus espermatozóides ao substrato sintético, a partir de 24 horas de armazenamento do sêmen. Maior percentual de espermatozóides ligados ao substrato sintético é verificado com a inclusão de BSA e com o aumento da concentração espermática.

BRITO, B. G. M. Viabilidade do sêmen caprino conservado em três diferentes diluidores: efeito da concentração inicial de frutose no plasma seminal. 2008. 60 f. Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-12-01T20:16:35Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_bgmbrito.pdf: 324960 bytes, checksum: 65fbf714d549565ddc829f472ca5426a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-20T23:31:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_bgmbrito.pdf: 324960 bytes, checksum: 65fbf714d549565ddc829f472ca5426a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-20T23:31:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_bgmbrito.pdf: 324960 bytes, checksum: 65fbf714d549565ddc829f472ca5426a (MD5) Previous issue date: 2008 / One of the main objectives of the artificial insemination program in goats is to produce the highest number of descendants of genetically superior animals with the purpose to improve the animal production. Thus, it is necessary to dominate correct techniques of dilution and semen storage in this specie. In this work three different extenders had been tested: citrate-egg yolk (CE), TRIS-egg yolk (TE) and industrialized coconut water (ICW) and two groups of animals: with high initial level of fructose (group I) and with low initial level of fructose (group II) in the seminal plasma. The semen was stored until 48h at 5oC and evaluated in times 0 (fresh), 2, 24 and 48h, where a sample of the conserved semen was submitted to the term-resistance test (TTR) that consists of incubate the sample at 38oC for 2h. During the incubation it had been verified the parameters of Motility (MOT) and vigor (VIG), in times 5, 60 and 120 minutes and to the end was calculated the tax of degradation of the motility (TDM) and semen slides had been carried through for verification of the possible morphologic alterations. It had a significant fall in the parameters analyzed in elapsing of the time of storage, independent of the used extender (P<0,05). However, extender ICW presented inferior resulted than the others. The effect of the group was observed only in the ICW,showing that this extender did not supply the energy necessities of the spermatozoa whose initial concentration of fructose in the plasma was low. CE and TE worked similarly in the two groups. Significant difference in the activity of phospholipase A2 between the groups was found (P<05), in way that a bigger activity was observed in group II. In conclusion, independent of the used extender, the seminal parameters tend to fall as draw out the conservation time. Moreover, the initial concentration of fructose did not intervene with the sperm quality when extenders CE and TE had been used, however, when the levels of this component in the seminal plasma had been superior to 740mg/dL, occurred an increase in lifetime of the spermatozoa conserved at 5oC, when ICW was used. It suggests that sperm low action also can be due to a higher activity of PLA2, however more studies are necessary, with a large number of animals to elucidate this hypothesis / Um dos principais objetivos de um programa de inseminação artificial em caprinos é produzir o maior número de descendentes de animais geneticamente superiores com a finalidade de melhorar a produção animal. Para tanto é necessário que se dominem técnicas de diluição e de armazenamento de sêmen nesta espécie. Neste trabalho foram testados três diferentes diluidores, citrato-gema (CG), TRIS-gema (TG) e água de coco industrializada (ACI) e dois grupos de animais, com alto nível inicial de frutose (grupo I) e com baixo nível inicial de frutose (grupo II) no plasma seminal. O sêmen foi armazenado por até 48h a 5oC e avaliado nos tempos 0 (fresco), 2, 24 e 48h, onde uma amostra do sêmen conservado foi submetida ao teste de termo-resistência (TTR) a 38oC por 2h. Durante a incubação foram verificados os parâmetros de motilidade (MOT) e vigor (VIG), nos tempos 5, 60 e 120 minutos e ao final foi calculada a taxa de degradação da motilidade (TDM). Esfregaços de sêmen foram realizados para verificação das possíveis alterações morfológicas. Houve uma queda significativa nos parâmetros analisados no decorrer do tempo de armazenamento, independente do diluidor utilizado (P<0,05). Contudo, o diluidor ACI apresentou resultados inferiores aos dos demais. O efeito do grupo foi observado apenas no ACI, mostrando que este diluidor não conseguiu suprir as necessidades energéticas dos espermatozóides cuja concentração inicial de frutose no plasma estava baixa. Os diluidores CG e TG comportaram-se de forma semelhante nos dois grupos. Foi encontrada diferença significativa na atividade da fosfolipase A2 (PLA2) entre os grupos (P<0,05), sendo que uma atividade superior foi observada no grupo II. Concluiu-se que, independente do diluidor utilizado, os parâmetros seminais tendem a cair conforme o tempo de conservação é prolongado. Além disso, a concentração inicial de frutose não interferiu na qualidade espermática quando os diluidores CG e TG foram utilizados, todavia, quando os níveis deste componente no plasma seminal foram superiores a 740 mg/dL ocorreu um aumento na sobrevida dos espermatozóides conservados a 5 oC, quando se utilizou ACI. Sugere-se que o baixo desempenho espermático também possa ser devido a uma maior atividade de PLA2, contudo mais estudos, contendo um maior número de animais, são necessários para elucidar esta hipótese

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:06:45Z : No. of bitstreams: 1 dellaquajr_ja_dr_botfmvz.pdf: 670093 bytes, checksum: e66aa1acd7f261d1156564e3e811bc30 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o intuito de verificar a ação do acetato de prednisolona e do plasma seminal sobre a resposta inflamatória uterina de éguas inseminadas com sêmen congelado, desenvolveu-se os seguintes procedimentos: inicialmente 36 éguas foram aleatoriamente divididas em 6 grupos experimentais: G1 grupo controle, éguas não inseminadas; G2 éguas inseminadas com 800 x 106 de espermatozóides in natura; G3 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação; G4 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + adição de 20 mL de plasma seminal; G5 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + corticóide-terapia; G6 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + adição de 20 mL de plasma seminal + corticóide-terapia. A corticóide-terapia foi iniciada quando os animais apresentavam folículos de 35 mm e edema uterino, neste momento, se efetuava a administração da gonadotrofina coriônica humana (hCG) e concomitantemente 0,1 mg/kg de acetato de prednisolona por via intramuscular (Predef ), e repetia-se o corticóide a cada 12 horas até a ovulação. Os animais dos grupos tratados com corticóide G5 e G6, demonstraram um decréscimo significativo na função neutrofílica, frente ao teste da redução do tetrazólio nitroazul (NBT). O plasma seminal não alterou a intensidade da resposta inflamatória em nenhum dos testes realizados. No teste de fertilidade foram realizados dois grupos de inseminação, no primeiro, foram utilizadas éguas sem histórico de resposta inflamatória intensa pós-inseminação e não foi vista diferença estatística nos resultados de prenhes. Entretanto, no segundo teste de fertilidade, onde foram usadas éguas problemas, com... . / Aiming to verify the action of prednizolone acetate and of seminal plasma on the uterine inflammatory response of mares inseminated with frozen semen, the following procedures were developed. Thirty six mares were randomly allocated in 6 experimental groups: G1 control groups, with non-inseminated mares; G2 mares inseminated with 800 x 106 in natura sperm cells; G3 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells; G4 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + 20 mL seminal plasma; G5 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + cortico-therapy; G6 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + 20 mL seminal plasma + cortico-therapy. The therapy with 0,1 mg/kg of prednizolone acetate (IM) (Predef ), was performed when the mares presented follicles with 35 mm and uterine edema. At this moment the ovulation was induced with human corionic gonadotrophin (hCG), and the corticoid administrations repeated every 12 hours until ovulation. In G5 and G6 when the animals were treated with corticoid, it was observed a significant decrease on the neutrophil function, analyzed by the tetrazolio nitroazul test (NBT). The infusion of seminal plasma did not modify the uterine inflammatory response in any of the performed tests. For the fertility test, two groups of inseminated mares were used. On the first one, mares with no history of intense uterine inflammatory response after insemination were used. No statistic differences were observed on pregnancy results. However, on the second group of fertility test when problem mares, with history of post-insemination endometritis, were used, the corticoid-treated group presented a significant high pregnancy rate when compared with the control group (67% and 0% respectively). The cortico-therapy showed to be a safe method with no side effects on treated animals, representing an adequate choice for animals... (Complete abstract, click electronic address below).

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

O presente trabalho constou de três estudos. No primeiro estudo, cinco ejaculados de 30 machos foram analisados conforme a manutenção da MOT a 17ºC, sendo classificados em três tipos: MOT <60% nas 72h (EI); MOT ≥60% nas 72h e <60% nas 144h (EII) e MOT ≥60% nas 144h (EIII). Doze machos foram selecionados e distribuídos em três grupos: MAIOR, MÉDIA e MENOR sensibilidade espermática ao resfriamento. Em seguida, foram coletados cinco ejaculados de cada macho, sendo a MOT avaliada a cada 24h, e a integridade da membrana espermática (IM) e de acrossomas normais (NAR) nas 24, 72, 120 e 168h. Machos menos sensíveis ao resfriamento apresentaram menor variação na MOT do período pré- para o pós-seleção. Diferenças entre os machos foram observadas desde as 24 até 168h para MOT, nas 120 e 168h para MI e nas 72 e 168h para NAR. A MOT foi mais afetada que MI e NAR durante o armazenamento do sêmen in vitro. No estudo 2 foi avaliada a possibilidade de reverter a sensibilidade espermática ao resfriamento pela troca de plasma seminal (PS) entre machos com diferente manutenção da MOT a 17ºC. Foram utilizados ejaculados de cinco cachaços selecionados e classificados como: menor (MES) e maior sensibilidade ao resfriamento (MAS). Foram utilizados seis tratamentos, com cinco repetições cada. Nos tratamentos T1 e T3, o sêmen dos machos MES e MAS, respectivamente, foram processados de acordo com o protocolo convencional. Foi efetuada centrifugação (800g por 10 min) e adição do PS (10mL) homólogo para os espermatozóides MES e MAS, respectivamente, nos T2 e T4. Após a centrifugação, foi realizada a troca do PS, sendo que espermatozóides dos machos MES foram expostos ao PS dos machos MAS (T5) e o PS dos machos MES foi adicionado aos espermatozóides dos machos MAS (T6). A MOT foi avaliada a cada 24h, durante sete dias de conservação. NAR e de IM foram avaliados nas 24, 72, 120 e 168h. Diferenças na MOT, entre os machos MES (T1) e MAS (T3), foram observadas após armazenamento de 48h. Não foram observadas alterações em MOT e IM, quando foi efetuada a troca de PS entre os machos MES e MAS. Não foi possível reverter a maior sensibilidade ao resfriamento de espermatozóides suínos, após a ejaculação, com a adição de 10% do PS de machos com sêmen de menor sensibilidade. No terceiro estudo, foi avaliada a fertilidade de sêmen suíno pelo teste de ligação de espermatozóides a um substrato sintético. A MOT e o percentual de espermatozóides ligados (PEL) foram avaliados nas 5, 24, 48 e 72 horas de armazenamento a 17ºC. O PEL foi determinado em soluções contendo 6,25 ou 12,5 milhões de espermatozóides/mL, com ou sem albumina sérica bovina (BSA), preparadas a partir de dois a cinco ejaculados de cada um dos quatro machos. Houve correlação positiva (r=0,33) entre a MOT e o PEL. Os machos diferem quanto à capacidade de ligação de seus espermatozóides ao substrato sintético, a partir de 24 horas de armazenamento do sêmen. Maior percentual de espermatozóides ligados ao substrato sintético é verificado com a inclusão de BSA e com o aumento da concentração espermática.

O presente trabalho constou de três estudos. No primeiro estudo, cinco ejaculados de 30 machos foram analisados conforme a manutenção da MOT a 17ºC, sendo classificados em três tipos: MOT <60% nas 72h (EI); MOT ≥60% nas 72h e <60% nas 144h (EII) e MOT ≥60% nas 144h (EIII). Doze machos foram selecionados e distribuídos em três grupos: MAIOR, MÉDIA e MENOR sensibilidade espermática ao resfriamento. Em seguida, foram coletados cinco ejaculados de cada macho, sendo a MOT avaliada a cada 24h, e a integridade da membrana espermática (IM) e de acrossomas normais (NAR) nas 24, 72, 120 e 168h. Machos menos sensíveis ao resfriamento apresentaram menor variação na MOT do período pré- para o pós-seleção. Diferenças entre os machos foram observadas desde as 24 até 168h para MOT, nas 120 e 168h para MI e nas 72 e 168h para NAR. A MOT foi mais afetada que MI e NAR durante o armazenamento do sêmen in vitro. No estudo 2 foi avaliada a possibilidade de reverter a sensibilidade espermática ao resfriamento pela troca de plasma seminal (PS) entre machos com diferente manutenção da MOT a 17ºC. Foram utilizados ejaculados de cinco cachaços selecionados e classificados como: menor (MES) e maior sensibilidade ao resfriamento (MAS). Foram utilizados seis tratamentos, com cinco repetições cada. Nos tratamentos T1 e T3, o sêmen dos machos MES e MAS, respectivamente, foram processados de acordo com o protocolo convencional. Foi efetuada centrifugação (800g por 10 min) e adição do PS (10mL) homólogo para os espermatozóides MES e MAS, respectivamente, nos T2 e T4. Após a centrifugação, foi realizada a troca do PS, sendo que espermatozóides dos machos MES foram expostos ao PS dos machos MAS (T5) e o PS dos machos MES foi adicionado aos espermatozóides dos machos MAS (T6). A MOT foi avaliada a cada 24h, durante sete dias de conservação. NAR e de IM foram avaliados nas 24, 72, 120 e 168h. Diferenças na MOT, entre os machos MES (T1) e MAS (T3), foram observadas após armazenamento de 48h. Não foram observadas alterações em MOT e IM, quando foi efetuada a troca de PS entre os machos MES e MAS. Não foi possível reverter a maior sensibilidade ao resfriamento de espermatozóides suínos, após a ejaculação, com a adição de 10% do PS de machos com sêmen de menor sensibilidade. No terceiro estudo, foi avaliada a fertilidade de sêmen suíno pelo teste de ligação de espermatozóides a um substrato sintético. A MOT e o percentual de espermatozóides ligados (PEL) foram avaliados nas 5, 24, 48 e 72 horas de armazenamento a 17ºC. O PEL foi determinado em soluções contendo 6,25 ou 12,5 milhões de espermatozóides/mL, com ou sem albumina sérica bovina (BSA), preparadas a partir de dois a cinco ejaculados de cada um dos quatro machos. Houve correlação positiva (r=0,33) entre a MOT e o PEL. Os machos diferem quanto à capacidade de ligação de seus espermatozóides ao substrato sintético, a partir de 24 horas de armazenamento do sêmen. Maior percentual de espermatozóides ligados ao substrato sintético é verificado com a inclusão de BSA e com o aumento da concentração espermática.