Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:59:30Z : No. of bitstreams: 1 paschoal_dm_me_botfmvz.pdf: 1363323 bytes, checksum: f767f2dcabcc3f599b8e36c74c4d096c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desta dissertação foi avaliar a viabilidade e a resistência à criopreservação após a realização de lipólise química utilizando-se o forskolin. Embriões Bos taurus indicus (OZ) e Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) produzidos in vitro, foram comparados em meio de cultivo contendo ou não soro fetal bovino (SFB). Para o experimento1, 1.052 oócitos de graus I e II foram colhidos de ovários de vacas Bos taurus indicus de abatedouro, dividindo em 7 réplicas. Os oócitos foram maturados em TCM 199 acrescido de SFB, Piruvato de Sódio, FSH, LH e Penicilina/Estreptomicina. A fertilização foi realizada com sêmen de touro Nelore (Bos taurus indicus) ou com sêmen de touro Simental (Bos taurus taurus), em meio HTF acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Cafeína, Heparina, Penicilinamina, Hipotaurina, Epinefrina e Penicilina/Estreptomicina. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOFaa, acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Penicilina/Estreptomicina, suplementado ou não com SFB (Grupo 2,5%SFB e Grupo 0%SFB). No D6 os blastocistos foram novamente divididos em 2 sub-grupos com ou sem adição de 10μM de forskolin (total de 4 grupos - 2,5%SFB, 0%SFB, 2,5%+F e 0%+F). Para o experimento 2 os embriões foram expostos a solução de vitrificação 1 (SV1 = 5M de Etileno Glicol) durante 3 minutos e transferidos para uma gota com 15μL da solução de vitrificação 2 (SV2 = composta por 7M de Etileno Glicol, 0.5M de Galactose e 18% (w/v) de Ficoll 70) sendo, em seguida envasados em palhetas francesas estéreis de 0,25 mL. Para o aquecimento, as palhetas foram mantidas em ar por 8 segundos e depois em água a 37°C por 15 segundos. Como controle dos experimentos, embriões bovinos produzidos in vivo coletados de vacas Nelores foram utilizados. A taxa de clivagem e de produção de blastocisto no experimento 1, não diferiu entre os tratamentos dentro dos grupo... / The main objective of this dissertation was to evaluate the viability and cryotolerance of bovine embryos treated with forskolin to induce chemical lipolysis. In vitro produced Bos taurus indicos (OZ) and Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) embryos were compared in culture conditions containing or not fetal calf serum (FCS). For Experiment 1, 1.052 grade I and II Bos taurus indicos oocytes were obtained from slaughterhouse ovaries and divided in 7 replicates. The oocytes were matured in TCM 199 supplemented with FCS, Sodium Piruvate, FSH, LH and Penicillin/Streptomycin. Fertilization was performed using semen from one Nelore bull (Bos taurus indicos) and one Simental bull (Bos taurus taurus) in HTF medium supplemented with BSA, Sodium Pyruvate, Caffeine, Heparine, Penicilamine, Hipotaurine, Epinephrine and Penicillin/Streptomycin. The presumptive zygotes were cultured in SOFaa with BSA, Sodium Pyruvate and Penicillin/Streptomycin supplemented or not with FCS (Group 2.5%FCS and Group 0%FCS). On day 6 embryos from both groups were divided in two sub-groups containing or not 10μM of forskolin (total of 4 groups - 2.5%FCS, 0%FCS, 2.5%+F and 0%+F). For Experiment 2 the embryos were exposed to a vitrification solution 1 (SV1 = 5M of Ethylene Glycol) during 3 minutes and transferred to a vitrification solution 2 (SV2 = 7M Ethylene Glycol + 0.5M Glucose + 18% Ficoll). While in the SV2 embryos were packaged in 0.25 mL straws, incubated for 1 minute in Liquid N2 vapor and plunged into Liquid N2. For warming the straws were held in air for 8 seconds and plunged in 37oC water bath for 15 seconds. As a control, in vivo produced embryos collected from Nelore cows were used. The cleavage and blastocyst production rates, in Experiment 1, was not different among groups of OZ or OMZT embryos (P>0.05). However, a significant difference was observed in blastocyst production rates when... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:19:15Z : No. of bitstreams: 1 rocha_nas_me_jabo.pdf: 503011 bytes, checksum: f1714a5fae847fcec5ec5165da511227 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos da suplementação com antioxidantes intracelulares e extracelulares em diferentes etapas da PIV (MIV e/ou CIV), e da tensão de oxigênio durante o CIV sobre o desenvolvimento e criotolerância de embriões bovinos. No Exp.1 foi realizada a suplementação com antioxidantes {0,6 mM cisteína (CIST), 0,6 mM cisteína associado á 100 μM de cisteamina (C+C) e 100 UI catalase (CAT)} durante todo o período de CIV, em diferentes atmosferas gasosas {5% CO2 em ar (20% O2) ou atmosfera controlada (7% O2, 5% CO2 e 88% N2)}. Já, no Exp. 2 foi realizada a suplementação com antioxidantes {0,6 mM cisteína (CIST), 100 UI catalase (CAT) e 100 μM de β-mercaptoetanol (β-ME)} durante 72 horas de CIV, nas diferentes atmosferas gasosas. Posteriormente, após definir a tensão de oxigênio, bem como, o período de suplementação adequado para o CIV, foi realizada a adição de antioxidantes durante a maturação in vitro (MIV) e/ou 72 horas de CIV (Exp.3). No Exp.1, a taxa de desenvolvimento embrionário foi adversamente afetada (P<0,05) pelos tratamentos CIST (11,2%) e C+C (1,4%), em relação ao Controle (26,6%), e pela tensão de oxigênio (17,2% e 11,1%; 20 e 7% O2, respectivamente). Em relação à taxa de re-expansão, após reaquecimento e cultivo in vitro por 24 horas, não houve diferença significativa (P>0,05) entre os tratamentos avaliados (66,7% a 100%). No Exp.2, as taxas de blastocistos não foram afetadas (P>0,05) pelos tratamentos CIST, β-ME e CAT (43,7% a 48,5%), porém a baixa tensão de oxigênio afetou adversamente (P<0,05) o desenvolvimento embrionário (52,1% e 38,4%; 20 e 7% O2 respectivamente). A mensuração dos níveis intracelulares de ROS não foi afetada (P>0,05) pelas variáveis tratamentos (0,95 a 0,78) e tensão de oxigênio... / This study was conducted to evaluate the effects of intracellular and extracellular antioxidants supplementation, in different stages of IVP (IVM and/or IVC), and oxygen tension during IVC on development, quality and cryotolerance of bovine embryos. Exp.1 was performed with the supplementation with antioxidants {0.6 mM cysteine (CIST); 0.6 mM cysteine associated to 100 μM cysteamine (C+C); 100 UI catalase (CAT)} during entire period of IVC in different gaseous atmospheres {5% CO2 in air (20% O2) or controlled atmosphere (7% O2, 5% CO2 and 88% N2)}. Already, in Exp.2 was performed the antioxidant supplementation {0.6 mM cysteine (CIST); 100 μM β-mercaptoethanol (β-ME); 100 UI catalase (CAT)} for 72 hours of IVC in different gaseous atmospheres. Later, after setting the oxygen tension as well as the supplementation period suitable for IVC, was carried out the addition of antioxidants during in vitro maturation (IVM) and/or 72 hours of IVC (Exp.3). In Exp.1, the rate of embryo development was adversely affected (P<0.05) by the treatments CIST (11.2%) and C+C (1.4%), compared to Control (26.6%), and oxygen tension (17.2% and 11.1%, 20 and 7%O2, respectively). Regarding the re-expansion rate after warming and in vitro culture for 24 hours, no difference (P>0.05) between the treatments were found (66.7% to 100%). In Exp.2, blastocysts rates were not affected (P>0.05) by treatments CIST, β-ME and CAT (43.7% to 48.5%), but the low oxygen tension adversely affected (P<0.05) embryo development (52.1% to 38.4%, 20 and 7%O2, respectively). The quantification of intracellular levels of ROS was not affected (P>0.05) by the variables treatments (0.95 to 0.78) and oxygen tension... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Resumo: O estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos da suplementação com antioxidantes intracelulares e extracelulares em diferentes etapas da PIV (MIV e/ou CIV), e da tensão de oxigênio durante o CIV sobre o desenvolvimento e criotolerância de embriões bovinos. No Exp.1 foi realizada a suplementação com antioxidantes {0,6 mM cisteína (CIST), 0,6 mM cisteína associado á 100 μM de cisteamina (C+C) e 100 UI catalase (CAT)} durante todo o período de CIV, em diferentes atmosferas gasosas {5% CO2 em ar (20% O2) ou atmosfera controlada (7% O2, 5% CO2 e 88% N2)}. Já, no Exp. 2 foi realizada a suplementação com antioxidantes {0,6 mM cisteína (CIST), 100 UI catalase (CAT) e 100 μM de β-mercaptoetanol (β-ME)} durante 72 horas de CIV, nas diferentes atmosferas gasosas. Posteriormente, após definir a tensão de oxigênio, bem como, o período de suplementação adequado para o CIV, foi realizada a adição de antioxidantes durante a maturação in vitro (MIV) e/ou 72 horas de CIV (Exp.3). No Exp.1, a taxa de desenvolvimento embrionário foi adversamente afetada (P<0,05) pelos tratamentos CIST (11,2%) e C+C (1,4%), em relação ao Controle (26,6%), e pela tensão de oxigênio (17,2% e 11,1%; 20 e 7% O2, respectivamente). Em relação à taxa de re-expansão, após reaquecimento e cultivo in vitro por 24 horas, não houve diferença significativa (P>0,05) entre os tratamentos avaliados (66,7% a 100%). No Exp.2, as taxas de blastocistos não foram afetadas (P>0,05) pelos tratamentos CIST, β-ME e CAT (43,7% a 48,5%), porém a baixa tensão de oxigênio afetou adversamente (P<0,05) o desenvolvimento embrionário (52,1% e 38,4%; 20 e 7% O2 respectivamente). A mensuração dos níveis intracelulares de ROS não foi afetada (P>0,05) pelas variáveis tratamentos (0,95 a 0,78) e tensão de oxigênio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study was conducted to evaluate the effects of intracellular and extracellular antioxidants supplementation, in different stages of IVP (IVM and/or IVC), and oxygen tension during IVC on development, quality and cryotolerance of bovine embryos. Exp.1 was performed with the supplementation with antioxidants {0.6 mM cysteine (CIST); 0.6 mM cysteine associated to 100 μM cysteamine (C+C); 100 UI catalase (CAT)} during entire period of IVC in different gaseous atmospheres {5% CO2 in air (20% O2) or controlled atmosphere (7% O2, 5% CO2 and 88% N2)}. Already, in Exp.2 was performed the antioxidant supplementation {0.6 mM cysteine (CIST); 100 μM β-mercaptoethanol (β-ME); 100 UI catalase (CAT)} for 72 hours of IVC in different gaseous atmospheres. Later, after setting the oxygen tension as well as the supplementation period suitable for IVC, was carried out the addition of antioxidants during in vitro maturation (IVM) and/or 72 hours of IVC (Exp.3). In Exp.1, the rate of embryo development was adversely affected (P<0.05) by the treatments CIST (11.2%) and C+C (1.4%), compared to Control (26.6%), and oxygen tension (17.2% and 11.1%, 20 and 7%O2, respectively). Regarding the re-expansion rate after warming and in vitro culture for 24 hours, no difference (P>0.05) between the treatments were found (66.7% to 100%). In Exp.2, blastocysts rates were not affected (P>0.05) by treatments CIST, β-ME and CAT (43.7% to 48.5%), but the low oxygen tension adversely affected (P<0.05) embryo development (52.1% to 38.4%, 20 and 7%O2, respectively). The quantification of intracellular levels of ROS was not affected (P>0.05) by the variables treatments (0.95 to 0.78) and oxygen tension... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Resumo: O objetivo desta dissertação foi avaliar a viabilidade e a resistência à criopreservação após a realização de lipólise química utilizando-se o forskolin. Embriões Bos taurus indicus (OZ) e Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) produzidos in vitro, foram comparados em meio de cultivo contendo ou não soro fetal bovino (SFB). Para o experimento1, 1.052 oócitos de graus I e II foram colhidos de ovários de vacas Bos taurus indicus de abatedouro, dividindo em 7 réplicas. Os oócitos foram maturados em TCM 199 acrescido de SFB, Piruvato de Sódio, FSH, LH e Penicilina/Estreptomicina. A fertilização foi realizada com sêmen de touro Nelore (Bos taurus indicus) ou com sêmen de touro Simental (Bos taurus taurus), em meio HTF acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Cafeína, Heparina, Penicilinamina, Hipotaurina, Epinefrina e Penicilina/Estreptomicina. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOFaa, acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Penicilina/Estreptomicina, suplementado ou não com SFB (Grupo 2,5%SFB e Grupo 0%SFB). No D6 os blastocistos foram novamente divididos em 2 sub-grupos com ou sem adição de 10μM de forskolin (total de 4 grupos - 2,5%SFB, 0%SFB, 2,5%+F e 0%+F). Para o experimento 2 os embriões foram expostos a solução de vitrificação 1 (SV1 = 5M de Etileno Glicol) durante 3 minutos e transferidos para uma gota com 15μL da solução de vitrificação 2 (SV2 = composta por 7M de Etileno Glicol, 0.5M de Galactose e 18% (w/v) de Ficoll 70) sendo, em seguida envasados em palhetas francesas estéreis de 0,25 mL. Para o aquecimento, as palhetas foram mantidas em ar por 8 segundos e depois em água a 37°C por 15 segundos. Como controle dos experimentos, embriões bovinos produzidos in vivo coletados de vacas Nelores foram utilizados. A taxa de clivagem e de produção de blastocisto no experimento 1, não diferiu entre os tratamentos dentro dos grupo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main objective of this dissertation was to evaluate the viability and cryotolerance of bovine embryos treated with forskolin to induce chemical lipolysis. In vitro produced Bos taurus indicos (OZ) and Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) embryos were compared in culture conditions containing or not fetal calf serum (FCS). For Experiment 1, 1.052 grade I and II Bos taurus indicos oocytes were obtained from slaughterhouse ovaries and divided in 7 replicates. The oocytes were matured in TCM 199 supplemented with FCS, Sodium Piruvate, FSH, LH and Penicillin/Streptomycin. Fertilization was performed using semen from one Nelore bull (Bos taurus indicos) and one Simental bull (Bos taurus taurus) in HTF medium supplemented with BSA, Sodium Pyruvate, Caffeine, Heparine, Penicilamine, Hipotaurine, Epinephrine and Penicillin/Streptomycin. The presumptive zygotes were cultured in SOFaa with BSA, Sodium Pyruvate and Penicillin/Streptomycin supplemented or not with FCS (Group 2.5%FCS and Group 0%FCS). On day 6 embryos from both groups were divided in two sub-groups containing or not 10μM of forskolin (total of 4 groups - 2.5%FCS, 0%FCS, 2.5%+F and 0%+F). For Experiment 2 the embryos were exposed to a vitrification solution 1 (SV1 = 5M of Ethylene Glycol) during 3 minutes and transferred to a vitrification solution 2 (SV2 = 7M Ethylene Glycol + 0.5M Glucose + 18% Ficoll). While in the SV2 embryos were packaged in 0.25 mL straws, incubated for 1 minute in Liquid N2 vapor and plunged into Liquid N2. For warming the straws were held in air for 8 seconds and plunged in 37oC water bath for 15 seconds. As a control, in vivo produced embryos collected from Nelore cows were used. The cleavage and blastocyst production rates, in Experiment 1, was not different among groups of OZ or OMZT embryos (P>0.05). However, a significant difference was observed in blastocyst production rates when... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T14:15:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SabhaJunior_MarioJoseJorge_M.pdf: 6435667 bytes, checksum: 67b234a3d979480c872a267ba7d42c08 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Na reparação da lesão nervosa periférica, nem sempre é possível a simples sutura dos cotos nervosos quando há perda de tecido, pois pode submeter o nervo a uma tensão excessiva, o que prejudica sua irrigação e favorece a formação de tecido cicatricial. O nervo sural tem sido utilizado como auto-enxerto, unindo os cotos do nervo lesado. Sendo a maioria dos nervos de diâmetro superior ao do nervo sural, há necessidade de se unir paralelamente vários segmentos do nervo, para auto-implantar entre os cotos do nervo lesado (enxerto em cabo). Este procedimento tem o inconveniente de conter muitos pontos de sutura, provocando maior inflamação local, sendo que a cicatrização exagerada impede o crescimento axonal e compromete o sucesso da reparação nervosa. Além disso, ocorre perda de sensibilidade na área correspondente do nervo doador. Diversos materiais têm sido estudados, com o objetivo de substituir os auto-enxertos de nervo no reparo da lesão nervosa periférica. Dentre eles, destaca-se o músculo esquelético, cuja membrana basal, apresenta características químicas e composição molecular semelhante às das células de Schwann, atuando como guia mecânico para o crescimento axonal. No presente trabalho, o músculo sóleo direito de ratos, foi submetido a injeção de cloridrato de lidocaína a: 2% (anestésico), e em seguida, estocado em baixas temperaturas (- 4°C no grupo I e - 400C no grupo lI) e após 3(três) semanas foi dissecado para a confecção de um enxerto autólogo de 1 cm de comprimento. Utilizou-se um grupo controle de animais que teve seu músculo sóleo direito tratado com anestésico local, com 24 horas de antecedência ao auto transplante (grupo ID). Após 50 dias do auto- transplante, o nervo ciático foi exposto, fixado e dividido em 2 porções: região do enxerto e coto distal, que foram analisados em microscopia de luz. A avaliação da regeneração axonal, foi realizada através da contagem direta do número de axônios mielínicos (NAM) regenerados destas duas porções do nervo ciático nos três grupos, bem como a mensuração do diâmetro dos axônios mielínicos (DAM), diâmetro das fibras mielínicas (DFM) e espessura da bainha de mielina (EBM) e razão G (RG). O presente trabalho, mostra que a regeneração axonal foi semelhante nos três grupos experimentais, sugerindo que a criopreservação do IDÚScu1o-esquelético é potencialmente útil, por permitir a criação de um banco de auto-enxertos de músculo esquelético para o reparo das lesões do nervo periférico / Abstract: In peripheral nerve regeneration it is not always possible to simply suture nerve stumps when there is loss of tissue, as this may place excessive tension on the nerve and hinder irrigation, favoring the development of scar tissue. The sural nerve has often served as auto-graft, binding the stumps of the transected nerve. As most nerves have larger diameters than the sural nerve it is necessary to join several segments in parallel for self implantation among the stumps of the damaged nerve (autologous cable graft). This procedure has the drawback of having many suture points, promoting more local inflammation and exaggerated development of scar tissue that prevents axonal growth, inhibiting the successful nerve regeneration. Furthermore, there is loss of sensitivity in the area corresponding to the donor nerve. Several materials have been tested with the objective of replacing nerve autografts in the regeneration of peripheral nerve lesion. Among them the skeletal muscle stands out, as its basal membrane presents chemical and molecular composition characteristics that are similar to those of Schwann cells, acting as a mechanical guide for axonal growth. In the present paper, rats right soleus muscle was injected with 2% lidocaine hydrochloride (anesthetic) stored at low temperatures (- 4°C in group I and - 40°C in group 11) and 3 (three) weeks later it was dissected to prepare a 1 cm long autologous graft. A control group of animals had their right soleus muscle treated with a local anesthetic 24 hours prior to self-transplant (group li). Fifty days after the self transplant the sciatic nerve was exposed, fixated and divided into 2 parts: the graft site and the distal stump, analyzed by light microscopy. The axonal regeneration evaluation was carried out by direct counting of the number of myelinated axons (NMA) regenerated ftom these two pars of the sciatic nerve in the three groups, as well as the measurement of myelinated axon diameter (MAD), myelinated fiber diameter (MFD), myelinated sheath thickness (MST) and G ratio (GR). The present study shows that axonal regeneration was similar in the three experimental groups, suggesting that cryopreservation of skeletal musc1e is potentially useful, once it a11ows the development of a skeletal musc1e autografts storage to repair the peripheral nerve injuries / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular

Orientador: José Augusto Senhorini / Resumo: No Brasil os siluriformes neotropicais são o segundo grupo mais ameaçado de extinção com 91 espécies. Neste trabalho, foi empregada a técnica de quimerismo usando duas espécies de siluriformes neotropicais o mandi (Pimelodus maculatus) e o bagre sapo (Pseudopimelodus mangurus), visando a reconstituição da segunda espécie. Para tal foi estabelecido um protocolo de isolamento, separação, transplante e criopreservação de células germinativas tronco. As gônadas de P. mangurus foram digeridas enzimáticamente e as células germinativas tronco foram separadas por gradiente descontinuo de densidade, marcadas com PKH26 e transplantadas via papila urogenital em 32 receptores triploides de P. maculatus. Oito gônadas de P. maculatus que receberam transplantes foram analisadas por cortes histológicos e microscopia de epifluorescência para identificação das células germinativo tronco transplantadas, sendo encontradas células do doador em duas gônadas receptoras. Parte das gônadas, bem como do tecido muscular de P. maculatus e de P. mangurus foram utilizados para a extração do DNA genômico e serão utilizados para análise molecular, por a construção de primers, para confirmação do quimerismo. O protocolo estabelecido de criopreservação de células germinativas-tronco de P. mangurus permitirá transplante via intraperitoneal em larvas triploides, durante o período reprodutivo. Este trabalho é pioneiro no transplante de células germinativas-tronco em espécies de siluriformes neotropicais, usando ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In Brazil, Neotropical siluriformes are the second more endangered group with 91 species. In this work, the technique of chimerism was used with two species of Neotropical siluriformes, □mμandi□(¶ Pimelodus maculatus) and □baμgre sapo□¶□ (Pseudopimelodus mangurus), aiming the reconstitution of the second species. Therefore, was established a protocol for isolation; separation and transplantation of stem germ-cells. The gonads of P. mangurus were enzymatic digested and the stem germ-cells separated using a discontinuous density gradient, labeled with PKH26 and transplanted through the urogenital papillae in 32 triploids recipients of P. maculatus. The gonads of eight fish that have received the stem germ-cells were analyzed by histology and fluorescent microscopy for identification of the germ-cell transplanted, and cells from the donor fish were identified in the recipient gonads. For confirmation of chimerism, part of the gonads, as well the muscle tissue of P. maculatus and P. mangurus was used for extraction of genomic DNA, for primers construction and confirmation of the chimerism. The developed protocol for cryopreservation of stem germ-cells of P.mangurus will allow the transplant via urogenital papila in triploid larvae during the spawning season. This work is pioneer in the transplant of stem germ-cells in Neotropical siluriformes using adult triploids as recipients. The results of this study may be applied in future endangered native species or with importance to aqu... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by GUSTAVO FELIPPELLI null (gusvetfelippelli@gmail.com) on 2017-03-15T14:33:58Z No. of bitstreams: 1 TESE_GUSTAVO_FELIPPELLI_Repositório.pdf: 2645589 bytes, checksum: 3a8e871dd6537ad45d24dd55468d41f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-15T16:55:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 felippelli_g_dr_jabo.pdf: 2645589 bytes, checksum: 3a8e871dd6537ad45d24dd55468d41f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-15T16:55:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 felippelli_g_dr_jabo.pdf: 2645589 bytes, checksum: 3a8e871dd6537ad45d24dd55468d41f9 (MD5) Previous issue date: 2017-02-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita, importante em medicina veterinária e humana por ocasionar abortos e doenças congênitas em diversas espécies. A viabilidade da transmissão sexual do Toxoplasma gondii em vacas, sorologicamente negativas para a infecção por T. gondii, submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF) com sêmen criopreservado e contaminado com taquizoítos de T. gondii, por meio das técnicas (RIFI, bioprova e nested PCR). Inicialmente, utilizou-se a bioprova (em inoculação camundongos) objetivando avaliar a sobrevivência de taquizoítos de T. gondii em sêmen, criopreservado em DMSO (2,5%, 5,0%, 7,5%, 8,0% e 10,0%) e congelado em nitrogênio líquido (-196°C). Foram selecionadas 10 vacas em idade reprodutiva, soronegativas: Brucella abortus, Neospora caninum, Toxoplasma gondii. Os animais foram submetidos ao protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e tratados com dose única de estreptomicina (25mg/Kg) contra leptospirose. Das 10 vacas, cinco foram inseminadas com sêmen convencional (Glicerol 3%) e mantidas como grupo controle. As outras cinco foram inseminadas com sêmen criopreservado com DMSO (8%), contendo 1x106 taquizoítos de T. gondii. Nas datas experimentais 1, 3, 5, 7, 12, 14, 21, 28, 35, 42, 50, 56, 63, 70, 77 e 100 dias pós-inoculação (IATF), exames clínicos, hematológicos e sorológicos e moleculares (nested PCR) foram realizados. A soroconversão ocorreu em quatro fêmeas bovinas, pertencentes ao grupo que receberam sêmen infectado com taquizoítos de T. gondii (Amostra RH). Decorridos 21 dias pós-inseminação artificial foi possível diagnosticar em uma vaca (nº 1008), deste mesmo grupo, recíproca crescente de títulos sorológicos variando de 64 até 256 (28º, 35º, 42º DPIA). A partir do 49º até o 100º DPIA, os títulos foram decrescendo de 128 a 64, caracterizando um processo de cronificação (títulos IgG anti-T. gondii ≥64). Outras três fêmeas bovinas (nº 1108, nº 2018 e nº 3462) apresentaram títulos sorológicos (64) a partir do 56º até 100º DPIA, Apenas uma fêmea do grupo infectado não apresentou soroconversão durante todo estudo. Nenhum animal pertencente ao grupo controle apresentou anticorpos (IgG) contra T. gondii ao longo de todo experimento. No 100º DPIA, sete vacas que não estavam gestantes pelo exame ultrassonográfico, de ambos os grupos foram eutanasiadas e necropsiadas. Foram colhidos tecidos (cérebro, retina, pulmão, fígado, baço, linfonodos mesentéricos, musculatura – Longissimus dorsi, ovário e útero). Foi possível diagnosticar a presença do parasito por meio do bioensaio e nested PCR. O parasitismo tissular por T. gondii (bioensaio e nested PCR) foi diagnosticado em retina, musculatura, cérebro e fígado pertencentes às vacas nº 1008, nº 2018, nº 0813, nº 1108 e nº 3462. Em síntese, estes resultados sugerem a viabilidade da transmissão, via IATF Toxoplasma gondii em bovinos. / FAPESP: 2013/16040-1

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Aulus Cavalieri Carciofi / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: O objetivo desse projeto foi determinar a eficiência do uso de antioxidantes na prevenção de efeitos deletérios da congelação de sêmen em cães férteis e subférteis. Para isso foram executados dois experimentos: O primeiro teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, utilizando meio diluente a base de TRIS/gema de ovo/glicerol, com a adição ou não de antioxidantes (Catalase, Superóxido Dismutase e suas associações, ácido ascórbico, tocoferol e suas associações). O segundo experimento teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, suplementados com 500mg de vitamina C e E, por via oral, durante 60 dias. Foram utilizados 13 cães, sendo 7 considerados férteis e 6 classificados com subférteis. Os cães férteis apresentavam exame andrológico dentro dos padrões recomendados pelo CBRA; os subférteis apresentavam baixa concentração espermática (< 20x10 6 sptz/mL) e/ ou alto índice de patologias espermáticas (> 30%). O sêmen foi congelado em três momentos, antes do início da suplementação (M1), 30 (M2) e 60 dias (M3) após o início da suplementação oral. O sêmen foi coletado por manipulação digital do pênis e analisado para: motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). A descongelação foi realizada a 70ºC por 8 segundos. Logo após as amostras foram avaliadas na análise computadorizada (CASA) e avaliação de integridade de membrana acrossomal e plasmática. Também foi analisada a taxa de peroxidação lipídica e antioxidantes: SOD, catalase, vitaminas C e E no plasma seminal. Pode-se concluir que a suplementação oral, no meio diluente ou a sua associação pode trazer benefícios para o processo de congelação/descongelação de cães... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this project was to determine the efficiency of antioxidants in preventing the deleterious effects of freezing semen in fertile and subfertile dogs. For this purpose two experiments were performed: The first aim was to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs, using the TRIS diluent / egg yolk / glycerol extender, with or without addition of antioxidants (Catalase, Superoxide dismutase and their associations, ascorbic acid, tocopherol and their associations). The second experiment aimed to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs supplemented with 500mg of vitamin C and E, orally for 60 days. We used 13 dogs, 7 were considered fertile and 6 classified as subfertile. The dogs had been considered fertile breeding soundness examination within the standards recommended by CBRA; the subfertile had lower sperm concentration (<20x10 6 sptz / mL) and / or high rate of sperm pathologies (> 30%). Semen was frozen in three stages, before the start of supplementation (M1), 30 (M2) and 60 days (M3) after the initiation of supplementation. Semen was collected by digital manipulation of the penis and analyzed for: motility, vigor, concentration and morphology. The frozen semen was performed by the method described by Chirinea et al. (2006). Thawing was performed at 70 ° C for 8 seconds. Soon after the samples were evaluated in the computerized analysis (CASA) and assessment of membrane integrity and acrosomal plasma. We also analyzed the rate of lipid peroxidation and antioxidants: SOD, catalase, vitamins C and E in seminal plasma. It can be conclude that oral supplementation, in the extender or your association can benefit the process of freezing / thawing of dogs. Especially for those with reproductive problems and may even, with oral therapy to reduce or eliminate this feature / Doutor

A criopreservação de sêmen é um processo de grande estresse celular, que impõe aos espermatozóides condições extremamente desfavoráveis à manutenção de sua viabilidade. Diversos estudos propõem que a produção excessiva de espécies reativas de oxigênio e a perda da capacidade antioxidante do sêmen potencializam os efeitos prejudiciais dessa biotécnica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as atividades antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas e a concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), como indicador de lipoperoxidação do sêmen eqüino, durante a criopreservação. Quinze ejaculados de seis garanhões comprovadamente férteis da raça Crioula, foram submetidos a criopreservação, utilizando-se diluente comercial à base de citrato-Hepes, gema de ovo e leite. Foram avaliadas as atividades das enzimas catalase, glutationa peroxidase e superóxido dismutase; o potencial antioxidante total e a concentração de TBARS no sêmen fresco, diluído e congelado. Uma maior atividade das três enzimas estudadas foi observada no sêmen fresco em relação ao sêmen diluído e congelado (p<0,0001), não havendo diferença entre os dois últimos (p>0,05). Não houve diferença na atividade antioxidante não enzimática nas três fases estudadas (p>0,05). Não foi observada nenhuma associação tanto das defesas antioxidantes enzimáticas como das não enzimáticas com a qualidade do sêmen congelado. A queda na motilidade do sêmen congelado pode ser parcialmente explicada pelo aumento da peroxidação dos lipídios do sêmen. / Semen cryopreservation is a stressful procedure which exposes spermatozoa to harmful conditions leading to reduced cell viability. Several studies propose that reactive oxygen species overproduction and decreased antioxidant capacity of semen may increase the damaging effects of the technique. The aim of this work was to evaluate the enzymatic and nonenzymatic antioxidant activity, as well as the concentration of thiobarbituric acid reactive substances (TBA-RS) as and indicator of lipid peroxidation on equine semen during cryopreservation. Fifteen ejaculates from six fertile Criollo stallions were cryopreserved using a commercial extender (citrate-Hepes, egg yolk and skim milk). Activity of catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase; the total radical-trapping antioxidant potential and TBA-RS content was assessed in native semen, semen diluted in semen extender and thawed semen. All three enzymes showed higher activities in native semen than in diluted and thawed semen (p<0,0001). No difference was observed between diluted and thawed semen (p>0,05). The non-enzymatic defenses did not differ along cryopreservation process (p>0,05). There was not any association between semen quality and both enzymatics and non-enzymatics antioxidant defenses. The decreasing of spermatozoa motility might be partially explained by the increase in semen lipoperoxidation.

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Denise Pereira Leme / Resumo: O presente estudo objetivou comparar diferentes curvas de congelação utilizando-se uma máquina com curvas programadas (TK3000®) com congelação em vapor de nitrogênio liquido, utilizando sêmen de garanhões de alta e baixa congelabilidade. Comparou-se a eficácia do período de estabilização do sêmen em diferentes sistemas de transporte refrigerado (Botutainer® e Equitainer®) em relação à estabilização feita em refrigerador Minitüb® previamente à congelação. No experimento I e II foram utilizados 4 garanhões com sêmen de alta congelabilidade. As amostras foram refrigeradas durante 20 minutos previamente à congelação em refrigerador Minitüb® (GM), Botutainer® (GB) e Equitainer® (GE). Não houve diferença entre os grupos quanto a motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP): GM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) demonstrando que os dispositivos podem ser utilizados como uma alternativa aos refrigeradores. Os valores de integridade de membrana plasmática (IMP%) foram GM(49,43a); GB(48,70a); GE(44,90b). No experimento II foram utilizadas 3 curvas programadas na TK3000® (C1, C2, C3) e a metodologia em caixa de isopor (GC). As comparações foram realizadas em relação ao GC e não apresentaram diferença significativa. Valores em porcentagem de MT, MP e IMP: GCxC1 (70 x 67,5; 35,7 x 32; 48,3 x 46); GCxC2 (63,3 x 67,66; 33,3 x 34,8; 45,4 x 48,3); GCxC3 (63,2 x 65; 32,2 x 32,4; 48,09 x 49,3). No teste de fertilidade, as inseminações foram realizadas com amostras congeladas com C2 e GC apresentando índices de prenhez de 65 e 60% respectivamente, sem diferença significativa. A TK3000® foi tão eficaz quanto à metodologia de congelação em caixa de isopor em relação à congelabilidade e fertilidade. Todas as curvas testadas foram eficientes na manutenção da viabilidade...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This present study compared freezing ratios in a programmable freezer (TK3000) performed by usual methodology, using good freezers and poor freezers stallions. The semen stabilization period efficiency was compared in cooled semen transport systems (Botutainer® e Equitainer®) in relation with Minitüb® fridge before the cryopreservation. Four good freezers stallions was used in experiments I and II. Samples were cooled during 20 minutes before the cryopreservation in a Minitüb® fridge (GM), Botutainer® (GB) and Equitainer® (GE). There was not difference between groups in relation with total motility (TM) and progressive motility (PM): CM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) showing that transport systems can be used as an alternative instead of fridges. Plasma membrane integrity (MPI%) values were CM (49,43a); GB (48,70a); GE (44,90b). Three frozen rations were used in experiment II in the TK3000® (C1, C2, C3) and the isothermic box (CG). Results from each freezing ratio were compared to the control group and no difference was observed. Percentage values from TM, PM and MPI were the following: CGxC1(70x67,5; 35,7x32; 48,3x46); CGxC2 (63,3x67,66; 33,3x34,8; 45,4x48,3); CGxC3 (63,2x65; 32,2x32,4; 48,09x49,3). In the fertility test, artificial inseminations were performed with C2 and GC frozen samples showing pregnancy rates of 65 and 60%, respectively, without significant difference. The TK3000® was as efficient as the isothermic box frozen methodology in relation to freezability and fertility. All freezing ratios were efficient in semen viability maintenance. Ten Mangalarga Marchador breed stallions were used in the experiment III. The samples were shared and frozen simultaneously in two programmable freezers with different ratios (G2 e G3) and in an isothermic box (CG). For the statistical analisys, semen ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre