A resposta inflamatória uterina pós-cobertura ocorre para remoção de espermatozoides e contaminantes; todavia, o atraso em debelar este processo têm sido identificado, em equinos, como a principal causa de endometrite persistente pós-cobertura. A pentoxifilina atua como um inibidor da fosfodiesterase e aumenta as características de motilidade espermática, ainda tem sido relatada sua participação como agente reológico, aumentando o fluxo sanguíneo de tecidos comprometidos, e como agente imunomodulador. O propósito deste estudo foi examinar os efeitos da pentoxifilina adicionada ao diluidor seminal pós-descongelação, sobre a motilidade espermática, membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial e integridade de cromatina, bem como sobre a resposta inflamatória uterina após a inseminação artificial de éguas. Dez partidas de sêmen de um único garanhão foram criopreservadas (100x106 espermatozoides/palheta 0,5 mL) em sistema automatizado (TK 3000) e mantidas em botijão criogênico, sendo posteriormente utilizadas para análises laboratoriais e inseminação artificial. Para análise laboratorial duas palhetas de sêmen de cada partida foram descongeladas (37ºC/30 segundos) e diluídas em diluidor à base de leite desnatado (controle) e diluidor à base de leite desnatado contendo pentoxifilina (7,18 mM). As alíquotas de cada tratamento foram mantidas em banho-Maria seco (37°C) e analisadas em quatro momentos: 5 (T0), 30 (T30), 60 (T60) e 120 minutos (T120) pós-diluição e incubação. As amostras foram analisadas quanto às características de movimento espermático, por sistema computadorizado de análise espermática (CASA), membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial por associação de sondas fluorescentes (PI, H342, FITC-PSA e JC-1), morfologia espermática por contraste de interferência diferencial e integridade da cromatina pelo Azul de Toluidina. Para avaliar os efeitos do diluidor contendo ou não pentoxifilina na resposta inflamatória uterina, foram utilizadas 15 éguas distribuídas em cinco grupos: Grupo Control (controle): sem deposição de sêmen, nem diluidor, mimetizando-se o procedimento da IA; Grupo SM Extender: deposição de diluidor sem pentoxifilina (Botusemen®, Botupharma); Grupo SM Extender + PTX: deposição de diluidor contendo pentoxifilina; Grupo Sêmen: deposição de sêmen diluído com diluidor sem pentoxifilina; Grupo Sêmen + PTX: deposição de sêmen diluído com diluidor contendo pentoxifilina (7,18 mM). A hemodinâmica uterina foi avaliada por ultrassonografia nos modo color e espectral realizadas nos períodos: imediatamente antes da indução da ovulação (aproximadamente 30 horas antes da IA, T-30), imediatamente antes da inseminação artificial (TIA) e 2 (T2), 6 (T6), 12 (T12), 24 (T24) e 48 (T48) horas após a inseminação artificial. Uma amostra para citologia endometrial foi coletada, por escova ginecológica no momento T6. A análise estatística foi realizada utilizando-se análise de variância (ANOVA), sendo as médias comparadas pelo LSD test, SAS versão 9.3 (2010). A adição de pentoxifilina não exerceu efeito sobre a motilidade progressiva, porém, a pentoxifilina aumentou velocidade de trajeto, velocidade progressiva e velocidade curvilinear quando comparada ao controle. Não houve diferença significativa na porcentagem de células apresentando membrana plasmática intacta, acrossoma intacto e alto potencial mitocondrial (PIAIC). Nenhuma diferença estatística foi encontrada no fluxo sanguíneo uterino de éguas após os tratamentos. Porém, a citologia endometrial demonstrou maior resposta inflamatória em grupos contendo pentoxifilina quando comparado aos controles. Concluiu-se que a pentoxifilina exerce efeito positivo sobre parâmetros de velocidade, mas não influencia as membranas celulares e a cromatina. No entanto, quando as éguas são inseminadas com sêmen contendo pentoxifilina, uma resposta inflamatória mais intensa é observada. / The post breeding uterine inflammatory response occurs due to remove spermatozoa and contaminants; however, delayed uterine clearance has been identified, in equines, as the underlying cause of persistent post breeding endometritis. Pentoxifylline acts as a phosphodiesterase inhibitor and increases sperm motion characteristics, and it has been reported to participate as a rheologic agent, improving blood flow to compromised tissues, and as an immunomodulatory agent. The purpose of this study was to examine the effects of pentoxifylline added to the seminal extender after thawing, on sperm motion, plasmatic, acrosomal and mitochondrial membranes and chromatin integrities, as well as the uterine inflammatory response on mares after artificial insemination. Ten batches of a unique stallion were cryopreserved (100x106 spermatozoa/0.5 mL straws), in an automated system (TK 3000) and storaged in cryogenic cylinder for posterior use for laboratory analysis and artificial insemination. For laboratory analysis two semen straws of each batch were thawed (37°C/30 seconds) and diluted in skim milk based extender (control) or diluted in skim milk extender containing pentoxifylline (7.18 mM). Aliquots of each treatment were maintained in dry water bath (37°C) and analyzed at four moments: 5 (T0), 30 (T30), 60 (T60) and 120 minutes (T120) post dilution and incubation. Samples were analyzed for sperm motion characteristics, through Computer-Assisted Semen Analysis (CASA), plasmatic, acrosomal and mitochondrial membranes through fluorescent probes association (PI, H342, FITC-PSA and JC-1), spermatic morphology through differential interference contrast and chromatin integrity through Toluidine blue. To examine the effect of extender containing or not pentoxifylline on uterine inflammatory response 15 mares were divided into 5 groups: Group Ccontrol (control): no uterine deposition of semen, or extender, just mimicking the AI procedure; Group SM Extender: deposition of skim milk based extender (Botusemen®, Botupharma); Group SM Extender + PTX: deposition of skim milk based extender containing Pentoxifylline; Group Semen: deposition of semen diluted with extender only; Group Semen + PTX: deposition of semen diluted with extender containing Pentoxifylline (7,18 mM). Uterine hemodynamics were examined through color and spectral mode ultrasonography on moments: immediately before ovulation induction (approximately 30 hours before AI, T-30), immediately before artificial insemination (TAI) and 2 (T2), 6 (T6), 12 (T12), 24 (T24) and 48 (T48) hours after artificial insemination. Samples for endometrial cytology were collected, through cytobrush at T6 moment. Statistical analysis was performed using the analysis of variance (ANOVA), and the range was compared by LSD test, SAS 9.3 version (2010). Pentoxifylline addition did not exert effect on progressive motility, however, pentoxifylline increased path velocity, progressive velocity and curvilinear velocity when compared to controls. There were no significant differences on the percentage of cells presenting intact plasma membrane, intact acrosome and high mitochondrial membrane potential (IPIAH). No statistical difference was found on uterine blood flow of mares after treatments. However, endometrial cytology showed a major inflammatory response on groups containing Pentoxifylline when compared to controls. In conclusion, pentoxifylline exerted a positive effect on velocity parameters, but do not influence cellular membranes and chromatin. Furthermore, when mares were inseminated with semen containing pentoxifylline, an intense inflammatory response was observed.

A resposta inflamatória uterina pós-cobertura ocorre para remoção de espermatozoides e contaminantes; todavia, o atraso em debelar este processo têm sido identificado, em equinos, como a principal causa de endometrite persistente pós-cobertura. A pentoxifilina atua como um inibidor da fosfodiesterase e aumenta as características de motilidade espermática, ainda tem sido relatada sua participação como agente reológico, aumentando o fluxo sanguíneo de tecidos comprometidos, e como agente imunomodulador. O propósito deste estudo foi examinar os efeitos da pentoxifilina adicionada ao diluidor seminal pós-descongelação, sobre a motilidade espermática, membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial e integridade de cromatina, bem como sobre a resposta inflamatória uterina após a inseminação artificial de éguas. Dez partidas de sêmen de um único garanhão foram criopreservadas (100x106 espermatozoides/palheta 0,5 mL) em sistema automatizado (TK 3000) e mantidas em botijão criogênico, sendo posteriormente utilizadas para análises laboratoriais e inseminação artificial. Para análise laboratorial duas palhetas de sêmen de cada partida foram descongeladas (37ºC/30 segundos) e diluídas em diluidor à base de leite desnatado (controle) e diluidor à base de leite desnatado contendo pentoxifilina (7,18 mM). As alíquotas de cada tratamento foram mantidas em banho-Maria seco (37°C) e analisadas em quatro momentos: 5 (T0), 30 (T30), 60 (T60) e 120 minutos (T120) pós-diluição e incubação. As amostras foram analisadas quanto às características de movimento espermático, por sistema computadorizado de análise espermática (CASA), membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial por associação de sondas fluorescentes (PI, H342, FITC-PSA e JC-1), morfologia espermática por contraste de interferência diferencial e integridade da cromatina pelo Azul de Toluidina. Para avaliar os efeitos do diluidor contendo ou não pentoxifilina na resposta inflamatória uterina, foram utilizadas 15 éguas distribuídas em cinco grupos: Grupo Control (controle): sem deposição de sêmen, nem diluidor, mimetizando-se o procedimento da IA; Grupo SM Extender: deposição de diluidor sem pentoxifilina (Botusemen®, Botupharma); Grupo SM Extender + PTX: deposição de diluidor contendo pentoxifilina; Grupo Sêmen: deposição de sêmen diluído com diluidor sem pentoxifilina; Grupo Sêmen + PTX: deposição de sêmen diluído com diluidor contendo pentoxifilina (7,18 mM). A hemodinâmica uterina foi avaliada por ultrassonografia nos modo color e espectral realizadas nos períodos: imediatamente antes da indução da ovulação (aproximadamente 30 horas antes da IA, T-30), imediatamente antes da inseminação artificial (TIA) e 2 (T2), 6 (T6), 12 (T12), 24 (T24) e 48 (T48) horas após a inseminação artificial. Uma amostra para citologia endometrial foi coletada, por escova ginecológica no momento T6. A análise estatística foi realizada utilizando-se análise de variância (ANOVA), sendo as médias comparadas pelo LSD test, SAS versão 9.3 (2010). A adição de pentoxifilina não exerceu efeito sobre a motilidade progressiva, porém, a pentoxifilina aumentou velocidade de trajeto, velocidade progressiva e velocidade curvilinear quando comparada ao controle. Não houve diferença significativa na porcentagem de células apresentando membrana plasmática intacta, acrossoma intacto e alto potencial mitocondrial (PIAIC). Nenhuma diferença estatística foi encontrada no fluxo sanguíneo uterino de éguas após os tratamentos. Porém, a citologia endometrial demonstrou maior resposta inflamatória em grupos contendo pentoxifilina quando comparado aos controles. Concluiu-se que a pentoxifilina exerce efeito positivo sobre parâmetros de velocidade, mas não influencia as membranas celulares e a cromatina. No entanto, quando as éguas são inseminadas com sêmen contendo pentoxifilina, uma resposta inflamatória mais intensa é observada. / The post breeding uterine inflammatory response occurs due to remove spermatozoa and contaminants; however, delayed uterine clearance has been identified, in equines, as the underlying cause of persistent post breeding endometritis. Pentoxifylline acts as a phosphodiesterase inhibitor and increases sperm motion characteristics, and it has been reported to participate as a rheologic agent, improving blood flow to compromised tissues, and as an immunomodulatory agent. The purpose of this study was to examine the effects of pentoxifylline added to the seminal extender after thawing, on sperm motion, plasmatic, acrosomal and mitochondrial membranes and chromatin integrities, as well as the uterine inflammatory response on mares after artificial insemination. Ten batches of a unique stallion were cryopreserved (100x106 spermatozoa/0.5 mL straws), in an automated system (TK 3000) and storaged in cryogenic cylinder for posterior use for laboratory analysis and artificial insemination. For laboratory analysis two semen straws of each batch were thawed (37°C/30 seconds) and diluted in skim milk based extender (control) or diluted in skim milk extender containing pentoxifylline (7.18 mM). Aliquots of each treatment were maintained in dry water bath (37°C) and analyzed at four moments: 5 (T0), 30 (T30), 60 (T60) and 120 minutes (T120) post dilution and incubation. Samples were analyzed for sperm motion characteristics, through Computer-Assisted Semen Analysis (CASA), plasmatic, acrosomal and mitochondrial membranes through fluorescent probes association (PI, H342, FITC-PSA and JC-1), spermatic morphology through differential interference contrast and chromatin integrity through Toluidine blue. To examine the effect of extender containing or not pentoxifylline on uterine inflammatory response 15 mares were divided into 5 groups: Group Ccontrol (control): no uterine deposition of semen, or extender, just mimicking the AI procedure; Group SM Extender: deposition of skim milk based extender (Botusemen®, Botupharma); Group SM Extender + PTX: deposition of skim milk based extender containing Pentoxifylline; Group Semen: deposition of semen diluted with extender only; Group Semen + PTX: deposition of semen diluted with extender containing Pentoxifylline (7,18 mM). Uterine hemodynamics were examined through color and spectral mode ultrasonography on moments: immediately before ovulation induction (approximately 30 hours before AI, T-30), immediately before artificial insemination (TAI) and 2 (T2), 6 (T6), 12 (T12), 24 (T24) and 48 (T48) hours after artificial insemination. Samples for endometrial cytology were collected, through cytobrush at T6 moment. Statistical analysis was performed using the analysis of variance (ANOVA), and the range was compared by LSD test, SAS 9.3 version (2010). Pentoxifylline addition did not exert effect on progressive motility, however, pentoxifylline increased path velocity, progressive velocity and curvilinear velocity when compared to controls. There were no significant differences on the percentage of cells presenting intact plasma membrane, intact acrosome and high mitochondrial membrane potential (IPIAH). No statistical difference was found on uterine blood flow of mares after treatments. However, endometrial cytology showed a major inflammatory response on groups containing Pentoxifylline when compared to controls. In conclusion, pentoxifylline exerted a positive effect on velocity parameters, but do not influence cellular membranes and chromatin. Furthermore, when mares were inseminated with semen containing pentoxifylline, an intense inflammatory response was observed.

A grande demanda por proteína animal e a importância que a criação bovina exerce sobre a economia nacional, vêm exigindo eficientes sistemas de produção. A preservação e disseminação da genética do rebanho bovino dependem de biotecnologias como a criopreservação espermática, inseminação artificial e fertilização in vitro. No entanto, atualmente muito tem sido discutido sobre o uso da gema de ovo nos diluidores seminais. Pois apresentam variabilidade em sua composição e risco de contaminação microbiológica. Em contrapartida, apesar dos diluidores sintetizados com lecitina de soja não fornecerem esses riscos, seus resultados não são muito satisfatórios na criopreservação espermática bovina. Com base na hipótese de que a suplementação do diluidor seminal à base de lecitina de soja com antioxidantes, preserve as características das células espermáticas de maneira tão eficiente quanto à gema de ovo, o objetivo do presente experimento foi comparar o efeito do diluidor à base de gema de ovo com o diluidor à base de lecitina de soja (com e sem antioxidantes), sobre a manutenção da funcionalidade e fertilidade de amostras espermáticas bovinas criopreservadas. Para tal, foram utilizadas amostras seminais de 20 touros Brangus, cujas colheitas foram realizadas pelo método de eletroejaculação e as amostras foram diluídas em 4 grupos de diluidores: LElecitina de soja (sem a adição de antioxidantes); LAlecitina de soja suplementada com ácido ascórbico (AA, 4,5mM); LS lecitina de soja suplementada com superóxido dismutase (SOD, 60UI/mL) e GOgema de ovo (sem adição de antioxidantes). O sêmen foi então, criopreservado de maneira automatizada. As amostras foram descongeladas e analisadas quanto aos testes laboratoriais de motilidade computadorizada do espermatozóide (CASA); integridade de membrana plasmática (eosina/nigrosina); integridade de membrana acrossomal (fast Green/ rosa bengala); atividade citoquímica mitocondrial (DAB); susceptibilidade do DNA à desnaturação (SCSA); índice de estresse oxidativo induzido (TBARS). Além disso, foram realizados testes para verificar o potencial de fertilidade das amostras espermáticas criopreservadas. A fertilidade in vivo foi realizada pela técnica de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando 450 fêmeas bovinas, seguido de exame ultrassonográfico para avaliação de prenhez. Teste de fertilidade in vitro, foi realizado pela técnica de produção in vitro de embriões (PIV) com o uso de ovários de frigoríficos, a classificação do desenvolvimento embrionário e a avaliação da motilidade espermática foram promovidas no decorrer do processo. Os resultados demonstraram que o diluidor LE apresentou efeito na proteção espermática de maneira semelhante ao diluidor GO. No entanto a suplementação desse primeiro com antioxidantes é uma alternativa para melhorar ainda mais esse processo, já que a taxa de prenhez obtida nos grupos LA e LS é satisfatória em um programa de IATF. Ainda o grupo LS foi o que apresentou melhores resultados no processo de PIV. Concluindo que o diluidor à base de lecitina de soja suplementado com o antioxidante superóxido dismutase seria uma opção para a substituição definitiva dos diluidores sintetizados com gema de ovo. / Due to the great demand for animal protein and the importance that bovine breeding exert on national economy, efficient production systems have been required. Cattle genetics preservation and dissemination depend on reproductive biotechnologies such as sperm cryopreservation, artificial insemination and in vitro fertilization. However, the use of egg yolk-based extender is under discussion nowadays, once there is great variability in its composition and risks of bacteriological contamination. On the other hand, despite soybean lecithin-based extenders do not present these risks, satisfactory results, after bovine sperm cryopreservation, have not been reached yet. Based on the hypothesis that soybean lecithinbased extender supplemented with antioxidants, preserve the sperm cell characteristics so efficient as egg yolk does, the aim of the present experiment was to compare the effects of egg yolk-based extender and soybean lecithin-based extender (with and without antioxidants), on functionality and fertility maintenance of bovine cryopreserved sperm samples. For this, seminal samples from 20 Brangus bulls were used, collects were realized by eletroejaculation method and samples were diluted in 4 extenders group: LE-soybean lecithin-based extender (without antioxidant supplementation); LA- soybean lecithin supplemented with ascorbic acid (AA, 4,5mM); LS- soybean lecithin supplemented with superoxide dismutase (SOD, 60UI/mL) and GO-egg yolk-based extender (without antioxidant supplementation). Then, semen was cryopreserved by automatic method. Samples were thawed and analyzed by laboratorial tests such as computer assisted semen analysis (CASA); plasma membrane integrity (eosin/nigrosin); acrosome membrane integrity (fast green/ rose bengal); mitochondrial cytochemical activity (DAB); susceptibility of chromatin denaturation (SCSA); induced oxidative stress index (TBARS). Furthermore, tests for fertility potential of cryopreserved semen samples were performed. In vivo fertility was accessed by timed artificial insemination (TAI), 450 bovine females were inseminated, and ultrasonographical exam was realized for pregnancy detection. In vitro fertility test was accessed by embryo in vitro production (IVP), ovaries from slaughterhouses were used, embryo development classification and sperm motility were promoted during the process. Results indicate that sperm protection is similar between LE and GO extenders. However the antioxidant supplementation of soybean lecithin-based extender is a great alternative to improve the process of sperm protection, since pregnancy rate of LA and LS groups was satisfactory for a TAI program. Besides, LS group presented the best results on IVP process. In conclusion, soybean lecithin-based extender supplemented with superoxide dismutase would be a better option for a definite replacement of egg yolk-based extender for sperm bovine cryopreservation.

A grande demanda por proteína animal e a importância que a criação bovina exerce sobre a economia nacional, vêm exigindo eficientes sistemas de produção. A preservação e disseminação da genética do rebanho bovino dependem de biotecnologias como a criopreservação espermática, inseminação artificial e fertilização in vitro. No entanto, atualmente muito tem sido discutido sobre o uso da gema de ovo nos diluidores seminais. Pois apresentam variabilidade em sua composição e risco de contaminação microbiológica. Em contrapartida, apesar dos diluidores sintetizados com lecitina de soja não fornecerem esses riscos, seus resultados não são muito satisfatórios na criopreservação espermática bovina. Com base na hipótese de que a suplementação do diluidor seminal à base de lecitina de soja com antioxidantes, preserve as características das células espermáticas de maneira tão eficiente quanto à gema de ovo, o objetivo do presente experimento foi comparar o efeito do diluidor à base de gema de ovo com o diluidor à base de lecitina de soja (com e sem antioxidantes), sobre a manutenção da funcionalidade e fertilidade de amostras espermáticas bovinas criopreservadas. Para tal, foram utilizadas amostras seminais de 20 touros Brangus, cujas colheitas foram realizadas pelo método de eletroejaculação e as amostras foram diluídas em 4 grupos de diluidores: LElecitina de soja (sem a adição de antioxidantes); LAlecitina de soja suplementada com ácido ascórbico (AA, 4,5mM); LS lecitina de soja suplementada com superóxido dismutase (SOD, 60UI/mL) e GOgema de ovo (sem adição de antioxidantes). O sêmen foi então, criopreservado de maneira automatizada. As amostras foram descongeladas e analisadas quanto aos testes laboratoriais de motilidade computadorizada do espermatozóide (CASA); integridade de membrana plasmática (eosina/nigrosina); integridade de membrana acrossomal (fast Green/ rosa bengala); atividade citoquímica mitocondrial (DAB); susceptibilidade do DNA à desnaturação (SCSA); índice de estresse oxidativo induzido (TBARS). Além disso, foram realizados testes para verificar o potencial de fertilidade das amostras espermáticas criopreservadas. A fertilidade in vivo foi realizada pela técnica de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando 450 fêmeas bovinas, seguido de exame ultrassonográfico para avaliação de prenhez. Teste de fertilidade in vitro, foi realizado pela técnica de produção in vitro de embriões (PIV) com o uso de ovários de frigoríficos, a classificação do desenvolvimento embrionário e a avaliação da motilidade espermática foram promovidas no decorrer do processo. Os resultados demonstraram que o diluidor LE apresentou efeito na proteção espermática de maneira semelhante ao diluidor GO. No entanto a suplementação desse primeiro com antioxidantes é uma alternativa para melhorar ainda mais esse processo, já que a taxa de prenhez obtida nos grupos LA e LS é satisfatória em um programa de IATF. Ainda o grupo LS foi o que apresentou melhores resultados no processo de PIV. Concluindo que o diluidor à base de lecitina de soja suplementado com o antioxidante superóxido dismutase seria uma opção para a substituição definitiva dos diluidores sintetizados com gema de ovo. / Due to the great demand for animal protein and the importance that bovine breeding exert on national economy, efficient production systems have been required. Cattle genetics preservation and dissemination depend on reproductive biotechnologies such as sperm cryopreservation, artificial insemination and in vitro fertilization. However, the use of egg yolk-based extender is under discussion nowadays, once there is great variability in its composition and risks of bacteriological contamination. On the other hand, despite soybean lecithin-based extenders do not present these risks, satisfactory results, after bovine sperm cryopreservation, have not been reached yet. Based on the hypothesis that soybean lecithinbased extender supplemented with antioxidants, preserve the sperm cell characteristics so efficient as egg yolk does, the aim of the present experiment was to compare the effects of egg yolk-based extender and soybean lecithin-based extender (with and without antioxidants), on functionality and fertility maintenance of bovine cryopreserved sperm samples. For this, seminal samples from 20 Brangus bulls were used, collects were realized by eletroejaculation method and samples were diluted in 4 extenders group: LE-soybean lecithin-based extender (without antioxidant supplementation); LA- soybean lecithin supplemented with ascorbic acid (AA, 4,5mM); LS- soybean lecithin supplemented with superoxide dismutase (SOD, 60UI/mL) and GO-egg yolk-based extender (without antioxidant supplementation). Then, semen was cryopreserved by automatic method. Samples were thawed and analyzed by laboratorial tests such as computer assisted semen analysis (CASA); plasma membrane integrity (eosin/nigrosin); acrosome membrane integrity (fast green/ rose bengal); mitochondrial cytochemical activity (DAB); susceptibility of chromatin denaturation (SCSA); induced oxidative stress index (TBARS). Furthermore, tests for fertility potential of cryopreserved semen samples were performed. In vivo fertility was accessed by timed artificial insemination (TAI), 450 bovine females were inseminated, and ultrasonographical exam was realized for pregnancy detection. In vitro fertility test was accessed by embryo in vitro production (IVP), ovaries from slaughterhouses were used, embryo development classification and sperm motility were promoted during the process. Results indicate that sperm protection is similar between LE and GO extenders. However the antioxidant supplementation of soybean lecithin-based extender is a great alternative to improve the process of sperm protection, since pregnancy rate of LA and LS groups was satisfactory for a TAI program. Besides, LS group presented the best results on IVP process. In conclusion, soybean lecithin-based extender supplemented with superoxide dismutase would be a better option for a definite replacement of egg yolk-based extender for sperm bovine cryopreservation.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-13T13:41:47Z No. of bitstreams: 1 Cibele Cavalcanti Souza de Melo.pdf: 1262965 bytes, checksum: a0b751f71b7ca0dbc7f0a215b3c2b60f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T13:41:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cibele Cavalcanti Souza de Melo.pdf: 1262965 bytes, checksum: a0b751f71b7ca0dbc7f0a215b3c2b60f (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The aim was to evaluate the effect of the Aloe vera gel (Aloe barbadensis Miller), in association with the Tris base (hydroxymethyl aminomethane) or powdered coconut water (ACP- 106®) in canine semen conservation, as well as the action of this gel in the renewal process of the extender. Semen samples from five dogs, of breed Basset Hound, were used. In Experiment 1, samples were diluted in duplicate, using Tris plus 20% egg yolk (G1 and G2) or 5% Aloe vera (G3 and G4) and evaluated at 0, 48, 72 and 96 hours. After 48 hours, all samples were centrifuged for 10 minutes (400g) in a cooled centrifuge (5 °C). In the groups G1 and G3 the supernatant was removed and a new extender was added. In the other groups (G2 and G4) pellets were re-diluted in the same supernatant, without renewal. For Experiment 2, samples were divided into two equal aliquots, according to the treatments (G1: Tris + 20% egg yolk, control G2: Tris + 5% Aloe vera; G3: ACP-106® + 5% Aloe vera) and evaluated at 0, 24, 48 and 72 hours after cooling. In both experiments were performed sperm kinetics and membrane integrity analysis (iMP). In Experiment 1 results the diluent renewal did not affect on any parameter analyzed in the group using egg yolk (G1), shown when comparing the two treatments of this substance. The G2 (without renewal) did not demonstrate a significant difference when compared to G1 (renewal). However, groups with Tris-Aloe vera (G3 and G4) were lower (P <0.05) than the groups with Tris-egg yolk (G1 and G2) after the renewal, and this has showed deleterious effect on the group that sperm received new diluent (G3) in all parameters. There were no statistical differences in Experiment 2 in the parameters of total motility, straightness and oscillation index and plasma membrane integrity comparing treatments and evaluation times. However, the progressive motility in G1 proved to be significantly higher (P <0.05) than the other treatments in the first assessment period (0h). However, at 24 the G3 showed values similar to G1. The linearity values of G3 were significantly higher (P <0.05) than other groups from the start of the evaluations. According to the findings from Experiment 1, it can be concluded that the replacement of diluent is not necessary for the preservation of canine spermatozoa undergo cooling (5 °C) for 96 h. Furthermore, it was found that the gel of Aloe vera may be used to replace egg yolk in dog semen cooling diluent at a concentration of 5% without renewal. In the Experiment 2, it can be concluded that Aloe vera can be used at a concentration of 5% to replace egg yolk in dog semen cooling diluent, regardless of the one used. / Objetivou-se avaliar o efeito do gel da planta Aloe vera (Aloe barbadensis Miller), associado ao diluidor Tris (hidroximetil aminometano) ou Água de coco em pó (ACP-106®) na conservação de sêmen de cães, bem como a ação desse gel no processo de renovação do diluidor. Foram utilizadas amostras seminais de cinco cães da raça Basset Hound. No Experimento 1, as amostras foram diluídas em duplicata, utilizando Tris + 20% de gema de ovo (G1 e G2) ou 5% de Aloe vera (G3 e G4), e avaliadas nos tempos de 0, 48, 72 e 96 horas. Após a análise de 48h, todas as amostras foram centrifugadas por 10 min (400g) em centrífuga refrigerada (5 ºC). Nos grupos G1 e G3 o sobrenadante foi removido e um novo diluidor foi adicionado. Nos outros grupos (G2 e G4) os pellets foram re-diluídos no mesmo sobrenadante, sem renovação. Para o Experimento 2, as amostras foram divididas em alíquotas iguais, de acordo com os tratamentos (G1: Tris + 20% gema de ovo, controle; G2: Tris + 5% Aloe vera; G3: ACP-106® + 5% Aloe vera) e avaliados nos tempos de 0, 24, 48 e 72 horas após refrigeração. Em ambos experimentos foram realizadas análises de cinética espermática e de integridade da membrana (iMP). Nos resultados do Experimento 1 a renovação do diluidor não influenciou em nenhum parâmetro analisado no grupo que utilizou gema de ovo (G1), fato evidenciado quando comparados os dois tratamentos que utilizaram esta substância. O G2 (sem renovação) não determinou diferença significativa quando comparado ao G1 (com renovação). Entretanto, os grupos com Tris-Aloe vera (G3 e G4) foram inferiores (P<0,05) aos grupos com Tris-gema de ovo (G1 e G2) após a renovação, e esta mostrou efeito deletério nos espermatozoides do grupo que recebeu novo diluidor (G3), em todos os parâmetros. No Experimento 2 não foram encontradas diferenças estatísticas nos parâmetros de motilidade total, retilinearidade e índice de oscilação e integridade de membrana plasmática quando comparados os tratamentos e os tempos de avaliação. Entretanto, a motilidade progressiva no G1 mostrou-se significativamente superior (P<0,05) aos demais tratamentos no primeiro tempo de avaliação (0h). No entanto, às 24h o G3 demonstrou valores semelhantes ao G1. Os valores de linearidade no G3 foram significativamente superiores (P<0,05) aos demais grupos desde o início das avaliações. De acordo com os achados do Experimento 1, pode-se concluir que a renovação do diluidor não é necessária para a preservação dos espermatozoides caninos submetidos à refrigeração (5 ºC) por 96 h. Além disso, constatou-se que o gel da Aloe vera pode ser utilizado em substituição à gema de ovo, no diluidor de refrigeração de sêmen de cães, na concentração de 5%, sem renovação do diluidor. Já no Experimento 2, pode-se concluir que a Aloe vera pode ser empregada na concentração de 5% em substituição à gema de ovo no diluidor de refrigeração de sêmen de cães, independente do diluidor utilizado.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ComparacaoTRILactose.pdf: 12362671 bytes, checksum: befb540e1392ea0ad095eb2c9ad74dae (MD5) Previous issue date: 2012 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo do experimento foi testar a eficácia de diferentes diluidores, a base de Ringer-Lactato, Leite Desnatado, TRIS (hidroxi-methil-amino-methan) e Lactose/TRIS, na criopreservação de sêmen bubalino. Foram utilizados três machos bubalinos da raça Murrah em plena atividade sexual. O sêmen foi colhido por vagina artificial totalizando 71 ejaculados. Após a colheita, cada amostra foi submetida às análises qualitativas e quantitativas do sêmen. Os ejaculados foram fracionados e diluídos nos quatro diluidores. O sêmen diluído foi envasado em palhetas de 0,25ml e submetidos a um tempo de equilíbrio de até quatro horas a 5ºC, com posterior congelação em nitrogênio líquido. As amostras identificadas foram descongeladas em banho maria à temperatura de 40°C por 30 segundos e seqüencialmente avaliadas quanto a motilidade, vigor, lesão de acrossoma, e percentual de patologias espermáticas. As amostras também foram submetidas ao teste de termo-resistência, permanecendo incubadas à temperatura de 40°C durante 30 segundos, 3-5 minutos, 30 minutos, 1 hora, 2 horas e 3 horas, onde foram avaliadas quanto a motilidade e o vigor espermático. As características físicoquímicas, após análise do sêmen in natura, encontraram-se dentro dos valores preconizados para a espécie bubalina e satisfatórios para o processo de congelação. Após descongelação do sêmen, observou redução numérica estatística (p<0,05) na motilidade espermática, sendo que no sêmen in natura se observou 86,67±6,17% reduzindo para 70±6,92% em TRIS, 67,4±8,01% em Ringer/lactato, 67,09±9,03% em Lactose/TRIS e 59,7±9,05% em leite desnatado e ao comparar entre os quatro tratamentos apenas o Leite desnatado mostrou diferença estatística significativa (p<0,05). Após descongelação, o vigor espermático também diminuiu estatisticamente (p<0,05) nos quatro tratamentos (3,50±0,53 TRIS; 3,38±0,49 Ringer-lactato; 3,3±0,46 Lactose/TRIS e 3,25±0,44 Leite desnatado) versus (4±0,39 sêmen in natura) e ao comparar entre os tratamento, apenas entre Leite desnatado e TRIS se observou diferença estatística (p<0,05). Quanto aos defeitos maiores (4,15±1,9% sêmen in natura; 10,51±4,4% TRIS; 11,94±4,2% Ringer-Lactato; 11,88±4,8% Lactose/TRIS; 12,01±5% Leite desnatado), menores (3,81±1,2% sêmen in natura; 4,67±1,1% TRIS; 4,98±1,7% Ringer-Lactato; 4,93±2,0% Lactose/TRIS; 4,93±2,0% Leite desnatado) e totais (7,91±2,1% sêmen in natura; 15,18±4,7% TRIS; 16,92±4,8% Ringer-Lactato; 16,82±5,6% Lactose/TRIS; 17,11±5,6% Leite desnatado), após descongelação houve aumento significativo dos defeitos nos quatro tratamentos (p<0,05), e entre eles não foram observadas diferenças estatísticas entre si (p>0,05). Na fase pós-TTR, após 3 horas de incubação, a motilidade progressiva (TRIS 21,13±7,5%; Ringer-Lactato 20,78±7,4%; Lactose/TRIS 20,25±5,3%; Leite desnatado 20,12±6,6%) e vigor espermático (TRIS 2,04±0,5; Ringer-Lactato 2,07±0,5; Lactose/TRIS 2,02±0,4; Leite desnatado 2,00±0,5) não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos (p<0,05). Quanto a intergridade do acrossoma, após a descongelação (Sêmen in natura 97,85±0,6%; TRIS 91,65±4,3%; Ringer-Lactato 90,46±4,8%; Lactose/TRIS 89,76±5,4%; Leite desnatado 90,56±5,6%), houve diminuição estatística (p<0,05) e quando se comparou tal parâmetro entre os tratamentos não foi observado diferenças estatísticas significativas entre os tratamento (p>0,05). Diante dos resultados observados é possível concluir que a congelação de sêmen de búfalo com os diluidores TRIS (Trishydroxy- methyl-amino-methan), Ringer-Lactato, Lactose/TRIS, e Leite desnatado mostraram satisfatória função de crioproteção na viabilidade espermática do sêmen nas diferentes etapas da criopreservação. / The objective of this experiment was to test the effectiveness of different extenders, the basis of Ringer Lactate, Skim Milk, TRIS (hydroxymethyl-amino-methil Methan) and Lactose/TRIS, the cryopreservation of buffalo semen. We used three male Murrah buffaloes in full sexual activity. The semen was collected by artificial vagina total of 71 ejaculates. After harvest, each sample was subjected to qualitative and quantitative analyzes of semen. The ejaculates were split and diluted in four extenders. The diluted semen was stored in straws of 0,25 mL and subjected to an equilibration time of up to four hours at 5°C, with subsequent freezing in liquid nitrogen. The identified samples were thawed in a water bath at a temperature of 40°C for 30 seconds and subsequently evaluated for motility, vigor, acrosome damage, and percentage of sperm pathologies. The samples were also tested with heat-resistance, while remaining incubated at 40°C for 30 seconds, 3-5 minutes, 30 minutes, 1 hour, 2 hours and 3 hours, which were evaluated for motility and spermatic . The physico-chemical, after fresh semen analysis, were within the prescribed values for buffaloes and satisfactory for the freezing process. After thawing the semen, observed numerical reduction (p<0,05) in sperm motility, with fresh semen was found 86,67±6,17% decreasing to 70±6,92% in TRIS, 67,4±8,01% in Ringer/lactate, 67,09±9,03% in Lactose/TRIS and 59,7±9,05% in skim milk and to compare between the four treatments only the skimmed milk showed a statistically significant difference (p<0,05). After thawing, spermatic vigor also decreased significantly (p<0,05) in four treatments (3,50±0,53 TRIS, 3,38±0,49 Ringer's lactate, 3,3±0,46 Lactose/TRIS and 3,25±0,44 Skim milk) versus (4±0,39 fresh semen) and when comparing between treatment, only between skimmed milk and TRIS was no statistical difference (p<0,05). As for the larger defects (4,15±1,9% fresh semen; 10,51±4,4% TRIS, 11,94±4,2% Ringer's lactate, 11,88±4,8% Lactose/TRIS; 12,01±5% skim milk), smaller (3,81±1,2% fresh semen and 4,67±1,1% TRIS, 4,98±1,7% Ringer's lactate, 4,93±2,0% Lactose/TRIS, 4,93±2,0% skimmed milk) and total (7,91±2,1% fresh semen; 15,18±4,7% TRIS, 16,92±4,8% Ringer's lactate, 16,82±5,6% Lactose/TRIS, 17,11±5,6% skimmed milk), after thawing showed a significant increase of defects in the four treatments (p<0,05), and among them were not statistically different between groups (p>0,05). In the post-TTR after 3 hours of incubation, progressive motility (21,13±7,5% TRIS; Ringer lactate 20,78±7,4%; Lactose/TRIS 20,25±5,3%; Skimmed milk 20,12±6,6%) and spermatic vigor (TRIS 2,04±0,5, Ringer Lactate 2,07±0,5, Lactose/TRIS 2,02±0,4, 2 skim milk, 2,00±0,5) showed no statistical difference between treatments (p<0,05). As for intergridade acrosome after thawing (semen in natura 97,85,±0,6%; TRIS 91,65±4,3%, Ringer-Lactate 90,46±4,8%; Lactose/TRIS 89,76±5,4%; Skimmed milk 90,56±5,6%), decreased (p<0,05) and when comparing this parameter between treatments was not observed statistically significant differences between the treatment (p>0,05). Given the observed results we conclude that the freezing of buffalo semen extenders with TRIS (Tris-hydroxy-methyl-amino- Methan), Ringer Lactate, Lactose / TRIS and skimmed milk showed satisfactory function in cryoprotection of sperm viability semen in different stages of cryopreservation.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 621878 bytes, checksum: a616ae227883c57266ba5606898260c2 (MD5) Previous issue date: 2006-08-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In Brazil, the dairy goat industry is characterized by a large number of low technology farms, with an average daily milk production per goat of 1 Kg. Semen biotechnologies as artificial insemination (AI) can be an important tool to improve the genetic gain and development of these farms. The use of frozen semen in IA protocols requires a higher level of technology and costs for the farmer when compared with the use of cooled or fresh semen; besides the fertility results from field trials using frozen semen are still doubtful. However the use of fresh semen is restrict to a short period after colleted as the viability of the cells decrease fast at environmental temperatures. Therefore the use of cooled semen in low level technology farms can result in a less-expensive and more efficient tool for multiplying the genetic material in these farms. The aim of this study was to evaluate the fertility in vivo of goat semen cooled and stored at 5&#730; Celsius for 24 hours. The experiment was realized in the Goat Research Center of the Animal Science Department/Federal University of Vicosa, Brazil, from May until July (end of the natural breeding season) of 2005. Animals from the Alpine (n=2) and Saanen (n=2) breed were utilized as semen donors and a total of 71 females (lactating goats and young goats) from both breeds were used in the fertility trial. Semen was collected by artificial vagina method, diluted in Ringer Lactate solution and centrifuged at 420 G for 10 minutes. After, the semen pellet was rediluted in Egg-yolk (20% v/v) Citrate extender to achieve a total of 400x106 spermatozoa/ mL. The semen was stored in 0.25 French straws and then used immediately for AI or cooled (average cooling rate = -0.5 &#730;C/minute) for 1 hour and stored at 5&#730; C for 24 hours before its use for IA. The animals were bred with fresh or cooled semen at 12 hours after the on set of estrus; if the animals continued in estrus for more than 12 hours a second IA was realize at 24 hours after the first insemination. Pregnancy diagnosis was realized by transrectal ultrasonography using a real time B mode scanner with a 5 MHZ linear array transducer. The ultrasonography evaluations were done at day 45 after first IA. The conception rate for young goats (31.2 x 20,0%) and goats (44.4 x 17.6%) did not differ (P>0.05) between fresh or cooled semen, respectively. The total conception rate did not differ (P>0.05) between fresh (38.2%) and cooled (18.9%) semen. The average conception rate of this same herd and period was 28.2%. Historical data from the last four years in the same experimental period and farm showed an average conception rate of 39,9% (109/273). The present study didn't find differences in the conception rates for the semen diluted in Yolk-Citrate with 20% of Egg-Yolk and used to fresh or cold and stored by 24 hours to 5ºC, however, the fertility of the semen cold was below that obtained with controlled breed in the end of the natural reproductive station. Factors climatic, environmental and of handling, besides the quality of the animals, related with the end of the reproductive station, might have contributed to the low fertilities found in the present study. / Em nosso país, a caprinocultura leiteira é praticada em propriedades pouco tecnificadas, com produção média em torno de 1 kg de leite/cabra/dia. A utilização da inseminação artificial como ferramenta para o melhoramento genético é dependente dos resultados obtidos nos testes de fertilidade a campo. A utilização do sêmen congelado, além de esbarrar nos problemas de custos, ainda apresenta resultados contraditórios, sendo sua utilização limitada a poucos rebanhos matrizeiros. Já o sêmen fresco tem a limitação do curto tempo de viabilidade, ficando seu uso restrito a própria propriedade. Neste sentido a utilização do sêmen resfriado pode servir de alternativa barata para a multiplicação daqueles reprodutores de maior potencial genético. Assim, o presente estudo visou testar fertilidade in vivo do sêmen caprino, diluído em um extensor a base de citrato-gema e armazenado a 5ºC por 24 horas. Para tanto, conduziu-se um experimento durante os meses de maio de junho de 2005, no setor de Caprinocultura do DZO/UFV, o qual contou com quatro bodes e 71 cabras e cabritas, das raças Saanen e Alpina. O sêmen foi coletado em vagina artificial, imediatamente centrifugado em meio Ringer Lactato, a 402G por 10 minutos, em seguida o sobrenadante descartado e as células re-suspendidas em meio diluidor a base de citrato-gema, com 20% de gema de ovo, perfazendo um total de 100x106 espermatozóides móveis em um volume de 0,25 mL. Após o envase, metade das doses permanecia na bancada e a outra metade era submetida ao processo de resfriamento, com uma curva de aproximadamente 0,5ºC/minuto, atingindo a temperatura de geladeira 5ºC em 1 hora. De acordo com a ordem de manifestação do estro os animais entravam recebiam duas inseminações intervaladas de 24 horas, sendo a primeira realizada 12 horas após a observação do estro, com sêmen fresco ou resfriado. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 45 dias, com auxilio de um ultra-som equipado com uma probe de 5 MHz de freqüência. Não houve diferenças significativas (P>0,05), quanto a fertilidade das cabritas foi de 31,2% (5/16) e 20,0% (4/20), e nem das cabras 44,4% e 17,6%, inseminadas com sêmen fresco e resfriado, respectivamente. Somando cabras e cabritas a fertilidade foi de 38,2% e 18,9%, respectivamente para o tratamento a fresco e resfriado, não sendo significativa a diferença (P>0,05). A taxa de concepção geral do experimento foi de 28,2%. Na mesma época do ano, a fertilidade do rebanho em um levantamento dos últimos quatro anos foi de 39,9% (109/273), podendo indicar problemas de fertilidade relacionados às fêmeas. O presente estudo não encontrou diferenças na taxa de concepção para o sêmen diluído em Citrato-Gema com 20% de Gema de ovo e utilizado a fresco ou resfriado e armazenado por 24 horas a 5ºC, no entanto, a fertilidade do sêmen resfriado ficou abaixo daquela obtida com a monta controlada no final da estação reprodutiva natural. Fatores climáticos, ambientais e de manejo, além da qualidade zootécnica dos animais, relacionada com o final da estação reprodutiva, podem ter contribuído para as baixas fertilidades encontradas no presente estudo.

It is known that antioxidants when added to extenders can contribute to preserving the integrity of sperm cells. How noni is considered a fruit with antioxidant potential, aimed to evaluate the feasibility of ram semen subjected to dilution in medium containing different amounts of aqueous extract of noni (Morinda citrifolia L). Initially noni cropped and then elaborated the aqueous extract to be added to the medium thinner. The fruit was evaluated for its physical and chemical characteristics as presenting results ph = 4.12; Titratable acidity = 8.78%; Soluble solids = 8.18 ° Brix and Vitamin C = 309.43 mg.100-1 content. The aqueous extract produced was evaluated for quantification of total phenolic compounds, antioxidant activity and ability to inhibit lipid peroxidation, with amounts of total phenols of 47.96 ± 1.95 mg Eq. Gálico.100g acid-1 extract. Concentration of 3.0 μg.mL-1 time 30 minutes had antioxidant activity 89.35 ± 2.32% It was observed that only 1.2 ± 0.15 ug / ml of sample is sufficient to reduce the DPPH by 50%. It also exhibited excellent redox ability to inhibit lipid peroxidation in a concentration of 10 μg.mL-1, similar to the synthetic Trolox positive control (p <0.05) at 72 The Extract concentrations and 120μg.mL-1 was able to inhibit lipid peroxidation in the thinner half in 21.75% and 51.32%. Treatments for ram semen freezing differ in the use of thinner medium containing different concentrations of the extract: T1- control without addition; T2 24 mg / mL; T3-72 / mL; T4 - 120 mg / mL. A total of 16 ejaculates were collected, diluted according to the treatments and frozen. After thawing the semen was subjected to heat resistance test (TTR) and evaluated for the subjective motility, sperm vigor, health test hypoosmotic swelling test plasma membrane, supravital test, and the combination of SYBR Green and fluorochrome propidium iodide (PI ), and the status of sperm capacitation and acrosome reaction by clortetracliclina (CTC). The results found for TTR showed T2 with better motility 22.6 ± 9.7; than the other treatments with the addition of extract, while the T1 and T2 treatments showed better effect than T4; in hiposmotic test T3 was superior to T2 after two hours of incubation; T4 showed better preservation of the plasma membrane and the sperm capacitation treatments differ P <0.05 only for trained with sperm acrosome reacted. Also the kinetic analysis was performed using a computerized system at the time of thawing and the percentages for progressive motility in T1, T2, T3 and T4 were 26.9 ± 9.7; 20.1 ± 12.6; 20.7 ± 10.8 and 15.5 ± 9.2 respectively, for the curvilinear velocity parameters (VCL) and the average speed path (VAP) T1 and T2 shown to be superior to T3 and T4, and amplitude lateral displacement of the head (ALH) T4 showed inferiority to the other tested treatments. No difference was observed for straight-line speed (VSL), straightness (STR) and linearity (LIN). The treatments with the addition of aqueous extract of noni showed higher viability than control. / Sabe-se que as substâncias antioxidantes quando adicionadas aos meios diluidores podem contribuir para a preservação da integridade de células espermáticas. Como o noni é considerado um fruto com potencial antioxidante, objetivou-se avaliar a viabilidade de sêmen ovino submetido a diluição em meio contendo diferentes quantidades de extrato aquoso de noni (Morinda citrifolia L). Inicialmente o noni foi colhido e em seguida elaborou-se o extrato aquoso a ser adicionado ao meio diluidor. O fruto foi avaliado quanto as suas características físico-químicas apresentando como resultados ph=4,12; Acidez titulável = 8,78%; Sólidos solúveis = 8,18°Brix e teor de Vitamina C = 309,43 mg.100-1. O extrato aquoso produzido foi avaliado quanto a quantificação de compostos fenólicos totais, atividade antioxidante e capacidade de inibição da peroxidação lipídica, apresentando quantidades de fenóis totais de 47,96 ± 1,95 mg Eq. Ácido Gálico.100g-1 do extrato. Na concentração de 3,0 μg.mL-1 no tempo de 30 minutos apresentou uma atividade antioxidante de 89,35 ± 2,32 %, sendo observado que apenas 1,2± 0,15 μg/mL da amostra é suficiente para reduzir o radical 2,2-difenil-1- picril-hidrazila (DPPH) em 50%. Também apresentou uma excelente capacidade redox em inibir a lipoperoxidação na concentração de 10 μg.mL-1, sendo semelhante ao controle positivo sintético Trolox (p<0,05) O extrato nas concentrações de 72 e 120μg.mL-1 foi capaz de inibir a lipoperoxidação no meio diluídor em 21,75% e 51,32%. Os tratamentos para congelação de sêmen ovino diferiram quanto a utilização de meio diluidor contendo diferentes concentrações do extrato: T1- controle, sem adição; T2- 24 μg/mL; T3-72 μg/mL; T4 - 120 μg/mL. Um total de 16 ejaculados foram coletados, diluídos de acordo com os tratamentos e congelados. Após a descongelação o sêmen foi submetido ao teste de termorresistência (TTR) e avaliado quanto a motilidade subjetiva, vigor espermático, teste de integridade de membrana plasmática pelo teste hiposmótico, teste supravital, e pela combinação de fluorocromos SYBR Green e iodeto de propídio (IP), e o status de capacitação espermática e reação acrossomal pela clortetracliclina (CTC). O resultado encontrado para o TTR mostrou o T2 com melhor motilidade 22,6 ± 9,7; que os demais tratamentos com adição de extrato, enquanto que os tratamentos T1e T2 apresentaram melhor vigor que o T4; no teste hiposmótico o T3 mostrou-se superior ao T2 após duas horas de incubação; o T4 mostrou melhor preservação da membrana plasmática e quanto a capacitação espermática os tratamentos diferiram P<0,05 apenas para espermatozoides capacitados com acrossomo reagido. Também foi realizada a análise de cinética através de sistema computadorizado no momento da descongelação e os percentuais para motilidade progressiva nos tratamentos T1, T2, T3 e T4 foram 26,9±9,7; 20,1±12,6; 20,7±10,8 e 15,5±9,2 respectivamente, para os parâmetros velocidade curvilinear (VCL) e velocidade do percurso médio (VAP) os tratamentos T1 e T2 mostraram-se superior ao T3 e T4, e para amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) o T4 apresentou inferioridade aos outros tratamentos testados. Não se observou diferença para velocidade em linha reta (VSL), retilinearidade (STR) e linearidade (LIN). Os tratamentos com adição de extrato aquoso de noni apresentaram maior viabilidade que o tratamento controle.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:38:31Z : No. of bitstreams: 1 crespilho_am_me_botfmvz.pdf: 507525 bytes, checksum: a1c92f545e77b50838125fbea8dfddd6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A despeito das inúmeras variáveis que influenciam direta e indiretamente a fertilidade das fêmeas bovinas, a qualidade das amostras seminais exerce um papel importante na determinação das taxas de concepção dos programas de inseminação artificial. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores de criopreservação de sêmen bovino no processamento de amostras seminais apresentando diferentes concentrações espermáticas em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia quando utilizada em programas de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em bovinos (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 14 ejaculados de diferentes touros da raça Nelore. Cada ejaculado foi fracionado em oito alíquotas iguais, submetidas a criopreservação com os diluidores Tris-gema de ovo-frutose (meio TRIS) e MKA nas concentrações de 12, 25, 50 e 100 milhões de espermatozóides totais por mililitro de meio, formando oito grupos experimentais em função das variáveis diluidor e concentração. As amostras foram descongeladas a 46 ºC por 20 segundos, avaliando-se os padrões de motilidade através do método computadorizado (CASA), integridade de membrana plasmática (IMP), resistência ao teste de termorresistência rápido (TTR) e taxa de recuperação e IMP após seleção espermática pela técnica de swim-up. Para o Experimento II foram selecionados sete touros utilizados no Experimento I, obtendo-se um ejaculado de cada animal por eletroejaculação... / Although there are many variables which directly or indirectly influence female bovine fertility, the quality of sperm samples plays a important role in the determination of conception rates in artificial insemination programs. The aim of the present study was to compare the efficiency of two bovine semen extenders for sperm freezing with different spermatic concentrations in the freezability determined by lab tests (Experiment I), and conception rates after fixed time artificial insemination (FTAI; Experiment II). In Experiment I 14 ejaculates of different Nelore bulls were used. Each ejaculate was splitsampled in to eight equal parts and then submitted to cryopreservation with Tris-egg yolk fructose (TRIS) and MKA extenders, at concentrations of 12, 25, 50 and 100 millions spermatozoa per milliliter forming eight experimental groups. The samples were thawed at 46 ºC for 20 seconds, and the following parameters were evaluated: sperm motility and movement (by computer-assisted semen analysis - CASA), sperm membrane integrity (SMI), resistance to the fast thermoresistance test (TT), recovery rate and sperm membrane integrity after sperm selection through swim-up technique. Seven of 14 bulls used in Experiment I were selected for Experiment II, and semen was collected from each of the animals by electroejaculation. The seven ejaculates obtained were mixed (semen pool) and cryopreserved, thus forming eight experimental groups according to the freezing extenders and sperm concentrations/straws: TRIS 12, 25, 50 and 100, and MKA 12, 25, 50 and 100...(Complete abstract, click electronic address below)