LIMA, Daniel Teixeira. Efeito crioprotetor de lactose e glicose em células fúngicas imobilizadas em alginato de sódio como método de preservação de culturas. 2011. 100 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-21T12:56:00Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_dtlima.pdf: 1163164 bytes, checksum: 37b63fb6e26a509c1c3bdf3053ff0dc5 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-06-24T12:44:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_dtlima.pdf: 1163164 bytes, checksum: 37b63fb6e26a509c1c3bdf3053ff0dc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-24T12:44:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_dtlima.pdf: 1163164 bytes, checksum: 37b63fb6e26a509c1c3bdf3053ff0dc5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Cryopreservation is the method of choice in many banks of microorganisms because it leads to a situation of metabolic dormancy and consequently cultures are stable for long periods. By reducing the temperature may however be formed of ice crystals which tend to cause cell damage to cell damage in turn can be avoided by vitrification process which takes place by combining a solution with the quick freezing the literature reports the use of carbohydrates vitrificadores cryoprotectants agents and also advises that the technique of immobilization of cells in sodium alginate allows the fractionation of culture and promotes the preservation of microorganisms The objective of this study is to assess the viability of the fungi of the genus Malassezia spp and the Zygomycetes group of assets in sodium alginate and lactose using glucose as cryoprotectants Twelve strains of species of Malassezia spp (9 M furfur 1 M 2 M globosa simpodialis) and twelve strains of zygomycetes (seven Mucor Rhizopus sp is 5) belonging to the mycology collection of the Specialized Center for Medical Mycology Federal University of Ceará The genus Malassezia comprises yeasts lipodependent associated with various dermatologic diseases currently comprise 13 Zygomycetes species, in turn, are ubiquitous and saprophytic fungi whose hyphae because they have high protein content and reduced size are more vulnerable to mechanical damage this way are groups of fungi in stock so hard to preserve a methodology to maintain the viability of Malassezia spp and Zygomycetes could also be used effectively for the storage of other fungi fungal structures were removed and transferred to two stock solutions, formed by 3% broth Sabouraud 15% sodium alginate and different concentrations of glucose and 9% lactose and 23% were then added plastic spheres, measuring 07cm in diameter and 0.5 cm center hole length After ionic gelation with calcium chloride Each strain was stored at -20 ° C and -80 ° C cryogenic distributed in five tubes containing 15 mL each of five levels being evaluated in five periods after nine months it was found that there was no recovery of any strain of Malassezia spp Regarding Zygomycetes species showed that after nine months of inventory four strains were viable at -80 ° C using glucose 9%, six strains were preserved at -80 ° C, using 23% glucose last six seven specimens were recovered at -80 º C using a 9% lactose and 23% respectively. Thus, the use of cryoprotectants such as carbohydrates in conjunction with the technique of immobilization of cells in sodium alginate is an alternative to maintaining some fungal species / A criopreservação é a metodologia de escolha em muitos bancos de microrganismos pois conduz a uma situação de dormência metabólica e em conseqüência as culturas mantêm-se estáveis por longos períodos. Ao reduzir a temperatura pode todavia ocorrer a formação de cristais de gelo que tendem a promover lesão celular A lesão celular por sua vez pode ser evitada pelo processo de vitrificação que ocorre, combinando uma solução concentrada com o congelamento rápido A literatura relata o uso de carboidratos como agentes vitrificadores e crioprotetores Também informa que a técnica de imobilização de células em alginato de sódio permite o fracionamento da cultura e favorece a preservação de microrganismos O objetivo deste trabalho consiste em avaliar a viabilidade dos fungos dos gêneros Malassezia spp e do grupo dos Zigomicetos imobilizados em alginato de sódio utilizando glicose e lactose como crioprotetores Doze cepas de espécies de Malassezia spp (9 M furfur 2 M globosa 1 M simpodialis) e doze cepas de Zigomicetos (7 Mucor s e 5 Rhizopus sp) pertencentes à micoteca do Centro Especializado em Micologia Médica da Universidade Federal do Ceará O gênero Malassezia abrange leveduras lipodependentes associadas a várias enfermidades dermatológicas compreendem na atualidade 13 espécies Zigomicetos, por sua vez são fungos saprófitas e ubíquos cujas hifas por apresentarem elevado tamanho e reduzido conteúdo protéico estão mais vulneráveis a danos mecânicos Dessa forma constituem grupos fúngicos de preservação difícil em estoque portanto uma metodologia que mantenham a viabilidade de Malassezia spp e Zigomicetos também poderia ser empregada com eficiência para a estocagem de outros fungos As estruturas fúngicas foram removidas e transferidas para duas soluções de estoque, formadas por 3% de caldo Sabouraud 15% de alginato de sódio e diferenciadas nas concentrações de glicose e lactose de 9% ou 23% Em seguida, foram adicionadas esferas plásticas, medindo 07cm de diâmetro com orifício central e 0,5cm de comprimento Após a gelificação iônica com cloreto de cálcio, cada cepa foi estocada à temperatura de -20 ºC e -80 ºC distribuídas em cinco tubos criogênicos de 15mL contendo cinco esferas cada uma sendo avaliados em cinco períodos Após nove meses foi verificado que não houve recuperação de nenhuma cepa de Malassezia spp Com relação às espécies de Zigomicetos observou-se que após nove meses de estoque quatro cepas mostraram viáveis a -80 ºC empregando glicose a 9%, seis cepas foram preservadas a -80 ºC, utilizando glicose a 23% finalmente seis e sete exemplares foram recuperados a -80 ºC utilizando lactose a 9% e 23% respectivamente. Dessa forma, o uso de carboidratos como crioprotetores em conjunto com a técnica de imobilização de células em alginato de sódio constitui alternativa à manutenção de algumas espécies fúngicas

LEITE, João Jaime Giffoni. Caracterização fenotípica, perfil de sensibilidade antifúngica e estocagem de malassezia SPP. 2008. 139 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-05T11:57:49Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_jjgleite.pdf: 5982242 bytes, checksum: ab8d157c357f414e56ef44e57890da28 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:25:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_jjgleite.pdf: 5982242 bytes, checksum: ab8d157c357f414e56ef44e57890da28 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:25:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_jjgleite.pdf: 5982242 bytes, checksum: ab8d157c357f414e56ef44e57890da28 (MD5) Previous issue date: 2008 / The genus Malassezia enclose lipophylic and lipid-dependent yeast that after many changes in its taxonomic classification, comprises in the atuality 13 species, including M. pachydermatis, M. furfur, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta, M. slooffiae, M. dermatis, M. japonica, M. yamatoensis, M. nana, M. equine, and M. caprae. These yeasts are associated to several diseases including, such as pityriasis versicolor, or dermatoses, seborrheic dermatitis and atopic dermatitis, among others. The general aim of this study was to contribute to better knowledgement about the phenotypical identification, storage in fungal collection and in vitro antifungal susceptibility of Malassezia spp. The phenotiping was based on macro and micromorphologics characteristics, as well as biochemistry and nutritional analisys. Twenteen strains suffers storage at -80ºC in vegetables oils. The microdilution technique was accomplished in RPMI 1640 broth, supplemented with ox bile, Tween 20 and glycerol, being complemented with subculture on Dixon agar, for determination of the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (CFM). The drugs tested were ketoconazole (KET), itraconazole (ITR), fluconazole (FLC), amphotericin B (AMB) and caspofungine (CAS). With the conventional phenotypical analysis of the strains (n=38), could suggest the presence of the M. furfur/ M. dermatis (n=17), M. sympodialis (n=8), M. slooffiae (n=5) and M. pachydermatis (n=8). The stored accomplished in vegetable oils at -80ºC showed meaningful rate of recorver, but physiologic characteristics was modified, such as _-glicosidase activity and Chremophor EL assimilation. Most of the strains (84,21%) was sensitive for KET and ITR, obtaining values of MIC 0.03μg/mL. For FLC the MIC range was 4 to 64μg/mL, against VOR the strains of M. pachydermatis obtained MIC range <0,03 a 2μg/mL, therefore the lipid-dependents strains of Malassezia spp. obtained dispersive results from <0.03 to >16μg/mL. Against ANB, the MIC range was 1 to >16μg/mL. It was not possible determinate the MIC and MFC values for caspofungine. The extracts from avocado seeds were active against strains of M. pachydermatis. / O gênero Malassezia abrange leveduras lipofílicas e lipodependentes que, após várias mudanças em sua classificação taxonômica, compreende na atualidade 13 espécies, incluindo M. pachydermatis, M. furfur, M. globosa, M. obtusa, M. sympodialis, M. slooffiae, M. restricta, M. dermatis, M. japonica, M. yamatoensis, M. nana, M. caprae e M. eqüina. Estas leveduras estão associadas a várias enfermidades que incluem infecções, como a pitiríase versicolor ou dermatoses, dermatite seborréica e dermatite atópica, entre outras. O objetivo geral deste trabalho foi contribuir para melhor entendimento sobre a identificação fenotípica, manutenção em micoteca e sensibilidade a antifúngicos in vitro de Malassezia spp.. A fenotipagem baseou-se nas características macro e micromorfológicas, bem como análises em bioquímicas e nutricionais. Doze cepas de diferentes espécies de Malassezia spp. sofreram estocagem a -80ºC sob óleos vegetais. A técnica de microdiluição foi realizada em caldo RPMI 1640, suplementado com bile, glicerol e Tween 20, sendo complementada com subcultivo em ágar Dixon, para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e da concentração fungicida mínima (CFM). As drogas testadas foram Cetoconazol (CET), Itraconazol (ITR), Fluconazol (FLU), Voriconazol (VOR), Anfotericina B (ANB) e Caspofungina (CAS). Com a análise fenotípica convencional das cepas (n=38), pode-se sugerir a presença de M. furfur/ M. dermatis (n=17), M. sympodialis (n=8), M. slooffiae (n=5) e M. pachydermatis (n=8). O estoque realizado em óleos vegetais a -80ºC demonstrou significativas taxas de recuperação, no entanto características fisiológicas foram alteradas como _-glicosidase e assimilação de Chremophor EL. A maioria das cepas estudadas (84,21%), M. pahydermatis e cepas lipodependentes, foram sensíveis ao CET e ITR, obtendo valores de CIM 0,03μg/mL. Para o FLU, os valores de CIM variaram de 4 a 64μg/mL e frente ao VOR as cepas de M. pachydermatis obtiveram CIMs que variaram de <0,03 a 2μg/mL, enquanto as cepas lipodependentes de Malassezia spp. obtiveram resultados mais dispersos que variaram de <0,03 a >16μg/mL. Perante ANB, o intervalo de CIM encontrado foi de 1 a >16μg/mL. Não foi possível determinar os valores de CIM e CFM frente à caspofungina. Os extratos oriundos das sementes do abacate foram ativos contra as cepas de M. pachydermatis.

O primeiro experimento, teve o objetivo de comparar os efeitos da indução hormonal na qualidade espermática de Brycon insignis. Foram utilizados 12 reprodutores que tiveram uma alíquota do sêmen coletado e avaliado antes da indução hormonal (Ctrl) e em seguida foram divididos em tratamentos de acordo com o hormônio e dosagem recebida, Extrato de Hipófise de Carpa – EHC (T1 – 2,5 mg/kg-1 de peso vivo), análogos de GnRH sendo aplicado em duas dosagens diferentes (T2 – 0,7 mg/kg-1 de peso vivo e T3 – 1,4 mg/kg-1 de peso vivo). Dentre as análises utilizadas para comparar o efeito da indução e dos hormônios utilizados foram; taxa de motilidade – Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) e T3 (98%), onde foi observado um ligeiro aumento e concentração espermática – Ctrl (11,52 x109), T1 (4,37 x109), T2 (4,34 x109) e T3 (4,01 x109), que pode ser observado uma redução na concentração após a indução hormonal. No entanto a utilização de indutores hormonais não altera negativamente as características seminais de piabanha. No segundo experimento, o objetivo foi de avaliar a qualidade do sêmen diluído com três diluidores e resfriado a temperatura de 6 °C durante um período de 120 horas. Foram utilizados 32 machos, o liquido seminal era dividido em quatro tratamentos; sem diluição, diluído com BTS®, HBSS e ACP®, na proporção de 1:4 (sêmen:diluidor), as avaliações eram realizadas para; motilidade espermática, tempo de motilidade, morfologia espermática e vigor, no momento da diluição (tempo 0) e nos tempos seguintes de 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a diluição. A taxa de fertilização e eclosão foi coletada apenas no momento da diluição do sêmen. Os resultados apontam que a diluição é eficaz para conservação do sêmen de C. macropomum, porém ainda por um curto período de tempo. A recomendação é que esse procedimento seja realiado com o diluidor BTS® por até 72 horas. No terceiro experimento, o objetivo foi classificar por meio de análise de clusters os reprodutores C. macropomum após a criopreservação seminal como sendo de baixo ou alto potencial de congelabilidade e correlacionar com as características do sêmen fresco e fenotípicas. Foram utilizados 25 machos, o sêmen de cada animal foi submetido ao mesmo protoloco de criopreservação que era composto de BTS®+DMF (90:10), e o sêmen diluído na proposção de 1:4. Os resultados demonstram que mesmo sobre as mesmas condições o liquido seminal apresenta diferentes variações, e através da análise de clusters foi possível diferenciar a formação de três grupos de reprodutores (G1, G2, G3). O G1 foi classificado como sendo de alta qualidade espermática após a criopreservação, porém as correlações demonstram que os animais com menor tamanho de cabeça apresentam FR melhores após a criopreservação, e possivelmente a MT pode ser utilizada como pré indicador de congelabilidade para reprodutores C. macropomum. / The first experiment aimed to compare the effects of hormonal induction on the spermatic quality of Brycon insignis. 12 broodstocks that had an aliquot of the semen collected and evaluated before to hormonal induction (Ctrl) were used and then divided into treatments according to the hormone and dosage received, Carpal Hypophysis Extract - EHC (T1 - 2.5 mg/Kg-1 live weight), GnRH analogs being administered in two different dosages (T2 - 0.7 mg/kg-1 live weight and T3 - 1.4 mg/kg-1 live weight). Among the analyzes used to compare the effect of induction and hormones used were: motility rate, that showed a slight increase, Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) and T3 (98%) and sperm concentraction wich may be observed a reduction, Ctrl (11.52 x109), T1 (4.37 x109), T2 (4.34 x109) and T3 (4.01 x109). However, the use of hormone inducers does not negatively affect the seminal characteristics of piabanha. In the second experiment, the objective was to evaluate the quality of semen of the Colossoma macropomum diluted with three extenders and cooled to 6 °C for a period of 120 hours. 32 males were used, the seminal fluid was divided into four treatments; Without dilution, diluted with BTSTM, HBSS and ACPTM, at the ratio of 1:4 (semen:extender), evaluations were performed for; Sperm motility, sperm motility and vigor, at the time of dilution (time 0) and at the following times of 24, 48, 72, 96 and 120 hours after dilution. The rate of fertilization and hatching was collected only at the time of the semen dilution. The results indicate that the dilution is effective for the conservation of semen of C. macropomum, but still for a short period of time. The recommendation is that this procedure be performed with the BTSTM thinner for up to 72 hours. In the third experiment, the objective was to classify by means of clusters analysis the C. macropomum broodstock after seminal cryopreservation as being of low or high freeze potential and to correlate with the characteristics phenotypic and fresh semen. 25 males were used, the semen from each animal was submitted to the same cryopreservation protocol that was composed of BTSTM+DMF (90:10), and the semen diluted in the 1:4 ratio. The results show that even on the same conditions, the seminal fluid presents different variations, and through the analysis of clusters it was possible to differentiate the formation of three broodstock groups (G1, G2, G3). G1 was classified as being of high spermatic quality after cryopreservation, but correlations show that animals with smaller head sizes have better fertilization rate after cryopreservation, and possibly motility time can be used as a pre-freeze indicator for C. macropomum.

CAVALCANTE, Marcelo Borges. Criopreservação de sêmen humano : comparação entre métodos de congelação e tipos de envase. 2004. 101 f. Dissertação (Mestrado em Tocoginecologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-24T12:10:10Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_mbcavalcante.pdf: 637772 bytes, checksum: ace79c400c029e261085272b9318a825 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-24T12:11:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_mbcavalcante.pdf: 637772 bytes, checksum: ace79c400c029e261085272b9318a825 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-24T12:11:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_mbcavalcante.pdf: 637772 bytes, checksum: ace79c400c029e261085272b9318a825 (MD5) Previous issue date: 2004 / This research has as objective determines the best freezing method and storage of human semen, when compared the fast method with the slow method and the storage in 0,25ml straws with cryotubes of 2ml, using as variables the morphology and motility of the spermatozoa before and after the cryopreservation. It is an experimental study, laboratorial technique validation. It was developed in the Assisted Reproduction Center of Ceará. Eighteen semen samples from eighteen men were analyzed. The samples were submitted to the analysis of the morphology and motility previous the cryopreservation. It was still determined a spermatozoa motility curve in the first three hours. TEST-YOLK was used as cryoprotective media. After having added the TEST-YOLK media, the semen was divided in same parts and storage in cryotubes and straws. Half of the cryotubes and of the straws was cryopreserved by the fast method (RT and RP, respectively) and the other half by the slow method (LT and LP, respectively). The samples were thawed and analyzed the morphologies, as well as the motilities soon after the thawed and every hour for three hours. Statistical analysis was done by the SPSS program - Windows version 11.0.0. Motility of spermatozoa decrease after the cryopreservation, initial motility was 58,1% and motilities in the different treatments were 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) and 19,2% (RP). There was a significant decrease of the normal morphology after the cryopreservation, in relation to the initial morphology, but difference was not observed among the methods (RP=12,8%, RT=12,6%, LP=12,6% e LT=12,4%). The motility of LT method was closer than that obtained in the fresh semen. The method LT showed the best recovery of motile cells after freezing and thawing. There was not difference among the methods when appraised the morphology. Key-Word: Cryopreservation; Semen preservation; Spermatozoa; Reproduction. / O presente trabalho tem como objetivo determinar o melhor método de congelação e envase de sêmen humano, quando comparado o método rápido com o lento e o envase em palhetas de 0,25ml com criotubos de 2ml, utilizando como variáveis a morfologia e motilidade dos espermatozóides antes e após a criopreservação. Trata-se de um estudo experimental, de validação de técnica laboratorial. Foi desenvolvido no Centro de Reprodução Assistida do Ceará. Foram analisadas dezoito amostras de sêmen de dezoito voluntários. As amostras foram submetidas à análise da morfologia e motilidade espermática prévia à criopreservação. Foi determinada ainda uma curva de motilidade espermática nas primeiras três horas. O meio TEST-YOLK foi utilizado como crioprotetor. Depois de adicionado o crioprotetor, o sêmen foi dividido em partes iguais e envasado em criotubos e palhetas. Metade dos criotubos e das palhetas foi submetida a criopreservação pelo método rápido (RT e RP, respectivamente) e a outra metade pelo método lento (LT e LP, respectivamente). Em seguida, as amostras foram descongeladas e determinadas as morfologias, bem como as motilidades logo após a descongelação e a cada hora durante três horas. Análise estatística foi realizada pelo programa de SPSS for Windows versão 11.0.0. Houve uma queda, estatisticamente significante, da motilidade após a criopreservação, motilidade inicial de 58,1% e motilidades nos diferentes tratamentos de 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) e 19,2% (RP). Também houve uma diminuição significante da morfologia normal após a criopreservação, em relação à morfologia inicial (14,2%), mas não foi observada diferença entre os métodos (12,8%, 12,6%, 12,6% e 12,4%; RP, RT, LP e LT, respectivamente). O método LT foi o que obteve uma curva de motilidade espermática mais próxima da observada no sêmen in natura. Conclui-se que o método LT foi o que menos afetou a motilidade espermática e que, apesar de ter sido observada uma piora significativa da morfologia espermática após a criopreservação, não houve diferença entre os métodos. Palavras-chaves: Criopreservação; Preservação do Sêmen; Espermatozóide; Reprodução

SILVA, João Marcos de Meneses e. Avaliação de ovários criopreservados por vitrificação ou congelação lenta após intervalo precoce e tardio de castração em ratas. 2014. 103 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T14:17:20Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_jmmsilva.pdf: 2293557 bytes, checksum: 0bcd3ba252eff52daa7effd53b94dbf2 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T14:18:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_jmmsilva.pdf: 2293557 bytes, checksum: 0bcd3ba252eff52daa7effd53b94dbf2 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-20T14:18:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_jmmsilva.pdf: 2293557 bytes, checksum: 0bcd3ba252eff52daa7effd53b94dbf2 (MD5) Previous issue date: 2014 / To compare two rat ovary cryopreservation techniques (vitrification vs. slow freezing) and two postmenopausal stages (early vs. late) with regard to graft take. Thirty-three Wistar rats were submitted to bilateral oophorectomy. One ovary was submitted to histological analysis while the other was cryopreserved by slow freezing or vitrification. The cryopreserved ovary was thawed and reimplanted in the greater omentum one week (early menopause) or one month (late menopause) after oophorectomy. One month after ovary reimplantation, the graft take was evaluated macroscopically and histologically. Six of the animals were used as controls and seven died. The histological findings of 20 animals included atretic follicles (n=4), primordial follicles (n=2), and corpus luteum with primordial follicles (n=3). No ovarian tissue was found in 11 animals. Vitrification resulted in a higher graft take rate than slow freezing (50% vs. 38.5%), but the difference was not statistically significant. However, the graft take rate was 9.3 times higher in the early than in the late postmenopausal stage (61.5% vs. 14.3%) (p=0.043). Ovary reimplantation is more likely to be successful in the late postmenopausal stage. / Comparar duas técnicas de criopreservação de ovário de ratas (vitrificação versus congelação lenta) e dois estágios pós-castração (intervalo precoce versus tardio) em relação à pega do enxerto. Trinta e três ratas Wistar foram submetidas à ooforectomia bilateral. Um ovário foi submetido à análise histológica, enquanto o outro foi criopreservado por congelação lenta ou vitrificação. O ovário criopreservado foi descongelado e reimplantado no omento maior uma semana (intervalo precoce) ou um mês (intervalo tardio) após ooforectomia. Um mês após o reimplante de ovário, a pega do enxerto foi avaliada macroscopicamente e histologicamente. Seis dos animais foram utilizados como controle e sete morreram. Os achados histológicos de 20 animais incluídos folículos atrésicos (n = 4), folículos primordiais (n = 2) e corpo lúteo com folículos primordiais (n = 3). No tecido ovariano foi encontrado em 11 animais. A vitrificação resultou em um enxerto com maior taxa de pega do que a congelação lento (50% versus 38,5%), mas a diferença não foi estatisticamente significante. No entanto, as pegas dos enxertos foram 9,3 vezes maiores na precoce do que na pós-ooforectomia tardia (61,5% versus 14,3%) (p = 0,043). O tecido ovariano apresenta melhor taxa de pega quando reimplantado na fase tardia da pós-ooforectomia.

O primeiro experimento, teve o objetivo de comparar os efeitos da indução hormonal na qualidade espermática de Brycon insignis. Foram utilizados 12 reprodutores que tiveram uma alíquota do sêmen coletado e avaliado antes da indução hormonal (Ctrl) e em seguida foram divididos em tratamentos de acordo com o hormônio e dosagem recebida, Extrato de Hipófise de Carpa – EHC (T1 – 2,5 mg/kg-1 de peso vivo), análogos de GnRH sendo aplicado em duas dosagens diferentes (T2 – 0,7 mg/kg-1 de peso vivo e T3 – 1,4 mg/kg-1 de peso vivo). Dentre as análises utilizadas para comparar o efeito da indução e dos hormônios utilizados foram; taxa de motilidade – Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) e T3 (98%), onde foi observado um ligeiro aumento e concentração espermática – Ctrl (11,52 x109), T1 (4,37 x109), T2 (4,34 x109) e T3 (4,01 x109), que pode ser observado uma redução na concentração após a indução hormonal. No entanto a utilização de indutores hormonais não altera negativamente as características seminais de piabanha. No segundo experimento, o objetivo foi de avaliar a qualidade do sêmen diluído com três diluidores e resfriado a temperatura de 6 °C durante um período de 120 horas. Foram utilizados 32 machos, o liquido seminal era dividido em quatro tratamentos; sem diluição, diluído com BTS®, HBSS e ACP®, na proporção de 1:4 (sêmen:diluidor), as avaliações eram realizadas para; motilidade espermática, tempo de motilidade, morfologia espermática e vigor, no momento da diluição (tempo 0) e nos tempos seguintes de 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a diluição. A taxa de fertilização e eclosão foi coletada apenas no momento da diluição do sêmen. Os resultados apontam que a diluição é eficaz para conservação do sêmen de C. macropomum, porém ainda por um curto período de tempo. A recomendação é que esse procedimento seja realiado com o diluidor BTS® por até 72 horas. No terceiro experimento, o objetivo foi classificar por meio de análise de clusters os reprodutores C. macropomum após a criopreservação seminal como sendo de baixo ou alto potencial de congelabilidade e correlacionar com as características do sêmen fresco e fenotípicas. Foram utilizados 25 machos, o sêmen de cada animal foi submetido ao mesmo protoloco de criopreservação que era composto de BTS®+DMF (90:10), e o sêmen diluído na proposção de 1:4. Os resultados demonstram que mesmo sobre as mesmas condições o liquido seminal apresenta diferentes variações, e através da análise de clusters foi possível diferenciar a formação de três grupos de reprodutores (G1, G2, G3). O G1 foi classificado como sendo de alta qualidade espermática após a criopreservação, porém as correlações demonstram que os animais com menor tamanho de cabeça apresentam FR melhores após a criopreservação, e possivelmente a MT pode ser utilizada como pré indicador de congelabilidade para reprodutores C. macropomum. / The first experiment aimed to compare the effects of hormonal induction on the spermatic quality of Brycon insignis. 12 broodstocks that had an aliquot of the semen collected and evaluated before to hormonal induction (Ctrl) were used and then divided into treatments according to the hormone and dosage received, Carpal Hypophysis Extract - EHC (T1 - 2.5 mg/Kg-1 live weight), GnRH analogs being administered in two different dosages (T2 - 0.7 mg/kg-1 live weight and T3 - 1.4 mg/kg-1 live weight). Among the analyzes used to compare the effect of induction and hormones used were: motility rate, that showed a slight increase, Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) and T3 (98%) and sperm concentraction wich may be observed a reduction, Ctrl (11.52 x109), T1 (4.37 x109), T2 (4.34 x109) and T3 (4.01 x109). However, the use of hormone inducers does not negatively affect the seminal characteristics of piabanha. In the second experiment, the objective was to evaluate the quality of semen of the Colossoma macropomum diluted with three extenders and cooled to 6 °C for a period of 120 hours. 32 males were used, the seminal fluid was divided into four treatments; Without dilution, diluted with BTSTM, HBSS and ACPTM, at the ratio of 1:4 (semen:extender), evaluations were performed for; Sperm motility, sperm motility and vigor, at the time of dilution (time 0) and at the following times of 24, 48, 72, 96 and 120 hours after dilution. The rate of fertilization and hatching was collected only at the time of the semen dilution. The results indicate that the dilution is effective for the conservation of semen of C. macropomum, but still for a short period of time. The recommendation is that this procedure be performed with the BTSTM thinner for up to 72 hours. In the third experiment, the objective was to classify by means of clusters analysis the C. macropomum broodstock after seminal cryopreservation as being of low or high freeze potential and to correlate with the characteristics phenotypic and fresh semen. 25 males were used, the semen from each animal was submitted to the same cryopreservation protocol that was composed of BTSTM+DMF (90:10), and the semen diluted in the 1:4 ratio. The results show that even on the same conditions, the seminal fluid presents different variations, and through the analysis of clusters it was possible to differentiate the formation of three broodstock groups (G1, G2, G3). G1 was classified as being of high spermatic quality after cryopreservation, but correlations show that animals with smaller head sizes have better fertilization rate after cryopreservation, and possibly motility time can be used as a pre-freeze indicator for C. macropomum.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T20:38:44Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_asl_me_botfmvz.pdf: 309351 bytes, checksum: 0a3f78bcf756083f2e3741923096ea7b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The present work aimed to investigated several kinds of amides to freeze equine semen. Two ejaculates from 20 stallions of different breeds were used. All ejaculates with initial motility greater than 60 % were split and frozen in 0.5 ml French straws in a milk base extender (INRA 82) containing the different studied cryoprotectants. The post-thaw percentage of motility and other motility parameters wer evaluated using CASA .To evaluate cell viability fluorescent probes were used. Stains used were Carboxyfluorescein and propidium iodine (PI). The first experiment was designed to investigated the protective effect of 3 amides ; Dymethyl acetamide at 3 concentrations - 1, 3 and 5 % v/v; dymethyl formamide at 5% and methyl formamide at 5%. Differences on motion parameters between cryoprotectant treatments were determined by analysis of variance using SAS system. Utilization of amides significantly improved most of parameters evaluated when compared with Glycerol. Progressive motility evaluated by optical microscopy was higher (p< 0,0001) for semen that was frozen with MF 5% and DF5%. The progressive motility evaluated by CASA was higher for the MF 5 % and DA 3% groups. The electron microscopy evaluation showed that DA 5% and MF 5 % were superior in the ability to preserved the acrossomal integrity. The acrossomal status evaluated by fluorescence showed that the preservation was higher on the groups DA 5%, MF 5 % and DF5% (p<0.0001). On the second experiment the cryoprotective effect of two associations of glycerol (Gly) and dimethylformamide (DF) were tested ( Gly 3.5% + DF 1.5 % and DF 3.5% + Gly 1.5%)... (Complete abstract, click electronic address below).

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Abstract: The present work aimed to investigated several kinds of amides to freeze equine semen. Two ejaculates from 20 stallions of different breeds were used. All ejaculates with initial motility greater than 60 % were split and frozen in 0.5 ml French straws in a milk base extender (INRA 82) containing the different studied cryoprotectants. The post-thaw percentage of motility and other motility parameters wer evaluated using CASA .To evaluate cell viability fluorescent probes were used. Stains used were Carboxyfluorescein and propidium iodine (PI). The first experiment was designed to investigated the protective effect of 3 amides ; Dymethyl acetamide at 3 concentrations - 1, 3 and 5 % v/v; dymethyl formamide at 5% and methyl formamide at 5%. Differences on motion parameters between cryoprotectant treatments were determined by analysis of variance using SAS system. Utilization of amides significantly improved most of parameters evaluated when compared with Glycerol. Progressive motility evaluated by optical microscopy was higher (p< 0,0001) for semen that was frozen with MF 5% and DF5%. The progressive motility evaluated by CASA was higher for the MF 5 % and DA 3% groups. The electron microscopy evaluation showed that DA 5% and MF 5 % were superior in the ability to preserved the acrossomal integrity. The acrossomal status evaluated by fluorescence showed that the preservation was higher on the groups DA 5%, MF 5 % and DF5% (p<0.0001). On the second experiment the cryoprotective effect of two associations of glycerol (Gly) and dimethylformamide (DF) were tested ( Gly 3.5% + DF 1.5 % and DF 3.5% + Gly 1.5%)... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

O primeiro experimento, teve o objetivo de comparar os efeitos da indução hormonal na qualidade espermática de Brycon insignis. Foram utilizados 12 reprodutores que tiveram uma alíquota do sêmen coletado e avaliado antes da indução hormonal (Ctrl) e em seguida foram divididos em tratamentos de acordo com o hormônio e dosagem recebida, Extrato de Hipófise de Carpa – EHC (T1 – 2,5 mg/kg-1 de peso vivo), análogos de GnRH sendo aplicado em duas dosagens diferentes (T2 – 0,7 mg/kg-1 de peso vivo e T3 – 1,4 mg/kg-1 de peso vivo). Dentre as análises utilizadas para comparar o efeito da indução e dos hormônios utilizados foram; taxa de motilidade – Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) e T3 (98%), onde foi observado um ligeiro aumento e concentração espermática – Ctrl (11,52 x109), T1 (4,37 x109), T2 (4,34 x109) e T3 (4,01 x109), que pode ser observado uma redução na concentração após a indução hormonal. No entanto a utilização de indutores hormonais não altera negativamente as características seminais de piabanha. No segundo experimento, o objetivo foi de avaliar a qualidade do sêmen diluído com três diluidores e resfriado a temperatura de 6 °C durante um período de 120 horas. Foram utilizados 32 machos, o liquido seminal era dividido em quatro tratamentos; sem diluição, diluído com BTS®, HBSS e ACP®, na proporção de 1:4 (sêmen:diluidor), as avaliações eram realizadas para; motilidade espermática, tempo de motilidade, morfologia espermática e vigor, no momento da diluição (tempo 0) e nos tempos seguintes de 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a diluição. A taxa de fertilização e eclosão foi coletada apenas no momento da diluição do sêmen. Os resultados apontam que a diluição é eficaz para conservação do sêmen de C. macropomum, porém ainda por um curto período de tempo. A recomendação é que esse procedimento seja realiado com o diluidor BTS® por até 72 horas. No terceiro experimento, o objetivo foi classificar por meio de análise de clusters os reprodutores C. macropomum após a criopreservação seminal como sendo de baixo ou alto potencial de congelabilidade e correlacionar com as características do sêmen fresco e fenotípicas. Foram utilizados 25 machos, o sêmen de cada animal foi submetido ao mesmo protoloco de criopreservação que era composto de BTS®+DMF (90:10), e o sêmen diluído na proposção de 1:4. Os resultados demonstram que mesmo sobre as mesmas condições o liquido seminal apresenta diferentes variações, e através da análise de clusters foi possível diferenciar a formação de três grupos de reprodutores (G1, G2, G3). O G1 foi classificado como sendo de alta qualidade espermática após a criopreservação, porém as correlações demonstram que os animais com menor tamanho de cabeça apresentam FR melhores após a criopreservação, e possivelmente a MT pode ser utilizada como pré indicador de congelabilidade para reprodutores C. macropomum. / The first experiment aimed to compare the effects of hormonal induction on the spermatic quality of Brycon insignis. 12 broodstocks that had an aliquot of the semen collected and evaluated before to hormonal induction (Ctrl) were used and then divided into treatments according to the hormone and dosage received, Carpal Hypophysis Extract - EHC (T1 - 2.5 mg/Kg-1 live weight), GnRH analogs being administered in two different dosages (T2 - 0.7 mg/kg-1 live weight and T3 - 1.4 mg/kg-1 live weight). Among the analyzes used to compare the effect of induction and hormones used were: motility rate, that showed a slight increase, Ctrl (95%), T1 (100%), T2 (100%) and T3 (98%) and sperm concentraction wich may be observed a reduction, Ctrl (11.52 x109), T1 (4.37 x109), T2 (4.34 x109) and T3 (4.01 x109). However, the use of hormone inducers does not negatively affect the seminal characteristics of piabanha. In the second experiment, the objective was to evaluate the quality of semen of the Colossoma macropomum diluted with three extenders and cooled to 6 °C for a period of 120 hours. 32 males were used, the seminal fluid was divided into four treatments; Without dilution, diluted with BTSTM, HBSS and ACPTM, at the ratio of 1:4 (semen:extender), evaluations were performed for; Sperm motility, sperm motility and vigor, at the time of dilution (time 0) and at the following times of 24, 48, 72, 96 and 120 hours after dilution. The rate of fertilization and hatching was collected only at the time of the semen dilution. The results indicate that the dilution is effective for the conservation of semen of C. macropomum, but still for a short period of time. The recommendation is that this procedure be performed with the BTSTM thinner for up to 72 hours. In the third experiment, the objective was to classify by means of clusters analysis the C. macropomum broodstock after seminal cryopreservation as being of low or high freeze potential and to correlate with the characteristics phenotypic and fresh semen. 25 males were used, the semen from each animal was submitted to the same cryopreservation protocol that was composed of BTSTM+DMF (90:10), and the semen diluted in the 1:4 ratio. The results show that even on the same conditions, the seminal fluid presents different variations, and through the analysis of clusters it was possible to differentiate the formation of three broodstock groups (G1, G2, G3). G1 was classified as being of high spermatic quality after cryopreservation, but correlations show that animals with smaller head sizes have better fertilization rate after cryopreservation, and possibly motility time can be used as a pre-freeze indicator for C. macropomum.

A busca de estratégias eficientes para a manutenção de espécies em risco de extinção tem impulsionado a comunidade científica a pesquisar alternativas para a preservação de material genético, com intuito de formação de bancos de genoma e aplicação de biotécnicas reprodutivas. Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos de dois protocolos diferentes de resfriamento pré-congelamento para a criopreservação de sêmen de jaguatirica (n=3), gato-do-mato-pequeno (n=4) e gato doméstíco (n=15). Apenas seis amostras de sêmen de jaguatirica, sete de gato-do-mato-pequeno e treze amostras de gato doméstico apresentaram características qualitativas e quantitativas para serem submetidas aos dois métodos de resfriamento. Estas amostras foram processadas e diluídas em meio crioprotetor, com 4% de glicerol e divididas em duas alíquotas submetidas ao método rápido (30 min a 4°C) ou lento (= 2 horas a 4°C) de resfriamento e, em seguida congeladas. Após o descongelamento as amostras foram avaliadas para índice de motilidade, percentual de células com acrossoma intacto e de células viáveis. Ovócitos de gatas domésticas maturados in vitro foram utilizados para avaliar a capacidade de ligação espermática à zona pelúcida, em ensaios de ligação competitiva in vitro. Os espermatozóides criopreservados pelos dois métodos, diferenciados entre si pelo uso de corante vital, competiram pela ligação à zona pelúcida dos mesmos ovócitos, em iguais condições de tratamento. O índice médio da motilidade espermática, pós-congelamento, foi de aproximadamente 50% para todas as espécies nos dois métodos de resfriamento. O percentual de células com acrossoma intacto, para a jaguatirica, foi de aproximadamente 20% nos dois métodos de resfriamento enquanto o gato-do-mato-pequeno apresentou 30,8% de células com acrossoma intacto no método de resfriamento rápido e 33,4% no método lento. Para o gato doméstico, o percentual de células com acrossoma intacto foi de 33,4% e 32,7% nos métodos de resfriamento rápido e lento, respectivamente. O sêmen do gato-do-mato-pequeno sofreu a menor redução no percentual de células viáveis com 51,2% no método de resfriamento rápido e 44% no método lento. A jaguatirica apresentou os menores índices entre as três espécies com 24% de células viáveis no método rápido e 27,4% no método lento, e o gato doméstico apresentou 28,6% e 28,2% de células viáveis nos métodos rápido e lento, respectivamente. O número médio de espermatozóides ligados por ovócito foi maior (p < 0,05) para o resfriamento lento do sêmen de gato-do-mato-pequeno (5,8 +- 0,9) do que para o resfriamento rápido (2,7 +- 0,4). Já o resfriamento rápido proporcionou melhores resultados na taxa de ligação espermática para a jaguatirica (8,5 +- 1,3) (p < 0,01) e para gato doméstico (4,3 +-0,9) (p< 0,05), enquanto o método de resfriamento lento proporcionou 2,5 +- 0,3 espermatozóides de jaguatirica e 1,4 +- 0,2 espermatozóides de gato doméstico ligados por ovócito. As diferentes respostas entre as espécies podem ser devidas a características espermáticas espécie-específicas e individuais. Os resultados permitiram inferir que os protocolos de criopreservação devem ainda ser aperfeiçoados e adaptados à cada espécie e que o ensaio de ligação espermática competitiva foi eficiente na detecção de diferenças na função espermática entre tratamentos, o que não foi possível com as avaliações espermáticas de rotina