ALENCAR, Jôsy Maria Arruda de. Parâmetros seminais e composição bioquímicas do plasma seminal de coelhos criados no nordeste do Brasil. 2011. 54 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Zootecnia, Fortaleza-CE, 2011 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-01T15:29:48Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_jmaalencar.pdf: 450822 bytes, checksum: 81c939f6286bffdd6e44ed9ba0e39500 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-01T15:30:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_jmaalencar.pdf: 450822 bytes, checksum: 81c939f6286bffdd6e44ed9ba0e39500 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T15:30:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_jmaalencar.pdf: 450822 bytes, checksum: 81c939f6286bffdd6e44ed9ba0e39500 (MD5) Previous issue date: 2011 / This study was carried out to characterize the biochemical composition of seminal plasma and semen parameters of rabbits reared in Northeast Brazil, also identifying the changes that occur throughout the year. The experiment was conducted at the Sector of the Rabbit Department of Animal Science / UFC. The index of thermal comfort inside the facility was constructed according to the formula of the THI, modified for rabbits. The ejaculates were obtained twice a week from 20 New Zealand White rabbits, reared in flat-deck system (October/2009 to September/2010). After collection, the semen was measured and evaluated for volume, color, appearance, vigor, sperm concentration and motility. To obtain the SP, the semen was centrifuged and then stored at - 18°C. To perform the biochemical analysis was made a monthly pool of PS of each animal. The samples were tested according to the concentrations of fructose, glucose, total cholesterol and total protein. In this study, semen parameters were affected significantly (p <0.05) by sampling month, despite the presence of heat stress. In the evaluation of semen parameters was found that the color of the ejaculates was pearly white representative of good semen quality. Regarding the aspect, the best results were found in ejaculates with cream-milky appearance. With regard to biochemical characteristics, the aspect of the ejaculate significantly (p <0.05) only the concentrations of fructose and glucose. Significant differences in concentrations of fructose among the different months of the year. Glucose was identified as a constituent, usually found in the PS. Significant differences in concentrations of fructose among the different months of the year. Glucose was identified as a constituent, usually found in the PS. The study of the Pearson correlations showed significant associations (low and moderate) positive and negative differences between the semen parameters and biochemical. In this study we found a negative correlation with sperm concentration of fructose. The results showed that rabbits show created in Northeastern Brazil are perfectly adapted, as seminal and biochemical characteristics have normal, despite the existence of heat stress. / Objetivou-se por meio deste estudo caracterizar a composição bioquímica do plasma seminal e dos parâmetros seminais de coelhos criados no NE do Brasil, identificando ainda as variações que possam ocorrer ao longo do ano. O experimento foi conduzido nas instalações do Setor de Cunicultura do Departamento de Zootecnia/UFC. O índice de conforto térmico dentro da instalação foi calculado de acordo com a fórmula do ITU, modificada para coelhos. Foram utilizados 20 coelhos da raça Nova Zelândia Branca, criados em sistema flat-deck, alimentados com ração comercial. Os ejaculados foram coletados duas vezes por semana (outubro/2009 a setembro/2010), utilizando-se uma vagina artificial. Em seguida, os ejaculados foram avaliados quanto ao volume, cor, aspecto, vigor, motilidade e concentração espermática, após foram centrifugados e o PS (plasma seminal) foi removido e acondicionado em tubos eppendorfs a -18 oC. Para realização das análises bioquímicas foi feito um pool mensal de PS de cada animal, onde foram avaliadas as concentrações de glicose, frutose, colesterol total e proteínas totais. Neste estudo, os parâmetros seminais foram influenciados significativamente (p<0,05) pelo mês de coleta, independente da existência de estresse pelo calor. Na avaliação dos parâmetros seminais pela cor foi verificado que os ejaculados de cor branca perolada foram representativos da boa qualidade do sêmen. Quanto ao aspecto, os melhores resultados foram encontrados nos ejaculados com aspecto cremo-leitoso. No que se refere às características bioquímicas, o aspecto do ejaculado influenciou significativamente (p<0,05) somente as concentrações de frutose e glicose. Foram constatadas diferenças significativas das concentrações de frutose entre os diferentes meses do ano. A glicose foi identificada como um constituinte, comumente encontrada no PS. A concentração de colesterol total no PS de coelhos no presente experimento foi mais baixa que o encontrado por outros autores. O estudo das correlações de Pearson demonstrou associações significativas (baixas e moderadas), positivas e negativas entre os parâmetros seminais e os bioquímicos. Os parâmetros bioquímicos apresentaram correlações entre si. Nesse estudo foi encontrada correlação negativa da concentração espermática com a frutose. Os resultados permitiram concluir demonstram que os coelhos criados no nordeste do Brasil são perfeitamente adaptados, pois apresentam características seminais e bioquímicas normais, apesar da existência de estresse térmico.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-25T10:13:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1390337 bytes, checksum: 8d3099a51770199af75e5456c99bc784 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-25T10:13:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1390337 bytes, checksum: 8d3099a51770199af75e5456c99bc784 (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho foi realizado com intuito de relacionar os constituintes bioquímicos e proteômicos do plasma seminal de garanhões da raça Mangalarga Marchador com a criopreservação. Em ambos os estudos foram utilizados garanhões hígidos da raça Mangalarga Marchador, com idades entre quatro e 15 anos e peso entre 400 e 500 kg. As colheitas foram realizadas no período de junho a agosto de 2013, totalizando 77 amostras. No experimento 1, após as colheitas foram retirados 3 mL de sêmen para análises bioquímicas de cálcio, colesterol, glicose, magnésio, fósforo, proteína total, potássio e sódio. Em sequencia as amostras seminais foram diluídas na proporção 1:1 (sêmen/ diluente) e congeladas para realização dos testes de motilidade espermática total, vigor espermático, teste hiposmótico e teste supravital. Após o descongelamento, os ejaculados de cada animal foram separados em grupos de alta (> 40%) e baixa congelabilidade (< 40%). Não foram visualizadas diferenças nos parâmetros bioquímicos e seminais entre os animais (P>0,05), entretanto foram observadas diferenças na concentração de colesterol e glicose nos animais 1 e 3 (P<0,05), sendo a maior concentração no grupo de animais de baixa congelabilidade e correlação negativa entre o potássio e a motilidade constituintes espermática bioquímicos pós- do descongelamento. Concluiu-se plasma não seminal que os influenciam na congelabilidade seminal na raça Mangalarga Marchador. No experimento 2, após as análises físicas e morfológicas do sêmen, foram selecionados para o perfil proteômico, os plasmas seminais correspondente aos sêmen de maior e menor motilidade pós-descongelamento por animal. O perfil das proteínas foi avaliado pelo sistema SDS–PAGE e as proteínas identificadas por MALDI- TOF/ TOF, utilizando o software Mascot para a busca em banco de dados. O site do UniProt (SWISSPROT, NCBI, Equidae) foi consultado para identificação das proteínas e a validação dos resultados foi realizada pelo programa SCAFOLD. As amostras não validadas pelo SCAFOLD foram analisadas pelo programa flexAnalysis (BRUKER®) para identificação de espectros de MS2 identificados pelo software Mascot. Foi observado diferença significativa em relação a CRISP 3 no grupo de sêmen de baixa congelabilidade e não foram observadas diferenças entre a HSP 1, a calicreína e a motilidade pós- descongelamento entre os grupos de sêmen de alta e baixa congelabilidade . Conclui-se que a CRISP3 com baixa massa molecular (22- 30 kDa) pode ser utilizada como biomarcador de baixa congelabilidade e que a calicreína e a HSP1 não podem ser utilizadas como marcadores de congelabilidade na raça Mangalarga Marchador. / The aim of this study was evaluating biochemical and proteomic constituents of Marchador Mangalarga stallions seminal plasma by cryopreservation. Both studies were carried out on healthy Marchador Mangalarga stallions, ageing from four to 15 years old and weighting between 400 and 500 kg. The samples were collected from June to August 2013, totalizing 77 samples. In experiment 1 after collection, 3 ml total semen were taken for calcium cholesterol, glucose, magnesium, phosphorus, total protein, sodium and potassium biochemical analyses. Subsequently, semen samples were diluted on 1: 1 (semen / diluent) and frozen in order to perform motility, sperm vigor, hyposmotic and supravital tests. After thawing, the ejaculate from each animal was divided into high (>40%) and poor (<40%) freezability groups. No differences on biochemical and seminal parameters among animals (P>0.05) were reported but differences on cholesterol and glucose concentrations in animals 1 and 3 (P<0.05) were observed. Animals from the low freezability group showed higher concentration and negative correlation between potassium and sperm motility after freezing. It might be concluded that seminal plasma biochemical constituents did not affect Mangalarga Marchador seminal freezability. In experiment 2, after physical and morphological semen analyses, seminal plasma corresponding to higher and lower semen post freezing motility per animal were selected for the proteomic profile. Protein profile was assessed by SDS-PAGE system and proteins identified by MALDI-TOF / TOF using the Mascot software searching the database. The site UniProt (SWISSPROT, NCBI, Equidae) was checked out identifying proteins and validation results by scafold program were performed. No validated samples by scafold by flexAnalysis program (BRUKER®) were analyzed verifying the MS2 spectra identified by Mascot software. Significant difference in regarding to the CRISP 3 in lower freezability group was observed and no difference to the HSP 1 between high and low semen freezability groups, kallikrein and post-thaw motility was observed. It might be concluded that the CRISP3 low molecular weight (22- 30 kDa) might be used as biomarker low freezability biomarker, as well as, kallikrein and the HSP1 might not be used as markers on freezability tests Mangalarga Marchador.

LIMA, Ítalo Cordeiro Silva. Variações no perfil protéico e atividade antioxidante do plasma seminal e funções espermáticas associadas a potenciais condições de estresse térmico em bodes Saanen criados no nordeste do Brasil. 2011. 83 f. Dissertação (Mestrado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-05-17T18:41:08Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_icslima.pdf: 2495125 bytes, checksum: 82112abd4ca9920d12fcde85953e03f6 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T20:01:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_icslima.pdf: 2495125 bytes, checksum: 82112abd4ca9920d12fcde85953e03f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T20:01:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_icslima.pdf: 2495125 bytes, checksum: 82112abd4ca9920d12fcde85953e03f6 (MD5) Previous issue date: 2011 / Seminal plasma proteins are involved in the regulation of different mechanisms associated with reproductive physiology. Thus, the present study was designed to investigate the protein profile and determine variations on catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) antioxidant activity on seminal plasma from Saanen goats raised under tropical conditions, in different periods of the year. Semen from eight goats was collected along 12 months (during dry and wet seasons and transition periods), seminal plasma was obtained through by centrifugation and submitted to 2-D electrophoresis, as well as analyses of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) antioxidant activity. Gels were stained with colloidal Coomassie blue, scanned and analyzed using tools of the PDQuest software. Data were analyzed using randomized block designs to evaluate possible variations in the protein profile and antioxidant activity. Intensity of 34 spots of protein maps was significantly different among periods of the year. From these 34 spots, 19 spots were different between the dry and rainy periods. The expression of protein spots with values of kDa and pI similar to heat-shock protein (70 kDa), glutamate carboxypeptidase and arylsulfatase A proteins was higher during the dry period in comparison to rainy season, while the clusterin showed more intensity in the rainy period. The SOD antioxidant activity was higher in the seminal plasma (p<0.05) during the rainy/dry transition in comparison to rainy period. Also, CAT activity was lower in the rainy when compared to dry period. Considering the results obtained in the present study, we conclude that protein profile and antioxidant activity in the seminal plasma from Saanen goat breed raised under tropical conditions varies throughout the year, given that we observed more intensity of seminal plasma proteins and CAT activity in the period with higher environmental temperatures (dry/rainy transition and dry), coincident with decrease in the semen quality. / As proteínas do plasma seminal participam da regulação de diversos processos associados à fisiologia reprodutiva. Neste sentido, o presente estudo tem por objetivo avaliar as variações do perfil protéico e determinar se ocorrem mudanças na atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD) no plasma seminal de caprinos Saanen criados em clima tropical, em diferentes períodos do ano. Amostras de sêmen de oito caprinos Saanen foram coletadas ao longo de 12 meses e o plasma seminal foi obtido através de centrifugação e submetido à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados por meio do aplicativo PDQuest. A atividade antioxidante da CAT e da SOD também foi determinada no plasma seminal. Avaliou-se as variações ao longo do ano no perfil protéico e atividade enzimática antioxidante através de delineamento em blocos casualizados. Diferenças significativas foram observadas com relação às intensidades de 34 “spots” dos mapas protéicos entre os períodos do ano. Dentre desses “spots”, verificou-se maior número de “spots” que diferiram entre os períodos seco e chuvoso, num total de 19 “spots”. A expressão de “spots” protéicos com valores de kDa e pI equivalente ao das proteínas “heat-shock protein” 70 kDa, glutamato carboxipeptidase e arilsulfatase A foi maior no período seco em comparação ao chuvoso, enquanto que a clusterina apresentou maior intensidade no período chuvoso. A atividade enzimática da SOD foi maior no plasma seminal (p < 0,05) no período de transição chuvoso-seco em comparação com o período chuvoso. Verificou-se também menor atividade da CAT no período chuvoso quando comparado ao período seco. Considerando o conjunto de resultados obtidos no presente estudo, conclui-se que as características seminais, perfil protéico e atividade de enzimas antioxidantes do plasma seminal de caprinos Saanen criados em clima tropical variam ao longo do ano, sendo registrada a maior intensidade das proteínas do plasma seminal e atividade da catalase no período de maior temperatura ambiente (transição seco-chuvoso e seco), coincidente com reduções na qualidade seminal.

No presente estudo três concentrações de N-acetil-l-cisteina (NAC) foram avaliadas no diluente equino resfriado a 5°C através da motilidade do sêmen, integridade da cromatina espermática e choque hiposmótico sobre o ejaculado em diluente Kenney na proporção 1:2 com 50% de plasma seminal. O ejaculado de nove garanhões diluído na proporção 1:2 em meio Kenney foi dividido em 4 partes iguais e suplementado com 5,0, 2,5 e 0,5mM de NAC e um grupo não suplementado (0,0mM). As avaliações foram realizadas a fresco (0h), 24 e 48h de resfriamento. A análise de motilidade nos dois experimentos foi avaliada até às 24 horas. No experimento 2, a adição de 0,5 e 5,0mM de NAC resultou em áreas de dispersão da cromatina espermática similares (59,7 e 55,5μM2, respectivamente). Entretanto, a área de dispersão da cromatina no grupo não suplementado (65,3μM2) e com 2,5mM de NAC (52,8μM2) apresentou diferença (P<0,05). O percentual de células com membrana plasmática funcional foi similar entre o grupo não suplementado e o grupo suplementado com 0,5mM de NAC (39,7 e 39,8%, respectivamente), porém superior a NAC 2,5mM (34,5%) e 5,0mM (34,2%). A motilidade progressiva dos ejaculados suplementados com NAC foram similares entre si e somente o grupo NAC 0,5mM (35,2%) apresentou similaridade de células móveis com o grupo não suplementado (36,2%). Os maiores danos à cromatina espermática no sêmen equino diluído com 50% de plasma seminal mantido resfriado a 5°C ocorrem a partir de 24h de resfriamento. A adição de 2,5 e 5,0mM de NAC comprometem a motilidade e a funcionalidade de membrana espermática equina, mas não causa efeito deletério sobre a integridade do DNA. / In this study, three concentrations of N-acetyl- l-cysteine (NAC) were evaluated by sperm motility, membrane functionality (hypo-osmotic test), and sperm chromatin integrity. the hypo-osmotic test showed only 32.4% (P <0.05) of the cells having a functional membrane 12h into the cooling process, while the fresh semen (0h) was 53.5%. The percentage of motile cells decreased within 12h of cooling from 38.9 to 19.7%, with no difference between 12 and 24h of cooling. The tests of sperm chromatin dispersion and hypo-osmotic shock revealed similarities between the periods of cooling at 24 to 48h. In Experiment 2, the nine stallion ejaculates were divided into 4 equal parts, diluted in half with Kenney milk powder supplemented with 5.0, 2.5 and 0.5mM NAC and a group not supplemented (0.0mM). The evaluations were made fresh (0h), 24 and 48h after cooling. The analysis of motility was assessed in all experiments up to 24 hours. In experiment 2, the addition of 0.5 to 5.0mM NAC resulted in areas of similar sperm chromatin dispersion (59.7 and 55.5μM2, respectively). However, the area of the chromatin dispersion between non-supplemented group=0.0mM (65.3μM2) and 2.5mM NAC (52.8μM2) differ (P <0.05). The percentage of cells with plasma membrane function were similar between the supplemented with 0.5mM NAC and non-supplemented (0.0mM) groups with (39.7 and 39.8%, respectively), but higher than 2.5mM (34.5%) and 5.0mM (34.2%). Progressive motility of ejaculates supplemented with NAC were similar, but only the group with 0.5mM NAC which resulted in 35.2% of mobile cells showed similarities with the non-supplemented group (36.2%). The greatest damage to sperm chromatin in equine semen diluted with 50% seminal plasma kept cooled to 5°C was due to 24h cooling. The addition of 2.5 and 5.0mM NAC inhibits the mobility and functionality of the equine sperm membrane, but does not cause a deleterious effect on the integrity of the DNA.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:06:43Z : No. of bitstreams: 1 martins_mim_dr_botfmvz.pdf: 654492 bytes, checksum: 1d5819008ce5f3cbd81c7a81087be0c9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Em climas temperados, variações sazonais na reprodução em cães têm sido reportadas, entretanto, em condições tropicais essa influência não tem sido estudada. O objetivo desse trabalho foi avaliar se as modificações ambientais, da Região Sudeste do Brasil, exercem efeitos sobre a função testicular. Neste estudo foram utilizados 8 cães adultos, com idade entre 1,2 a 6 anos, de três raças (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel), em atividade reprodutiva, de um mesmo canil, num período de 14 meses. Colheitas de sêmen foram realizadas quinzenalmente. O ejaculado foi imediatamente avaliado quanto à motilidade e vigor espermático, pH, concentração e morfologia dos espermatozóides. Após a centrifugação, o pellet foi ressuspendido e submetido a congelação. No plasma seminal foram determinadas as concentrações de proteínas totais, sódio, potássio, cálcio, magnésio e cloretos totais. A eletroforese SDS-PAGE foi realizada utilizando-se géis de poliacrilamida nas concentrações de 12 e 18%. Os géis foram corados com Coomasie azul brilhante R-250, as imagens digitalizadas e os pesos moleculares e a densidade óptica integrada estimada. Amostras de sangue foram obtidas a cada 15 dias, sempre no período da manhã, entre 8:30 e 11:30 h. As dosagens séricas de testosterona total foram determinadas por radioimunoensaio (RIA) em fase sólida. Foram realizadas mensurações de próstata e testículos. Os dados referentes às variações de temperatura ambiente (°C) e índice pluviométrico (mm3) foram obtidos no CIIAGRO. A variação de temperatura, nesse período, foi de 9ºC a 32,8ºC, e o índice pluviométrico de 26 mm3 a 476 mm3. A concentração média de testosterona nos animais foi de 131,65 ng/dL a 213,17 ng/dL, com uma grande variação individual. Houve uma queda acentuada no verão de 2003, onde a temperatura e a umidade foram altas... / In temperate zones, seasonal influence on reproductive performance of male dogs has been described, but in tropical conditions it hasn't been studied. The objective of this work was to evaluate the influence of seasonality on testis function. In the study 8 adult dogs were used, with age varying between 1.2 and 6 years old, from 3 breeds (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel). These dogs were active studs, and they were housed in the same cannel, during 14 months. Ejaculates were collected each 15 days. Immediately after the collection, spermatic progressive motility, progressive velocity, pH and sperm morphology, were evaluated. The samples were centrifuged, the pellet re-suspended and frozen, and supernatant was evaluated for total protein, cloride, potassium, sodium, calcium and magnesium. Ultrasonic measurements of canine testis and prostate were performed. Electrophoresis was performed using 12% and 18% SDS-PAGE. The electrophoresis gel was stained with Coomasie blue brilliant R-250, scanned and analysed by a software. Molecular weight was estimated based in a standard weight. Blood collections were performed every 15 days at morning (between 8:30 and 11:30 a.m). Testosterone serum concentrations were determined by solid phase RIA (radioimmunoassay). The data from environmental temperature and pluvial index were obtained from CIIAGRO. Testosterone mean concentrations varied from 1.31 ng/mL to 2.02 ng/mL. The temperature varied from 10.2º C to 32.8º C and the pluvial index was 33 mm3 to 476 mm3. Notable individual variation was observed on testosterone serum concentrations among dogs in all seasons. There was a remarkable decrease on testosterone levels in all animals during Summer, when temperature and humidity were high. Seminal parameters before and after thawing were normal during the study...(Complete abstract click eletronic access below)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Fabrícia da Silva Costa Feitosa (fabriciascf@gmail.com) on 2010-01-14T20:26:08Z No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) Previous issue date: 2007-07-04 / Este trabalho teve por objetivo avaliar in vitro e pela inseminação artificial (IA) em ovelhas com estro sincronizado o efeito da adição do plasma seminal (PS) na descongelação do sêmen ovino criopreservado em “pellets”. Foram realizados dois trabalhos. No primeiro foi avaliado in vitro a adição do PS. Não houve diferença significativa para o parâmetro de motilidade entre os tratamentos. Mas com relação à integridade do acrossoma a adição do PS proporcionou uma média superior de espermatozóides vivos com acrossoma integro (P<0,05) em relação ao tratamento com PBS nas 2 e 6 horas de incubação. No segundo trabalho foi realizado a avaliação in vitro e in vivo com IA em ovelhas com estro sincronizado. Os resultados in vitro confirmaram os resultados encontrados no primeiro trabalho. As IA foram realizadas em tempo fixo a partir das 50 horas após a retirada dos pessários vaginais, pelo método transcervical sem tração. Conforme o grau de penetração do aplicador de sêmen no canal cervical das ovelhas considerou-se três graus de profundidade caracterizados como: grau 1: superficial; grau 2: intermediário; grau 3: profundo. Como grupo controle 61 ovelhas foram inseminadas com sêmen fresco/diluído com solução salina fosfatada (PBS). Das 100 restantes, metade foi inseminada com sêmen congelado/descongelado com PBS e a outra metade com sêmen congelado/descongelado com PS. Após 45 dias da IA, foi realizado o diagnóstico de prenhez, por ultra-sonografia. As ovelhas inseminadas apresentaram os percentuais de prenhez de 60,0% (50/30), 74,0% (50/38) e 67,2% (61/41), respectivamente, para sêmen congelado/descongelado, com PBS, com PS e fresco/diluído. Os índices de prenhez não diferiram entre os tratamentos (PBS/PS/FRESCO) nos graus 1 e 2 de penetração. No entanto, as percentagens de prenhez diagnosticadas nas ovelhas inseminadas com sêmen fresco (95,6%) e com sêmen congelado com PS (94,1%) foram superiores as obtidas com sêmen congelado com PBS (60,0%; P<0,05) no grau 3 de penetração. Tendo como base os resultados obtidos, conclui-se que, o sêmen congelado utilizado via cervical, adicionado de PS obteve índices de gestação satisfatórios no mesmo nível que o sêmen fresco, é capaz de proporcionar os mesmos índices obtidos com o sêmen fresco e realizar um efeito protetor nos espermatozóides contra a reação precoce do acrossoma. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of the present experiment was to evaluate in vitro and artificial insemination (AI) in sheep with synchronized estrus the effect of addition of seminal plasma in ram semen frozen-thawed criopreserved at pellets. Two works were made. On the first was evaluate the addition of seminal plasma in vitro. To motility there wasn’t difference among treatments. But about the acrossome intact the addition of seminal plasma had a higher average of spermatozoa alives with acrossome intact (P<0,05) than PBS treatment at 2 and 6 hours of incubation period. On the second experiment was evaluate in vitro and in vivo with artificial insemination in sheep with synchronized estrus. The results in vitro confirmed the results found in the first experiment. The AI was in fixed time, at 50 hours after removing the vaginal device, by the method trans-cervical without traction. The penetration degree of the semen applicator in the ewe cervical channel was classified as following: degree 1: superficial; degree 2: intermediate; degree 3: deep. In control group 61 ewes were inseminated with fresh semen diluted with PBS and the other 100, half ewes were inseminated with frozen-thawed semen with PBS, and the other half ewes was inseminated with frozen-thawed semen with seminal plasma. The diagnosis of pregnancy was performed 45 days after AI with ultrasound. The pregnancy rate was 60.0% (50/30), 74.0% (50/37) and 67.2% (61/41), respectively for frozen semen and thawed without seminal plasma, with seminal plasma and fresh semen. The pregnancy rate did not differ among treatments in degrees 1 and 2. However, the pregnancy in ewes inseminated with fresh semen (95.6%) and with frozen-thawed semen with seminal plasma (94.1%) were higher than with frozen-thawed semen without plasma (60.0%; P<0.05) in degree 3. Based on results, the conclusion is, frozen semen additioned of seminal plasma used at cervical way had satisfactory pregnancy rates similar that fresh semen and had a protector effect on spermatozoa against the premature acrossome reaction.

A quantificação dos componentes bioquímicos como frutose, ácido cítrico e proteína total existentes no plasma seminal de caprinos e ovinos localizados na região Centro-Oeste do Brasil é uma forma de avaliar a atividade fisiológica e bioquímica espermáticas. Estes dados servem como indicadores de prováveis problemas com os testículos e glândulas acessórias desses animais e de sua respectiva fertilidade. A frutose e o ácido cítrico são importantes para o sêmen como fonte de energia metabólica e como componente de sistema tampão, respectivamente. A frutose é um marcador da função secretora das vesículas seminais, e é um componente importante para a sobrevivência dos espermatozóides em condições anaeróbicas e está estreitamente relacionada com a motilidade inicial das células espermáticas. Sendo assim, os objetivos do presente projeto foram analisar quantitativamente esses componentes do plasma seminal de bodes e carneiros sob latitude 20&deg;31\'S em quatro épocas do ano e purificar, através de técnicas cromatográficas, a enzima fosfolipase A2, importante proteína presente no plasma seminal. As análises bioquímicas foram feitas usando-se um espectrofotômetro UV/Vis para obtenção da curva padrão e para a determinação das concentraçõoes mensais e da concentração anual média dos constituintes analisados. A purificação da PLA2 foi feita por cromatografia líquida preparativa usando-se como fase estacionária a coluna Superdex 75-16/60 (GE HealthCare) de exclusão por tamanho e membranas semipermeáveis de 10 e 30 kDa. Como resultado das análises bioquímicas, obteve-se a concentração anual média de proteínas totais de 3,27 &plusmn; 0,60 g/dL para ovinos e de 5,02 &plusmn; 0,43 para caprinos, ácido cítrico de 1015,33 &plusmn; 66,50 µg/mL para ovinos e de 1584,35 &plusmn; 143,90 µg/mL para caprinos e frutose de 23,40 &plusmn; 4,80 mg/dL para ovinos e 72,73 &plusmn; 18,50 mg/dL para caprinos. Os resultados mostraram que a PLA2 extraída do plasma seminal de ovinos tem massa molecular próxima de 13,8 kDa e a PLA2 do plasma seminal de caprinos tem massa molecular próxima a 12,8 kDa. / Quantification of biochemical components in seminal plasma including fructose, citric acid and total protein of goat and sheep of the Midwest region of Brazil is one way of evaluating the biochemical and physiological activity of the sperm. These data serve as indicators of potential problems with the testicles and accessory glands of these animals and their relative fertility. The fructose and citric acid are important for the semen as a source of metabolic energy and as a component of a buffer, respectively. Fructose is a marker of secretory function of seminal vesicles, important for the survival of spermatozoa under anaerobic conditions, and is closely related to the initial motility of sperm cells. Therefore, the objectives of this project were to quantitatively analyze these components in the seminal plasma of goats and sheep in latitude 20&deg;31\'S 3 1\'S in four seasons and purify by chromatographic techniques the enzyme phospholipase A2, an important protein in the seminal plasma. Biochemical analysis were done using a spectrophotometer UV / Vis to obtaining the standard curve and to determine the monthly and annual average concentration of the constituents analyzed. The purification of PLA2 was performed by preparative liquid chromatography using the column as stationary phase Superdex 75-16/60 (GE HealthCare) by size exclusion and semipermeable membranes 10 and 30 kDa. As a result of biochemical analysis, we obtained the annual average concentration of total protein of 3,27 &plusmn; 0,60 g / dL for sheep and 5,02 &plusmn; 0,43 g/dL for goats, citric acid of 1015,33 &plusmn; 66, 50 g / mL for sheep and 1584,35 &plusmn; 143,90 g / mL for goats and fructose 23,40 &plusmn; 4,80 mg / dL for sheep and 72,73 &plusmn; 18,50 mg / dL for goats. The results showed that the PLA2 extracted from seminal plasma of sheep has a molecular mass of 13,8 kDa and the next PLA2 from goat seminal plasma has a molecular mass close to 12,8 kDa.

Submitted by Suzane Peres Campanholi null (supc@hotmail.com) on 2016-06-02T21:33:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Suzane - Versão final pro repositório UNESP.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O plasma seminal já foi descrito como benéfico e ao mesmo tempo prejudicial aos espermatozoides e isto está relacionado com o tempo de contato entre eles. A criopreservação do sêmen em touros pode ser prejudicada por exposição contínua dos espermatozoides ao plasma seminal (PS) e a aplicação de métodos para sua remoção pode aumentar a qualidade dos espermatozoides recuperados pós-descongelação, melhorando os resultados de biotécnicas que utilizam sêmen criopreservado. Pelo fato da centrifugação causar muitos danos aos espermatozoides, a filtragem com Sperm Filter® apresenta-se como um novo método de remoção do PS que almeja melhores resultados, porém não foi encontrado relato da sua aplicação em bovinos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos métodos de centrifugação e filtragem com Sperm Filter® sobre a criopreservação do sêmen bovino. Para isso, o sêmen de 38 touros Nelore foi colhido por eletroejaculação. Após a colheita, o sêmen foi fracionado em três alíquotas iguais para divisão em três grupos: controle (N), em que o sêmen foi diluído com PS; centrifugação (C), em que o PS foi removido por centrifugação a 600 X g por 10 minutos; e filtragem (F), em que o PS foi removido por filtragem com Sperm Filter®. As amostras foram criopreservadas, e pós-descongelação foram avaliados a cinética espermática, a integridade das membranas plasmática e acrossomal, o potencial mitocondrial, o estresse oxidativo e a capacidade fecundante através da produção in vitro de embriões (PIVE). Com relação à cinética, maiores valores da velocidade do trajeto (P = 0,0005) e velocidade progressiva (P = <0,0001) foram observados nos grupos C e F e os parâmetros frequência de batimento, retilinearidade e linearidade foram superiores no grupo F (P = 0,0008; P = 0,0133 e P = 0,0005, respectivamente). A integridade de membrana foi prejudicada pela centrifugação e filtragem do sêmen (P < 0,0001), porém o estresse oxidativo foi reduzido com esses métodos de remoção do PS (P < 0,0001). Na PIVE, as maiores taxas de desenvolvimento embrionário (blastocistos e blastocistos eclodidos) foram observadas no grupo N e F (P = 0,008 e P = 0,0042, respectivamente). Portanto, a remoção do plasma seminal pelo método da centrifugação reduz a qualidade do sêmen criopreservado bovino, interferindo negativamente na fertilidade dos espermatozoides e o método da filtragem com Sperm Filter® apresentou melhor resultado evidenciado por altas taxas de desenvolvimento embrionário. / Seminal plasma has been described as beneficial and harmful to the spermatozoa and this is related to the contact time between them. Cryopreservation of semen from bulls can be undermined by continuous exposure of sperm to the seminal plasma (SP) and the application of methods for removal can increase the quality of post-thaw sperm recovered, improving fertilization. Centrifugation cause a lot of damage to sperm and filtering with Sperm Filter® is a new SP removal method that aims to better results, but has not yet been applied in bull. The aim of this study was to evaluate the effect of the methods of centrifugation and filtering with Sperm Filter® on cryopreservation of bovine semen. For this, semen of 38 Nelore bulls was collected by electroejaculation. Semen was fractioned into three equal aliquots for division into three groups: control (N), wherein the semen was diluted with SP; centrifugation (C), in which the SP was removed by centrifugation at 600 X g for 10 minutes; and filtration (F), in which the SP was removed by filtration with Sperm Filter®. Samples were cryopreserved and was evaluated after thawing sperm kinetics, the integrity of plasma and acrosomal membranes, mitochondrial potential, oxidative stress and the fertilizing capacity by in vitro embryo production (IVP). The kinetics, higher values of the path velocity (P = 0.0005) and progressive speed (P = <0.0001) were observed in the groups C and F and the beat frequency parameters, straightness and linearity were higher in group F (P = 0.0008, P = 0.0133 and P = 0.0005, respectively). Membrane integrity was impaired by centrifugation and filtration of semen (P <0.0001), though oxidative stress was reduced with these SP removal methods (P <0.0001). In IVP, the highest rate of embryonic development (blastocyst and hatched blastocyst) were observed in the C and F group (P = 0.008 and P = 0.0042, respectively). Therefore, removal of seminal plasma by the method of centrifugation reduces the quality of semen cryopreserved cattle, a negative effect on fertility of sperm, and the method of filtering with Sperm Filter® showed better results evidenced by high rates of embryonic development.

Submitted by RODRIGO DOS SANTOS ALBUQUERQUE null (rdsa20@gmail.com) on 2016-09-19T19:21:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado Rodrigo Albuquerque.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 12 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 12 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-09-22T17:06:43Z (GMT) / Submitted by RODRIGO DOS SANTOS ALBUQUERQUE null (rdsa20@gmail.com) on 2016-09-22T17:53:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado Rodrigo Albuquerque.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-09-27T12:31:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 albuquerque_rs_me_jabo.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T12:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 albuquerque_rs_me_jabo.pdf: 1101110 bytes, checksum: 06cce8f64ce03aadf0ced70da5dcfcab (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / A criopreservação provoca injúrias aos espermatozoides e necessita de métodos que minimizem esses danos. Embora seja bastante discutida, a remoção do plasma seminal tornou-se uma alternativa para melhorar a qualidade e viabilidade espermática após a congelação e vem sendo utilizada em outras espécies na tentativa de obter bons resultados. O objetivo deste estudo foi comparar a remoção do plasma seminal de bubalinos tanto por filtragem (SpermFilter®) quanto por centrifugação sobre a qualidade do sêmen descongelado de búfalos. Foram utilizados sete touros da raça Murrah, os quais foram submetidos à colheita de sêmen por vagina artificial uma vez por semana. Os ejaculados foram diluídos com Botu-Bov® e fracionados em alíquotas para confrontar três técnicas antes da congelação: grupo C (Criopreservação convencional com plasma seminal), grupo CE (Criopreservação removendo o plasma seminal por centrifugação) e grupo F (Criopreservação removendo o plasma seminal por filtragem). O sêmen fresco foi analisado quanto ao volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), turbilhonamento, motilidade progressiva, vigor e morfologia espermática. No sêmen descongelado, foram avaliados a cinética espermática pelo CASA, a integridade de membrana plasmática, acrossoma, potencial de membrana mitocondrial e quantificação de EROs por citometria de fluxo e, adicionalmente, foi estimado o grau de peroxidação lipídica pela técnica de TBARS. Os resultados revelam que a remoção de plasma seminal não proporcionou aumento da velocidade espermática, alteração no potencial de membrana mitocondrial e nem modificou o grau de peroxidação lipídica. Entretanto, a presença do plasma seminal (grupo controle) e a centrifugação provocou maiores índices de lesões na membrana plasmática, quando estas apresentam o acrossoma intacto (47,88±1,99% vs. 41,30±1,96%, respectivamente) em comparação ao grupo F (40,45±2,01%; p<0,07). A lesão em ambas as membranas (acrossomal e plasmática) foi mais evidente na filtragem (22,18±1,07) em relação ao grupo controle (15,23±1,06), sendo que a centrifugação não diferiu entre os grupos (17,43±1,04; p<0,01). A EROs foi mais evidente no grupo CE (56,68±4,53%) em relação ao grupo C e F (21,83±4,60% vs. 20,96±4,7%, respectivamente; p<0,01). Portanto, as hipóteses de que a remoção de plasma seminal melhoram a cinética espermática e proporcionam menores índices de lesões na membrana plasmática não foram confirmadas. Embora a filtragem tenha apresentado vantagem sobre a centrifugação gerando menor quantidade de EROs, não se justifica a remoção do plasma seminal em búfalos devido aos resultados serem muito semelhantes ao grupo controle. / Cryopreservation promotes injury to sperm and methods to minimize such damage are necessary. Although much discussed, removal of seminal plasma that has been successfully used in other species has become an alternative for improving sperm quality and viability after freezing. The aim of the present study was compare to removal seminal plasma in buffalo both by filtering (SpermFilter®) and by centrifugation on the quality frozen thawed buffalo semen. For this purpose, semen of seven Murrah buffalo-bulls, which were submitted to semen collection by artificial vagina once a week. The samples were diluted with Botu-Bov® and were fractionated in aliquots to confront three techniques before freezing: C group (conventional cryopreservation with seminal plasma), CE group (cryopreservation removing the seminal plasma centrifuge) F group (Cryopreservation removing the seminal plasma with Sperm Filter®). Fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), gross motility, progressive motility, vigor and sperm morphology. In the thawed sperm, sperm kinetics was evaluated by CASA, plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and estimation of the levels of reactive oxygen species were assigned by flow cytometry and was estimated degree of lipid peroxidation by TBARS technique. The results show that the removal seminal plasma did not improve sperm kinetics, mitochondrial membrane potential and does not modify the degree of lipid peroxidation.However, the presence of seminal plasma (control group) and centrifugation resulted in higher rates of injury to the plasma membrane, where they have an intact acrosome (47,88±1,99% vs. 41,30±1,96%, respectively) compared to F group (40,45±2,01%; p<0.07). The damage in both membranes (acrosome and plasma) was more evident in filtering (22,18±1,07) compared to the control group (15,23±1,06), and centrifugation did not differ between groups (17,43±1,04; p<0.01). ROS production was more evident in the CE group (56,68±4,53%) compared to the C and F group (21.83±4.60% vs. 20.96±4.7%, respectively; p<0.01). Therefore, removal seminal plasmais not beneficial to sperm, as did not alter the sperm kinetics nor provided lower lesions rates in the plasma membrane, although the filter has presented advantage over centrifugation as generated lower amount of ROS, not justifies the use bothtechnique because the results are very similar to those with seminal plasma. / FUNDUNESP: 2523-002-14

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:19:19Z : No. of bitstreams: 1 alberti_k_me_botfmvz.pdf: 429138 bytes, checksum: 5c7610a2c5faf82b82e472d5ee545e50 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dentre as biotecnologias de reprodução que visam acelerar os ganhos genéticos e econômicos dos rebanhos, a congelação de sêmen desponta como uma das principais. O sêmen congelado bovino é utilizado em larga escala há anos e não houve grandes evoluções nas técnicas de congelação visando minimizar os efeitos deletérios do processo nos espermatozóides, colaborando ativamente para o incremento da fertilidade dos rebanhos. Neste trabalho propôs inovações nas técnicas de congelação utilizando uma nova formulação de meio diluente, a introdução da centrifugação para a remoção do plasma seminal pré-congelação e a determinação do tempo ideal de estabilização do sêmen. Foram realizados três experimentos; o primeiro testou o efeito de três diferentes meios diluentes, com ou sem a remoção do plasma seminal, no ejaculado de 40 touros diferentes. Nos resultados exibidos o diluente M20 foi superior (p<0,01) aos demais diluentes na maioria das variáveis pesquisadas a remoção do plasma seminal melhorou (p<0,01) os índices de congelabilidade do sêmen. Outro experimento foi a verificação dos tempos de 60, 120, 180 e 240 min. de refrigeração do sêmen a 5ºC. O tempo de 180 minutos foi o considerado o melhor para a congelabilidade após a verificação dos resultados. No teste de fertilidade foram inseminados 418 vacas e o grupo que foi inseminado com sêmen congelado com M20 sem plasma seminal obteve uma tendência de superioridade (0,05<p<0,10) aos demais grupos. Com os resultados dos experimentos concluiu-se que as inovações propostas por este estudo incrementam os índices de congelabilidade do sêmen bovino. / Semen freezing is considered as one of the main reproduction biotechnologies that aim to accelerate genetic and economical gains of herds. Frozen bovine semen has been used in large scale for years and there were not great evolutions in freezing techniques to minimize the deleterious effects of the process in spermatozoa, actively contributing for the increase in herds fertility. Innovations in freezing techniques were proposed in this work by using a new formulation of the extenders, introducing centrifugation for the removal of prefreezing seminal plasma and determining the appropriate time for semen cooled. Three experiments were carried out: 1) the effect of three different extenders was tested, with or without the removal of seminal plasma, in the ejaculate of 40 different bulls; results showed that the extender M20 was superior (p<0,01) in relation to the other extenders in most of variables studied. The removal of the seminal plasma improved (P<0,01) semen freezability indexes. 2) verification of 60, 120, 180 and 240 min. times for semen cooling at 5ºC; after results, the time of 180 minutes was considered the most appropriate for freezability. 3) fertility test: 418 cows were inseminated and the group with frozen semen with M20 without seminal plasma obtained a superiority tendency (0,05<p<0,10) in relation to the other groups. The results of the experiments concluded that the innovations proposed in this work increase freezability indexes of bovine semen.