Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-17T19:54:33Z No. of bitstreams: 1 2008_NathaliaCCRMundim.pdf: 2453853 bytes, checksum: 7bded0fa35169a0d7d6ce7bbd4374a37 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-01T12:58:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_NathaliaCCRMundim.pdf: 2453853 bytes, checksum: 7bded0fa35169a0d7d6ce7bbd4374a37 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-01T12:58:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_NathaliaCCRMundim.pdf: 2453853 bytes, checksum: 7bded0fa35169a0d7d6ce7bbd4374a37 (MD5) Previous issue date: 2008 / A pele dos anfíbios tem um papel chave na sobrevivência e na capacidade de explorar os mais diversos tipos de ambientes e por isso é capaz de produzir uma grande variedade de componentes muitos dos quais são descritos como mecanismo de defesa para evitar a invasão por patógenos ou a ingestão por predadores. Um exemplo é a bradicinina, um nonapeptídeo originado do sistema cinina-calicreína e que nos anfíbios pode estar relacionado com mecanismos de defesa contra a ingestão por predadores e por esse motivo, pode sofrer alteração em sua estrutura primária de acordo com variações geográficas e nicho das espécies, permitindo uma adaptação do anuro ao ambiente no qual se encontra. Em mamíferos as bradicininas podem apresentar vários efeitos tais como vasodilatação, contração de músculo liso, mediar à inflamação, entre outros. Nesse estudo a secreção de três espécies do gênero Phyllomedusa, Phyllomedusa tomopterna, Phyllomedusa rohdei e Phyllomedusa burmeisteri, de diferentes regiões do Brasil foram analisadas quanto à presença de análogos de bradicinina. A secreção foi obtida de espécimes adultos por eletroestimulação. O extrato total foi analisado por espectrometria de massa após etapas de purificação e fracionamento por Cromatografia líquida de alta eficiência (RP-HPLC) utilizando colunas semipreparativas. Diversos análogos de bradicininas já descritos na literatura e novos análogos foram encontrados. Peptídeos selecionados foram sintetizados e submetidos a ensaios biológicos relacionados com a inflamação e de ação mitogênica para a determinação de sua atividade biológica. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Amphibian skin has a crucial role on the survival and on the capacity of the animal of exploring the most different ambients, That is the reason why they are capable of producing the plethora of compounds, described as defensive mechanisms to avoid pathogen invasion or ingestion by predators. One of these compounds, known as bradykinin, is a nonapeptide originated from the kallicrein-kinin system and may be related to an anti-predation mechanism against the ingestion by predators and that may be the reason that they might have geographic variation allowing an adaptation of amphibians to the ambient where they live. In mammals, bradykinin can cause various physiological effects such as vasodilatation, contraction of smooth muscle and mediate inflammation. The present study describes the molecular screening of BK analogs found in the secretion of three Phyllomedusa genus species from two regions of Brazil. The skin secretion was obtained from adult frog specimens by mild electric stimulation and the crude secretion was submitted to RP-HPLC using semipreparative columns. Novel bradykinin related peptides were described as well as 18 peptides already characterized in the literature. Selected peptides were synthesized and submitted to biological assays in order to assess their mode of action during inflammation and mitogenic processes.

Os métodos oficiais da Agência de Proteção Ambiental Norte-americana (EPA) para análise de dioxinas e furanos, utilizam espectrômetros de massas de alta e baixa resolução para identificação e quantificação destes compostos. A extração da amostra é realizada por Soxhlet (SOX) e a etapa de clean up por uma seqüência de colunas de sílica, alumina e carbono/celite. O método que usa espectrômetro de massas de alta resolução é o mais preciso e seguro para este tipo de análise, sendo também o de maior custo. Com o intuito de estabelecer uma análise segura e de menor custo, o presente trabalho teve como proposta a avaliação da aplicação da metodologia de identificação e quantificação de dioxinas e furanos, utilizando espectrômetro de massas de baixa resolução, "íon trap", no modo massas/massas (MS/MS) segundo a metodologia proposta pela empresa VARIAN. Foi também estudada a extração da amostra por ultra-som convencional (US) e ultra-som de ponta, conhecido como disruptor celular (DC) em substituição ao método clássico de extração por soxhlet, bem como a utilização de Florisil® no processo de clean up. Desta forma, amostras de cinzas de incinerador foram extraídas por soxhlet, US e DC e submetidas a processos de clean up segundo os métodos oficiais (seqüência de colunas de sílica, alumina e carbono/celite) ou utilização de Florisil®. Os dados obtidos neste trabalho mostraram que: a- a extração por US não foi adequada, devido à baixa recuperação apresentada; b- a extração por DC mostrou potencialidade de extração semelhante à técnica oficial de extração por Soxhlet; c- o Florisil® não demonstrou ser eficiente no processo de clean up, possibilitando a permanência de vários interferentes os quais dificultaram em muito a análise; d- .a metodologia proposta pela VARIAN foi eficiente nas amostras em estudo, inclusive na amostra real, em que foi utilizada uma cinza de incinerador hospitalar, cujos extratos obtidos, tanto por Soxhlet quanto por DC apresentaram valores de PCDD/Fs de 533 ± 56,1 e 370 ± 81,6 ng g-¹ de I-TEQ respectivamente, sendo estatisticamente equivalentes pelo teste t. / The official EPA (American Envirorunental Protection Agency) methods for analysing dioxins and furans make use of high and low resolution mass spectrometers to identify and quantify these compounds. Sample extraction is carried out in a Soxhlet followed by clean-up by a sequence of silica, alumina and carbon/celite columns. The method using a high resolution spectrometer is the most accurate and confident for this kind of analysis being also the most expensive. In order to establish a cheap and confident analytical method, the present word had the purpose of evaluate the methodology for identification and quantification of dioxins and furans using low resolution ion trap mass spectrometer, in the mass/mass mode (MS/MS). Furthermore, sample extraction by conventional ultra sound (US) and cellular disruptor (CD) was employed instead of the classical Soxhlet extraction, and Florisil® was used in the clean-up processo Incinerator ashes were extracted by Soxhlet, US and CD, followed by c1ean-up according to official methods (sequence of silica, alumina and carbonlcelite columns) or using Florisil®. The obtained data showed that: a) extraction by US was not adequate due to low recovery; b) extraction by CD showed a extraction capability comparable to the official Soxhlet extraction; c) Florisil® showed to be efficient for clean-up, allowing several interferents to be present causing analytical difficulties; d) the methodology proposed by VARIAN proved to be efficient for the studied samples, including a real sample constituted by hospital incinerator ashes, for which extracts by Soxhlet and CD presented I-TEQ values for PCDD/Fs of 533 ± 56,1 ng g-¹ and 370 ± 81,6 ng g-¹ respectively, being statistically equivalents by the t-test.

MAIA, A. I. V.; PESSOA, O. D. L. Prospecção química de Acnistus arborescens visando à caracterização de vitaesteróides através de Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de Massas. 2010. 241 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-10-15T20:13:23Z No. of bitstreams: 1 2010_tese_aivmaia.pdf: 10151245 bytes, checksum: 42fd4e7c68d2e7c99eeecfe3c54e1fc5 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-11-24T19:20:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_tese_aivmaia.pdf: 10151245 bytes, checksum: 42fd4e7c68d2e7c99eeecfe3c54e1fc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-24T19:20:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_tese_aivmaia.pdf: 10151245 bytes, checksum: 42fd4e7c68d2e7c99eeecfe3c54e1fc5 (MD5) Previous issue date: 2010 / In this study herein, describes the chemical prospect of ethanol extract from leaves of Acnistus arborescens (Solanaceae). Therefore, this study resulted in the isolation and characterization of several secondary metabolites, including the withaphysalins M, N, O, F (epimers 18R and 18S) and 2,3-dehydro-F (epimers 18R and 18S), as well as four new withaphysalins, being three chlorinated. Their structures were established as new withaphysalins: rel-(17S, 20R, 22R)-6-chloro-18S-ethoxy-18,20-epoxy-4,5-dihidroxy-1-oxo-witha-2,24-dienolide, rel-(17S, 20R, 22R)-6-chloro-18R-ethoxy-18,20-epoxy-4,5-dihidroxy-1-oxo-witha-2,24-dienolide, rel-(17S, 20R, 22R)-6α-chloro-18,20-epoxy-4β,5β-dihidroxy-18α-methoxy-1-oxo-whita-2,24-dienolide e rel-(17S,20R,22R)-5β,6β:18,20-diepoxy-3β,18α-diethoxy-4β-hidroxy-1-oxo-witha-24-enolide. Furthermore, two flavonoids, kaempferol and quercetin, were also isolated and a ceramide, whose structure was determined as rel-(2S,3S,4R,16E)-2-[(2’R)-2’-hydroxynonadecanoylamino]-heneicosadec-16-ene-1,3,4-triol. A study was also carried out about fragmentation with withaphysalins isolated with the objective to construct a mini-library with fragmentation patterns, in order to recognize the withaphysalins or similar compounds in other extracts. Hence, it was possible to identify eight new withaphysalins (C-H, J and K) in a fraction of high cytotoxic potential (PPTC38), and perform a qualitative study of the chemical composition in extracts from leaves of A. arborescens, whereby it was possible to identify the withaphysalin F, as a major constituent from the fraction duly analyzed. The analytical techniques used in the structural elucidation of isolated compounds were IR, MSHR and 1H and 13C NMR (1D and 2D), where as the technique used in the study of fragmentation, as well as the qualitative analysis of the fractions, was the liquid chromatography-mass spectrometry high resolution (HPLC-MS). / Este trabalho descreve a prospecção química do extrato etanólico das folhas de Acnistus arborescens (Solanaceae). Esse estudo resultou no isolamento e caracterização de vários metabólitos secundários, incluindo as vitafisalinas M, N, O, F (epímeros 18R e 18S) e 2,3-desidro-F (epímeros 18R e 18S), além de quatro novas vitafisalinas, sendo três cloradas. As estruturas das novas vitafisalinas foram estabelecidas como: rel-(17S, 20R, 22R)-6a-cloro-18S-etóxi-18,20-epóxi-4b,5b-dihidróxi-1-oxo-vita-2,24-dienolido, rel-(17S, 20R, 22R)-6a- cloro-18R-etóxi-18,20-epóxi-4b,5b-dihidróxi-1-oxo-vita-2,24-dienolido, rel-(17S, 20R, 22R)-6 -cloro-18,20-epóxi-4 ,5 -diidróxi-18 -metóxi-1-oxovita-2,24-dienolido e rel- (17S,20R,22R)-5 ,6 :18,20-diepóxi-3 ,18 -dietóxi-4 -hidróxi-1-oxovita-24-enolido. Adicionalmente a estes compostos, foram também isolados dois flavonóides, canferol e quercetina, e uma ceramida, cuja estrutura foi determinada como (2R,3S,4S,16E)-2[(2’R)-2’-hidroxiheneicosanoilamino]-nonadec-16-eno-1,3,4-triol. Foi realizado ainda um estudo de fragmentação de massas com as vitafisalinas isoladas, para a construção de uma minibiblioteca de padrões de fragmentação, a fim de reconhecer estes compostos ou análogos em outros extratos. Com isso, foi possível identificar oito novas vitafisalinas (C-H, J e K) numa fração de elevado potencial citotóxico (PPTC38), além de realizar um estudo qualitativo da composição química dos extratos obtidos das folhas de A. arborescens cultivada, onde foi possível identificar a vitafisalina F como constituinte majoritário na fração analisada. As técnicas analíticas utilizadas na elucidação estrutural dos compostos isolados foram IV, EMAR e RMN 1H e 13C (1D e 2D), enquanto a técnica utilizada no estudo de fragmentação, bem como na análise qualitativa das frações foi a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas de alta resolução (CLAE-EM).

Submitted by Teresa Cristina Rosenhayme (teresa.rosenhayme@cprm.gov.br) on 2015-07-14T17:52:16Z No. of bitstreams: 1 0821418_2013_Completo.pdf: 2562069 bytes, checksum: 13b45ec6b5f8ed64f697fa027f8d653e (MD5) / Approved for entry into archive by Flasleandro Oliveira (flasleandro.oliveira@cprm.gov.br) on 2015-07-14T18:51:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 0821418_2013_Completo.pdf: 2562069 bytes, checksum: 13b45ec6b5f8ed64f697fa027f8d653e (MD5) / Approved for entry into archive by Flasleandro Oliveira (flasleandro.oliveira@cprm.gov.br) on 2015-07-14T18:51:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 0821418_2013_Completo.pdf: 2562069 bytes, checksum: 13b45ec6b5f8ed64f697fa027f8d653e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-14T18:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 0821418_2013_Completo.pdf: 2562069 bytes, checksum: 13b45ec6b5f8ed64f697fa027f8d653e (MD5) Previous issue date: 2013-09

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Física e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2012-10-19T04:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T19:52:33Z : No. of bitstreams: 1 181661.pdf: 16313040 bytes, checksum: c5e521a0baa4ff6b86a7dd8b781eb2ff (MD5) / Um método é proposto para a determinação de metais traço em carvão na forma de suspensão por espectrometria de massa com fonte de plasma indutivamente acoplado com introdução da amostra por vaporização eletrotérmica (ETV-ICP-MS). A calibração externa com soluções analíticas e a calibração por diluição isotópica (ID) foram empregadas como técnicas de calibração. As suspensões das amostras foram preparadas em ácido nítrico 5% v/v e colocadas em banho ultra-som para auxiliar na extração dos analitos. Para a ID as suspensões foram colocadas em banho ultra-som por 60 minutos e no banho-maria por 120 minutos. Após a otimização programa de temperatura do ETV, a metodologia foi aplicada à amostras cerificadas de carvão para determinar a concentração de As, Mn, Pb e Se utilizando a calibração externa, e Cd, Hg, Pb e Tl por diluição isotópica. Os reultados obtidos para os metais de interesse foram concordantes com os valores certificados.

Os métodos oficiais da Agência de Proteção Ambiental Norte-americana (EPA) para análise de dioxinas e furanos, utilizam espectrômetros de massas de alta e baixa resolução para identificação e quantificação destes compostos. A extração da amostra é realizada por Soxhlet (SOX) e a etapa de clean up por uma seqüência de colunas de sílica, alumina e carbono/celite. O método que usa espectrômetro de massas de alta resolução é o mais preciso e seguro para este tipo de análise, sendo também o de maior custo. Com o intuito de estabelecer uma análise segura e de menor custo, o presente trabalho teve como proposta a avaliação da aplicação da metodologia de identificação e quantificação de dioxinas e furanos, utilizando espectrômetro de massas de baixa resolução, "íon trap", no modo massas/massas (MS/MS) segundo a metodologia proposta pela empresa VARIAN. Foi também estudada a extração da amostra por ultra-som convencional (US) e ultra-som de ponta, conhecido como disruptor celular (DC) em substituição ao método clássico de extração por soxhlet, bem como a utilização de Florisil® no processo de clean up. Desta forma, amostras de cinzas de incinerador foram extraídas por soxhlet, US e DC e submetidas a processos de clean up segundo os métodos oficiais (seqüência de colunas de sílica, alumina e carbono/celite) ou utilização de Florisil®. Os dados obtidos neste trabalho mostraram que: a- a extração por US não foi adequada, devido à baixa recuperação apresentada; b- a extração por DC mostrou potencialidade de extração semelhante à técnica oficial de extração por Soxhlet; c- o Florisil® não demonstrou ser eficiente no processo de clean up, possibilitando a permanência de vários interferentes os quais dificultaram em muito a análise; d- .a metodologia proposta pela VARIAN foi eficiente nas amostras em estudo, inclusive na amostra real, em que foi utilizada uma cinza de incinerador hospitalar, cujos extratos obtidos, tanto por Soxhlet quanto por DC apresentaram valores de PCDD/Fs de 533 ± 56,1 e 370 ± 81,6 ng g-¹ de I-TEQ respectivamente, sendo estatisticamente equivalentes pelo teste t. / The official EPA (American Envirorunental Protection Agency) methods for analysing dioxins and furans make use of high and low resolution mass spectrometers to identify and quantify these compounds. Sample extraction is carried out in a Soxhlet followed by clean-up by a sequence of silica, alumina and carbon/celite columns. The method using a high resolution spectrometer is the most accurate and confident for this kind of analysis being also the most expensive. In order to establish a cheap and confident analytical method, the present word had the purpose of evaluate the methodology for identification and quantification of dioxins and furans using low resolution ion trap mass spectrometer, in the mass/mass mode (MS/MS). Furthermore, sample extraction by conventional ultra sound (US) and cellular disruptor (CD) was employed instead of the classical Soxhlet extraction, and Florisil® was used in the clean-up processo Incinerator ashes were extracted by Soxhlet, US and CD, followed by c1ean-up according to official methods (sequence of silica, alumina and carbonlcelite columns) or using Florisil®. The obtained data showed that: a) extraction by US was not adequate due to low recovery; b) extraction by CD showed a extraction capability comparable to the official Soxhlet extraction; c) Florisil® showed to be efficient for clean-up, allowing several interferents to be present causing analytical difficulties; d) the methodology proposed by VARIAN proved to be efficient for the studied samples, including a real sample constituted by hospital incinerator ashes, for which extracts by Soxhlet and CD presented I-TEQ values for PCDD/Fs of 533 ± 56,1 ng g-¹ and 370 ± 81,6 ng g-¹ respectively, being statistically equivalents by the t-test.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Geociências, 2006. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-10-23T13:22:39Z No. of bitstreams: 1 2006_Barbara Alcantara Ferreira Lima.pdf: 2489564 bytes, checksum: 7b7844c3b17e5aee354e06c6a0348760 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-10-18T22:03:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Barbara Alcantara Ferreira Lima.pdf: 2489564 bytes, checksum: 7b7844c3b17e5aee354e06c6a0348760 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-18T22:03:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Barbara Alcantara Ferreira Lima.pdf: 2489564 bytes, checksum: 7b7844c3b17e5aee354e06c6a0348760 (MD5) / Existem vários métodos de datação que são amplamente utilizados de acordo com o tipo de material do qual se quer datar. Os métodos de datação baseados no desequilíbrio radioativo que utilizam a dependência-tempo da perturbação geoquímica entre isótopos 238 235 232 pai e filho da série de decaimento radioativo natural do U, U e Th, cujos membros finais são isótopos estáveis de chumbo, são os que encontram maior uso numa ampla variedade de problemas na geologia, hidrogeologia e arqueologia. O uso deste método em depósitos de cavernas, como espeleotemas e sedimentos clásticos, provou ser uma ferramenta poderosa para estudar o passado climático e mudanças ambientais. Mais especificamente, espeleotemas, principalmente estalagmites, são freqüentemente estudadas para interpretações paleoambientais. Além disso, a aplicação em estudos geológicos inclui a determinação de idade de rochas e água subterrânea, estudos de erosão superficial, transporte e processos de sedimentação, interações rocha-água subterrânea, dentre outros. A preparação química do método é o principal foco desse trabalho que envolve cuidadoso controle de procedimentos químicos para eliminar contaminação de laboratório e calibração precisa do espectrômetro de massa para obter alta reprodutibilidade. O processo se dá em várias etapas: preparação da amostra, digestão e separação cromatográfica utilizando padrões sintéticos e amostras já datadas em outros laboratórios no mundo, leitura das razões isotópicas em espectrômetro de massa, além do estudo da estalagmite JA-5 da Caverna João Arruda em Bonito-MS. Os resultados obtidos mostram que o método funciona, principalmente com relação à co-precipitação do U e Th e separação cromatográfica desses metais. Observa- se também que as idades obtidas estão dentro do erro associado a cada amostra e se aproximam dos valores obtidos em outros laboratórios (laboratórios validados quanto ao método). É evidente que alguns ajustes devem ser levados em consideração para ter um resultado melhor, principalmente no ajuste do método de leitura em MC-ICP-MS. O estudo de caso feito com a estalagmite JA-5 sugere que a amostra parou de crescer em torno de 2,0 ky. Este estudo é diferente se o comparamos com o dado obtido para a estalagmite JA-3 encontrada na mesma caverna, mas em locais de dinâmica hídica diferente. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / There are many dating methods largely used according to the kind of material to be dated. Methods that rely on the time-dependency of geochemical disequilibrium 238 235 232 U, U and Th natural decay system, between daughter and parent isotope, from the whose final members are stable Pb isotopes, are the most useful in a broader variety of geological, hydrological and archeological problems. The use of this method in cave deposits like speleothems and clastic sediments proved to be a powerful tool to study past climatic and environmental changes. Speleothems like stalagmites are frequently used in paleoenvironmental interpretations. This method may be applied to rocks and underground water dating, erosion studies, transport and sedimentation processes, interactions between rock-groundwater, among others. The present work focuses on the chemical preparation of the U-Th method including the chemical procedures to avoid laboratory contamination and the mass spectrometer precise calibration in order to get high reproducibility. The process has many steps: samples preparation; digestion and chromatographic separation using standards and samples already dated in other laboratories; determination of the isotopic ratios by mass spectrometers, and a case study based on a stalagmite from João Arruda cave, Bonito, Mato Grosso State, Brazil. The obtained data shows the reliability of the method works, mostly in relation to co precipitation of U and Th and to the chromatographic separation of these metals. It is also observed that the obtained dates are within the errors for each sample and are very similar to the dates obtained in other laboratories (validated to this methodology). Further improvements are necessary to achieve better results, mostly related to the reading method in the MC-ICP-MS. The case study in the JA-5 stalagmite shows that it stopped growing around 2,0 ky. This is a different result from that obtained on JA-3 stalagmite, from the same cave, but placed in a spot with different hydrodynamics.

Os métodos oficiais da Agência de Proteção Ambiental Norte-americana (EPA) para análise de dioxinas e furanos, utilizam espectrômetros de massas de alta e baixa resolução para identificação e quantificação destes compostos. A extração da amostra é realizada por Soxhlet (SOX) e a etapa de clean up por uma seqüência de colunas de sílica, alumina e carbono/celite. O método que usa espectrômetro de massas de alta resolução é o mais preciso e seguro para este tipo de análise, sendo também o de maior custo. Com o intuito de estabelecer uma análise segura e de menor custo, o presente trabalho teve como proposta a avaliação da aplicação da metodologia de identificação e quantificação de dioxinas e furanos, utilizando espectrômetro de massas de baixa resolução, "íon trap", no modo massas/massas (MS/MS) segundo a metodologia proposta pela empresa VARIAN. Foi também estudada a extração da amostra por ultra-som convencional (US) e ultra-som de ponta, conhecido como disruptor celular (DC) em substituição ao método clássico de extração por soxhlet, bem como a utilização de Florisil® no processo de clean up. Desta forma, amostras de cinzas de incinerador foram extraídas por soxhlet, US e DC e submetidas a processos de clean up segundo os métodos oficiais (seqüência de colunas de sílica, alumina e carbono/celite) ou utilização de Florisil®. Os dados obtidos neste trabalho mostraram que: a- a extração por US não foi adequada, devido à baixa recuperação apresentada; b- a extração por DC mostrou potencialidade de extração semelhante à técnica oficial de extração por Soxhlet; c- o Florisil® não demonstrou ser eficiente no processo de clean up, possibilitando a permanência de vários interferentes os quais dificultaram em muito a análise; d- .a metodologia proposta pela VARIAN foi eficiente nas amostras em estudo, inclusive na amostra real, em que foi utilizada uma cinza de incinerador hospitalar, cujos extratos obtidos, tanto por Soxhlet quanto por DC apresentaram valores de PCDD/Fs de 533 ± 56,1 e 370 ± 81,6 ng g-¹ de I-TEQ respectivamente, sendo estatisticamente equivalentes pelo teste t. / The official EPA (American Envirorunental Protection Agency) methods for analysing dioxins and furans make use of high and low resolution mass spectrometers to identify and quantify these compounds. Sample extraction is carried out in a Soxhlet followed by clean-up by a sequence of silica, alumina and carbon/celite columns. The method using a high resolution spectrometer is the most accurate and confident for this kind of analysis being also the most expensive. In order to establish a cheap and confident analytical method, the present word had the purpose of evaluate the methodology for identification and quantification of dioxins and furans using low resolution ion trap mass spectrometer, in the mass/mass mode (MS/MS). Furthermore, sample extraction by conventional ultra sound (US) and cellular disruptor (CD) was employed instead of the classical Soxhlet extraction, and Florisil® was used in the clean-up processo Incinerator ashes were extracted by Soxhlet, US and CD, followed by c1ean-up according to official methods (sequence of silica, alumina and carbonlcelite columns) or using Florisil®. The obtained data showed that: a) extraction by US was not adequate due to low recovery; b) extraction by CD showed a extraction capability comparable to the official Soxhlet extraction; c) Florisil® showed to be efficient for clean-up, allowing several interferents to be present causing analytical difficulties; d) the methodology proposed by VARIAN proved to be efficient for the studied samples, including a real sample constituted by hospital incinerator ashes, for which extracts by Soxhlet and CD presented I-TEQ values for PCDD/Fs of 533 ± 56,1 ng g-¹ and 370 ± 81,6 ng g-¹ respectively, being statistically equivalents by the t-test.

Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2017-08-03T18:13:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016LauraEspindolaArgenti.pdf: 1888934 bytes, checksum: 5a510c6a2ebfe58080f9144331b8f7d6 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2017-08-21T17:48:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016LauraEspindolaArgenti.pdf: 1888934 bytes, checksum: 5a510c6a2ebfe58080f9144331b8f7d6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-21T17:48:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016LauraEspindolaArgenti.pdf: 1888934 bytes, checksum: 5a510c6a2ebfe58080f9144331b8f7d6 (MD5) Previous issue date: 2017-08 / CAPES / Durante o trânsito epididimário, os espermatozoides são expostos às secreções do epitélio, formando um ambiente natural essencial para a aquisição de motilidade e capacidade fertilizante pelas células espermáticas. O proteoma do fluido epididimário já vem sendo estudado por grupos de pesquisa há alguns anos e proteínas importantes vêm sendo identificadas no fluido da cauda do epidídimo; no entanto, uma investigação mais profunda da proteômica deste fluido nunca foi feita. No primeiro trabalho apresentado nesta dissertação, a técnica de identificação multidimensional de proteínas (MudPIT) foi utilizada para identificação de proteínas no fluido da cauda do epidídimo. Um total de 663 proteínas foi identificado, sendo que as proteínas mais abundantes observadas em uma análise semi-quantitativa foram as seguintes (contagens espectrais): epididymal-specific lipocalin-5 (1465), beta-hexosaminidase subunit beta precursor (1346), phosphatidylethanolamine-binding protein 4 precursor (367), lactotransferrin precursor (226), brain acid soluble protein 1 isoform 2 (134), di-N-acetylchitobiase (115), epididymis-specific alpha-mannosidase (114), epididymal secretory glutathione peroxidase precursor (112), reticulocalbin-1 isoform 2 (103) e alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme (101). A identificação de 663 proteínas no fluido da cauda do epidídimo de suínos possibilita uma maior compreensão dos processos de armazenamento à que estas células são submetidas neste ambiente e, a partir disso, possibilita o desenvolvimento técnicas de reprodução tanto para a solução de problemas de infertilidade humana quanto de produção animal. Em um segundo experimento, avaliou-se a atividade de proteínas antioxidantes presentes no plasma seminal durante as quatro estações do ano e sua variação estacional, em correlação com parâmetros de qualidade seminal. As enzimas previamente selecionadas para avaliação foram a superóxido-dismutase (SOD) e a glutationa peroxidase (GPx). Os parâmetros seminais avaliados apresentaram-se constantes durante todo o ano, sendo observada diferença entre estações apenas na concentração espermática e motilidade rápida após 5 dias de refrigeração a 17°C. As defesas antioxidantes do plasma seminal, medidas através das atividades de GPx e SOD se mantiveram constantes durante o ano. A avaliação destas enzimas nas células espermáticas evidenciou um aumento de atividade de SOD no verão e primavera (P < 0,05). As atividades das enzimas GPx e SOD apresentaram apenas duas correlações com motilidade total após 5 dias de preservação a 17°C. A atividade de SOD nos espermatozoides apresentou correlação negativa fraca (R2 = 0,4517; P = 0.0022). No plasma seminal, a GPx também apresentou correlação negativa (R2 = 0,2447; P = 0,0369). Conclui-se que, apesar de variações individuais, não ocorreram variações significativas na qualidade espermática ao longo do ano. / During epididymal transit, sperm are exposed to epididymal secretions, which form an essential natural environment for the motility acquisition and fertilizing ability by sperm cells. The epididymal fluid proteome has already been studied by research groups for some years and important proteins have been identified in the cauda epididymal fluid (CEF); however, further investigation of this fluid proteomics was never made. In the first work presented multidimensional protein identification technique (mudPIT) was used to identify CEF proteins. A total of 663 proteins were identified, of which the most abundant proteins observed in a semi-quantitative analysis were as follows (spectral counts): epididymal-specific lipocalin-5 (1465), beta-hexosaminidase subunit precursor beta (1346), phosphatidylethanolamine -binding protein 4 precursor (367), lactotransferrin precursor (226), Brain acid soluble protein 1 isoform 2 (134), di-n-acetylchitobiase, partial (115), alpha-mannosidase epididymis-specific (114), epididymal secretory glutathione peroxidase precursor (112), reticulocalbin 2 isoform-1 (103) and alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme (101). The emergence of new techniques of proteomic analysis provides a better understanding of metabolic pathways and metabolic processes guided by proteins. Identify 663 proteins in the CEF of boars means understand the storage process to which sperm cells undergo and, from that, be able to develop breeding techniques both to solve problems of human infertility as of agricultural production. In a second experiment, the activity of antioxidant proteins present in the seminal plasma during the four seasons of the year and its seasonal variation in correlation with sperm quality parameters were evaluated. The enzymes previously selected for evaluation were superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx). The evaluated seminal parameters were constant throughout the whole year, with no difference between stations, only in sperm concentration and motility after 5 days after storage at 17 ° C. The antioxidant defenses of the seminal plasma, through measures of GPx and SOD activities remained constant during the year. The evaluation of these enzymes in the sperm showed an increase of SOD activity in spring and summer (P <0.05). The activities of GPx and SOD had only two correlations, total motility after 5 days of preservation at 17 ° C. The SOD activity in the sperm had a weak negative correlation (R2 = - 0.4517, P = 0.0022). In seminal plasma, GPx also showed a negative correlation (R 2 = 0.2447, P = 0.0369).

Orientador: Eunice Oba / Resumo: A composição dos lipídeos da membrana espermática e do plasma seminal estão entre os fatores que podem influenciar a capacidade fecundante do sêmen. Desta maneira, este estudo objetivou analisar as diferenças do perfil lipídico do ejaculado de bovinos da raça Nelore, resistentes e sensíveis à criopreservação. Foram utilizados 15 touros da raça Nelore para colheitas de sêmen utilizando eletroejaculador. Os ejaculados foram diluídos com meio convencional na concentração de 25x106 espermatozoides/palheta. Os animais foram divididos em dois grupos conforme a resistência pós-criopreservação, grupo A (Bad freezer, touros sensíveis à criopreservação) e grupo B (Good freezer, touros resistentes à criopreservação). O sêmen fresco foi analisado quanto morfologia realizada por microscopia de interferência diferencial (DIC), cinética espermática e integridade da membrana. Na pós-descongelação as amostras foram avaliadas quanto a cinética espermática, integridade das membranas plasmáticas e acrossomal, caspase ativa, peroxidação lipídica. A análise do perfil de lipídios foi realizada por espectrometria de massa MALDI-MS. Foi possível observar diferença no perfil lipídico dos espermatozoides e do plasma seminal entre os grupos, com maior abundância relativa dos íons m/z 704,59; m/z 804,59 e m/z 943,77 no grupo A nos espermatozoides. No plasma seminal houve maior abundância relativa de 34 íons lipídicos nos touros do grupo B. Assim sendo, conclui-se que existe diferença no perfil de lipídio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor