SILVA, L. M. Adição de agentes antioxidantes na solução de vitrificação do tecido ovariano ovino: Uma perspectiva para refinar e aperfeiçoar o protocolo. 2017. 122 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Morfofuncionais) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-04-05T13:10:39Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_lmsilva.pdf: 4989117 bytes, checksum: c975c55bf4a984a8f1f35248c2dc66df (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-04-05T13:10:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_lmsilva.pdf: 4989117 bytes, checksum: c975c55bf4a984a8f1f35248c2dc66df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T13:10:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_lmsilva.pdf: 4989117 bytes, checksum: c975c55bf4a984a8f1f35248c2dc66df (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Vitrification of ovarian tissue prior to gonadotoxic treatments is an alternative to preserve follicular reserve, with the aim of subsequent reimplantation and consequently, restoration of female fertility. However, the vitrification process causes some damage which should be minimize. Thus, Therefore, the objective of this study was to verify the catalase and alpha lipoic acid in different concentrations to reduce generation of reactive oxygen species (ROS), aiming to obtain less damage on follicular morphology and development, stromal cell density, alterations in the DNA, as well as mitochondrial activity of ovine preantral follicles. To achieved this objective, sheep ovarian fragments were distributed in 9 treatments: (1) fresh or control; (2) incubated for 24h (INC); (3) vitrified without antioxidants (SAA) or in the presence of catalase (CAT) at concentrations of (4) 10 - CAT10; (5) 20 - CAT20 or (6) 40 - CAT40 IU / ml or in the presence of ALA at concentrations of (7) 25 - ALA25; (8) 50-ALA50 or (9) 100 μM / ml (ALA100). After vitrification, all the fragments were warmed followed by incubation for 24 hours, finally, morphology and follicular development as well as ROS levels in the incubation medium were evaluated. Afterwards, the fragments of control, INC, SAA, CAT40 and ALA100 groups were analyzed for stromal cell density, DNA damage (TUNEL test and H2AX phosphorylation), ROS levels and mitochondrial function. The data were submitted to the statistical package SAS, and according to the behavior of the data and the differences were considered significant different when P <0.05. Unlike the other treatments, the percentage of morphologically normal follicles in the ALA groups with all the concentrations did not differ from the fresh tissue. Moreover, the percentage of developing follicles was higher in ALA100 than those found in the CAT40, ALA25 and ALA50 groups. However, whilst the treatment ALA100 maintained mitochondrial activity, it was not sufficient to control intracellular ROS production. In contrast, the treatments CAT10 and CAT20 significantly affected the ROS levels, stromal cell density as well as DNA damage revealed by γH2AX (CAT40). Additionally, the ovarian morphology was well preserved ALA100. It also promoted follicular development and caused less damage to the DNA of the preantral follicles. Despite the satisfactory results of the present study, it is fundamental to carry out new studies to define the ideal ALA concentration, in order to improve all the parameters evaluated. / A vitrificação do tecido ovariano antes de tratamentos gonadotóxicos é uma alternativa para a preservação da reserva folicular, visando o reimplante futuro e consequentemente, a restauração da fertilidade feminina. No entanto, o processo de vitrificação causa alguns danos que precisam ser minimizados. Desta forma, o objetivo desse estudo foi verificar o efeito da catalase e o ácido alfa lipóico em diferentes concentrações para reduzir geração de espécies reativas de oxigênio (ROS), visando obter menos danos sobre a morfologia e desenvolvimento folicular, densidade das células do estroma, alterações no DNA dos folículos pré-antrais ovinos, bem como atividade mitocondrial. Para isso, fragmentos de ovários ovinos foram distribuídos em 9 tratamentos: (1) fresco ou controle; (2) incubado por 24h - INC; (3) vitrificados sem antioxidantes (SAA) ou na presença de catalase (CAT) nas concentrações de (4) 10 - CAT10; (5) 20 - CAT20 ou (6) 40 - CAT40 UI/ml ou ainda na presença de ALA nas concentrações de (7) 25 - ALA25; (8) 50 - ALA50 ou (9) 100 ALA100 µM/ml. Após a vitrificação todos os fragmentos foram aquecidos e também incubados por 24 horas e foram avaliados quanto à morfologia e desenvolvimento folicular, bem como quanto aos níveis de ROS no meio de incubação. Posteriormente, apenas fragmentos dos grupos controle, INC, SAA, CAT40 e ALA100 foram analisados quanto à densidade das células do estroma, danos no DNA (teste TUNEL e fosforilação da H2AX), níveis de ROS e função mitocondrial dos folículos no tecido ovariano. Os dados foram submetidos ao pacote estatístico SAS, e de acordo com o comportamento dos mesmos os testes foram escolhidos e aplicados, sendo as diferenças consideradas estatisticamente significativas quando P<0,05. Ao contrário de outros tratamentos, a porcentagem de folículos morfologicamente normais no tecido ovariano vitrificado na presença de ALA em todas as concentrações, não diferiu do tecido fresco. A porcentagem de folículos em desenvolvimento foi maior em ALA 100 μM/mL do que aquelas encontradas no tecido incubado ou vitrificado com catalase (40 UI/mL) e ALA (25 ou 50 μM/mL). Entretanto, apesar do ALA na concentração de 100 µM/mL ter mantido a atividade mitocondrial, não foi suficiente para controlar a produção de ROS intracelular. O uso de catalase afetou significativamente os níveis de ROS (10 e 20 UI/mL), a densidade das células do estroma, bem como o dano do DNA revelado por γH2AX (40 IU/mL). A vitrificação de tecido ovariano ovino na presença de 100 µM/mL de ALA preservou a morfologia, promoveu o desenvolvimento e causou menos danos ao DNA dos folículos pré-antrais. Apesar dos resultados satisfatórios do presente estudo, é fundamental a realização de novos estudos para definir a concentração ideal de ALA, de modo a favorecer todos os parâmetros avaliados.

SILVA, João Marcos de Meneses e. Avaliação de ovários criopreservados por vitrificação ou congelação lenta após intervalo precoce e tardio de castração em ratas. 2014. 103 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T14:17:20Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_jmmsilva.pdf: 2293557 bytes, checksum: 0bcd3ba252eff52daa7effd53b94dbf2 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T14:18:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_jmmsilva.pdf: 2293557 bytes, checksum: 0bcd3ba252eff52daa7effd53b94dbf2 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-20T14:18:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_jmmsilva.pdf: 2293557 bytes, checksum: 0bcd3ba252eff52daa7effd53b94dbf2 (MD5) Previous issue date: 2014 / To compare two rat ovary cryopreservation techniques (vitrification vs. slow freezing) and two postmenopausal stages (early vs. late) with regard to graft take. Thirty-three Wistar rats were submitted to bilateral oophorectomy. One ovary was submitted to histological analysis while the other was cryopreserved by slow freezing or vitrification. The cryopreserved ovary was thawed and reimplanted in the greater omentum one week (early menopause) or one month (late menopause) after oophorectomy. One month after ovary reimplantation, the graft take was evaluated macroscopically and histologically. Six of the animals were used as controls and seven died. The histological findings of 20 animals included atretic follicles (n=4), primordial follicles (n=2), and corpus luteum with primordial follicles (n=3). No ovarian tissue was found in 11 animals. Vitrification resulted in a higher graft take rate than slow freezing (50% vs. 38.5%), but the difference was not statistically significant. However, the graft take rate was 9.3 times higher in the early than in the late postmenopausal stage (61.5% vs. 14.3%) (p=0.043). Ovary reimplantation is more likely to be successful in the late postmenopausal stage. / Comparar duas técnicas de criopreservação de ovário de ratas (vitrificação versus congelação lenta) e dois estágios pós-castração (intervalo precoce versus tardio) em relação à pega do enxerto. Trinta e três ratas Wistar foram submetidas à ooforectomia bilateral. Um ovário foi submetido à análise histológica, enquanto o outro foi criopreservado por congelação lenta ou vitrificação. O ovário criopreservado foi descongelado e reimplantado no omento maior uma semana (intervalo precoce) ou um mês (intervalo tardio) após ooforectomia. Um mês após o reimplante de ovário, a pega do enxerto foi avaliada macroscopicamente e histologicamente. Seis dos animais foram utilizados como controle e sete morreram. Os achados histológicos de 20 animais incluídos folículos atrésicos (n = 4), folículos primordiais (n = 2) e corpo lúteo com folículos primordiais (n = 3). No tecido ovariano foi encontrado em 11 animais. A vitrificação resultou em um enxerto com maior taxa de pega do que a congelação lento (50% versus 38,5%), mas a diferença não foi estatisticamente significante. No entanto, as pegas dos enxertos foram 9,3 vezes maiores na precoce do que na pós-ooforectomia tardia (61,5% versus 14,3%) (p = 0,043). O tecido ovariano apresenta melhor taxa de pega quando reimplantado na fase tardia da pós-ooforectomia.

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes tratamentos de superfície da cerâmica Y-TZP na resistência de união, durabilidade e discrepância marginal. Para os testes de resistência adesiva, foram obtidos 144 corpos de prova (cp) da cerâmica VITA In-Ceram YZ for InLab (5,25 x 3,75 x 4,5 mm), que foram divididos em 6 grupos (G) (n=24), conforme o tratamento de superfície: G1: sem tratamento (controle); G2: jateamento com partículas de alumínio revestidas por sílica (CoJet®-Sand, 3M ESPE AG) (silicatização); G3: vitrificação 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), condicionamento com ácido fluorídrico (HF) (1 min); G4: vitrificação 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), silicatização; G5: vitrificação 2 (Glaze VITA AKZENT), condicionamento com HF (1 min); G6: vitrificação 2 (Glaze VITA AKZENT), silicatização. Após todos os tratamentos, as superfícies foram silanizadas por 5 min (ESPE-SIL) e a cimentação com Panavia F (Kuraray) foi realizada. Metade dos espécimes de cada tratamento foi ensaiada 24h após cimentação (SECO), a outra metade foi submetida à armazenagem (150 dias) e termociclagem (12.000x) (TC), e então realizado o ensaio de cisalhamento (1 mm/min). G7: G1+TC; G8: G2+TC; G9: G3+TC; G10: G4+TC; G11: G5+TC; G12: G6+TC. Superfícies tratadas foram analisadas por perfilometria óptica 3D para obtenção dos dados de rugosidade (Ra) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (1000x). Análise por energia dispersiva de raio-X (EDS) foi realizada para determinar os elementos químicos presentes na superfície de cada grupo. Para a análise de adaptação marginal foram confeccionadas 60 infraestruturas (adaptadas em um troquel metálico) nas quais foram realizados os mesmos tratamentos de superfície / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of different surface treatments of Y-TZP ceramic on bond durability and marginal fit. 144 specimens of VITA In-Ceram YZ for InLab ceramic (5.25 x 3.75 x 4.5 mm) were obtained and divided into 6 groups (n=24) according to the surface treatment: G1: no treatment (control); G2: chairside tribochemical silica coating system (CoJet®-Sand, 3M ESPE AG) (Cojet); G3: vitrification 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), conditioning with hydrofluoric acid (HF) (1 minute); G4: vitrification 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), Cojet; G5: vitrification 2 (Glaze VITA AKZENT), conditioning with HF (1 minute); G6: vitification 2 (Glaze VITA AKZENT), Cojet. Then, the ceramic surfaces were silanized and the cementPanavia F (Kuraray) was applied. Half of the specimens from each treatment was tested 24 hours after cementation (DRY), the remaining specimens were stored in distilled water for150 days,thermocycled(12,000x) (AGING) and then the shear test was performed (1mm/minute). Conditioned surfaces were evaluated by 3D optical profilometry in order to obtain roughness data (Ra) and analysed by scan electronic microscopy (SEM) (1000x). Analysis by energy x-ray dispersive (EDS) was performed to determine the chemical elements present in each surface group. For analysis of marginal adaptation 60 crowns were produced (adapted into a metal die) and the same surface treatments were carried out on the internal surface of the crowns. The data were analysed using. The results suggest the vitrification 1 and vitrification 2 groups showed the highest bond strength compared to the control group. The highest marginal discrepancies were observed in the vitrification groups (117.36±29.61 to 105.78±12.23) comparing with the other groups (55.29±8.71 and 55.04±8.55). / Orientador: Luiz Felipe Valandro / Coorientador: Fernando Eidi Takahashi / Banca: Marco Antonio Bottino / Banca: Renata Marques Melo / Banca: Paulo Francisco Cesar / Banca: Marcelo Giannini / Doutor

Submitted by Guilherme Nogueira Borges Filho (guilhermenbf@hotmail.com) on 2018-09-13T16:25:43Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇAO FINAL.pdf: 951810 bytes, checksum: a23293c8405d54df596f46f185841391 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-09-14T19:00:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 borgesfilho_gn_me_jabo.pdf: 951810 bytes, checksum: a23293c8405d54df596f46f185841391 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-14T19:00:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 borgesfilho_gn_me_jabo.pdf: 951810 bytes, checksum: a23293c8405d54df596f46f185841391 (MD5) Previous issue date: 2018-06-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / RESUMO - A necessidade de uma metodologia mais prática para transferência de embriões em tempo fixo em rebanhos de gado de corte, para que se torne mais proveitoso, tem aumentado ao longo dos anos. O presente estudo avaliou a taxa de concepção e gestação de embriões produzidos in vitro transferidos a fresco, vitrificados ou congelados em um rebanho nelore de corte. Doadoras Nelore (n= 20) de um mesmo rebanho foram previamente selecionadas para serem submetidas a ovum pick up em dia aleatório do ciclo estral. Oócitos foram recuperados e selecionados para maturação in vitro por 24 horas a 38,5°C com 5% CO2 e 95% de humidade do ar. Para fertilização in vitro, sêmen da mesma partida, de um touro pré-selecionado da raça Nelore foi utilizado. Após 6 dias de cultivo in vitro, os embriões na fase de blastocisto foram aleatoriamente selecionados para serem transferidos a fresco, vitrificados ou congelados. As transferências foram realizadas em novilhas e vacas do mesmo rebanho das doadoras. As taxas de concepção, aos 30 dias, para os embriões transferidos a fresco, vitrificados ou congelados e transferidos depois do reaquecimento foram, respectivamente, de 37,64 ± 11,20%, 24,09 ± 2,34% e 16,21 ± 10,23%. As taxas de concepção, aos 30 dias, considerando a categoria da receptora, novilha ou vaca foi de 23,02 ± 3,42% e 31,06 ± 4,62%, respectivamente. O estudo mostrou que o método de congelação lenta, para transferência direta utilizado, não consegue resultados similares aos transferidos à fresco (p= 0,0078) e que a vitrificação ainda deve ser o método para criopreservação de embriões em rebanho da raça Nelore. Foi usada uma significância de p<0,05. / ABSTRACT - The necessity of a more practical fixed time embryo transfer method in beef cattle herds, in order to make it more usable, has grown over the years. The present study compared the conception and pregnancy rates of in vitro produced embryos transferred fresh, vitrified or slow frozen in an nelore beef herd. Nelore donors (n=20) were previously selected to be submitted to ovum pickup on a random day of estrous cycle. Oocytes were recovered and selected for in vitro maturation for 24 hours at 38,5°C with 5% CO2 and 95% air humidity. For in vitro fertilization, semen, from the same batch, of one pre-selected Nelore bull was used. After 6 days of in vitro cultivation, embryos on blastocysts stage were randomly selected to be transferred either fresh, vitrified or frozen. The transfer procedures were conducted on heifers and cows of the same herd of the donors. Conception rates, at 30 days, for fresh transferred, vitrified and frozen transferred embryos were, respectively, 37,64 ± 11,20%, 24,09 ± 2,34% and 16,21 ± 10,23%. Conception rates, at 30 days, considering animal category of the recipients, heifer or cow were 23,02 ± 3,42% e 31,06 ± 4,62%, respectively. This study showed that the slow freezing, for direct transfer method used, can’t achieve similar results (p= 0,0078) as the fresh transferred on Nelore herds, and vitrification still has to be the cryopreservation method for embryos on Nelore herds. It was used a significance of p<0,05.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnologico / Made available in DSpace on 2016-01-08T18:03:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 95662.pdf: 5185706 bytes, checksum: 7219abc1902dbd81404b18998e157638 (MD5) Previous issue date: 1993 / Testes de abrasão empregando as técnicas de avaliação visual-PEI, rugosidade e reflexão da luz, foram realizados com o propósito de investigar os efeitos do tamanho e da fração volumétrica de uma fase de reforço, na porosidade e no mecanismo de desgaste abrasivo de vidrados cerâmicos. Com esta finalidade utilizou-se o conceito de projeto microestrutural, elaborado a partir de critérios quantitativos, relacionando a fase de reforço e o comportamento ao desgaste abrasivo a três corpos. Observou-se que a resistência ao desgaste aumenta quando ambos, tamanho e livre caminho médio da fase de reforço diminuem e sua fração volumétrica aumenta. Foi observado, também, que uma redução da porosidade ocorre quando o tamanho e a fração volumétrica da fase de reforço diminui. A observação da superfície abrasionada mostrou que o mecanismo de desgaste produzido pelo método de ensaio PEI, é caracterizado por fraturas múltiplas do tipo concoidal, originadas na matriz vítrea, as quais podem ser estudadas a partir de modelo de indentação para materiais frágeis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-02Bitstream added on 2014-06-13T19:05:09Z : No. of bitstreams: 1 vanderlei_ad_dr_sjc.pdf: 960934 bytes, checksum: 7929a9ab50e5d380938fa2dbb08cbd99 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes tratamentos de superfície da cerâmica Y-TZP na resistência de união, durabilidade e discrepância marginal. Para os testes de resistência adesiva, foram obtidos 144 corpos de prova (cp) da cerâmica VITA In-Ceram YZ for InLab (5,25 x 3,75 x 4,5 mm), que foram divididos em 6 grupos (G) (n=24), conforme o tratamento de superfície: G1: sem tratamento (controle); G2: jateamento com partículas de alumínio revestidas por sílica (CoJet®-Sand, 3M ESPE AG) (silicatização); G3: vitrificação 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), condicionamento com ácido fluorídrico (HF) (1 min); G4: vitrificação 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), silicatização; G5: vitrificação 2 (Glaze VITA AKZENT), condicionamento com HF (1 min); G6: vitrificação 2 (Glaze VITA AKZENT), silicatização. Após todos os tratamentos, as superfícies foram silanizadas por 5 min (ESPE-SIL) e a cimentação com Panavia F (Kuraray) foi realizada. Metade dos espécimes de cada tratamento foi ensaiada 24h após cimentação (SECO), a outra metade foi submetida à armazenagem (150 dias) e termociclagem (12.000x) (TC), e então realizado o ensaio de cisalhamento (1 mm/min). G7: G1+TC; G8: G2+TC; G9: G3+TC; G10: G4+TC; G11: G5+TC; G12: G6+TC. Superfícies tratadas foram analisadas por perfilometria óptica 3D para obtenção dos dados de rugosidade (Ra) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (1000x). Análise por energia dispersiva de raio-X (EDS) foi realizada para determinar os elementos químicos presentes na superfície de cada grupo. Para a análise de adaptação marginal foram confeccionadas 60 infraestruturas (adaptadas em um troquel metálico) nas quais foram realizados os mesmos tratamentos de superfície / The aim of this study was to evaluate the effect of different surface treatments of Y-TZP ceramic on bond durability and marginal fit. 144 specimens of VITA In-Ceram YZ for InLab ceramic (5.25 x 3.75 x 4.5 mm) were obtained and divided into 6 groups (n=24) according to the surface treatment: G1: no treatment (control); G2: chairside tribochemical silica coating system (CoJet®-Sand, 3M ESPE AG) (Cojet); G3: vitrification 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), conditioning with hydrofluoric acid (HF) (1 minute); G4: vitrification 1 (Glaze Spray VITA AKZENT), Cojet; G5: vitrification 2 (Glaze VITA AKZENT), conditioning with HF (1 minute); G6: vitification 2 (Glaze VITA AKZENT), Cojet. Then, the ceramic surfaces were silanized and the cementPanavia F (Kuraray) was applied. Half of the specimens from each treatment was tested 24 hours after cementation (DRY), the remaining specimens were stored in distilled water for150 days,thermocycled(12,000x) (AGING) and then the shear test was performed (1mm/minute). Conditioned surfaces were evaluated by 3D optical profilometry in order to obtain roughness data (Ra) and analysed by scan electronic microscopy (SEM) (1000x). Analysis by energy x-ray dispersive (EDS) was performed to determine the chemical elements present in each surface group. For analysis of marginal adaptation 60 crowns were produced (adapted into a metal die) and the same surface treatments were carried out on the internal surface of the crowns. The data were analysed using. The results suggest the vitrification 1 and vitrification 2 groups showed the highest bond strength compared to the control group. The highest marginal discrepancies were observed in the vitrification groups (117.36±29.61 to 105.78±12.23) comparing with the other groups (55.29±8.71 and 55.04±8.55).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-29Bitstream added on 2014-06-13T19:24:35Z : No. of bitstreams: 1 prado_fra_dr_jabo.pdf: 264327 bytes, checksum: dd7379d7711c643e9ed9087d9e75a42d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / objetivo deste estudo foi contribuir para o conhecimento da técnica de criopreservação de embriões in vitro. Oócitos (n=965) foram maturados durante 24h em TCM-199 suplementado com 0,2mM de piruvato, 25 mM de bicarbonato de sódio e 75 mg/ml de gentamicina. Os zigotos foram cultivados em meio SOFm suplementado com 0,5% BSA e FCS 2,5%. Culturas foram realizadas a 38,5°C em 5% de CO2 no ar umidificado, em 100 μl de meio de gotículas recuperado com óleo mineral. No sétimo dia da cultura, os embriões (n = 387) foram marcados e apenas blastocistos excelente a boa qualidade foram criopreservados (10 embriões / palheta 0,25 ml). Os seguintes grupos experimentais foram concebidos, nomeado de acordo com a solução de crioprotetor utilizado: glicerol 1,0 M de etileno glicol em PBS (G); glicerol 1,0 M + 0,3 M de sacarose em PBS (GS); etilenoglicol 1.5 M em PBS (E) e 1,5 M + 0,3 M de sacarose em PBS (ES). Após o descongelamento, os embriões foram re-cultivadas em 100 ml de meio de gotas SOFm a 38,5 º C e 5% de CO2 no ar por 72 h. Os dados demonstraram que a qualidade do embrião, avaliada pelo escore de embriões e número de células embrionárias, parece ser melhor no grupo E e ES. No processo de vitrificação, 300 embriões de excelente qualidade morfológica, Bi e Bl foram vitrificados, e foram sincronizadas 500 receptoras de embriões, divididas em 3 grupos de 150 animais cada grupo. O diagnóstico de gestação nas receptoras após a inovulação dos embriões foram realizados após 42 dias. A taxa de concepção variou entre os grupos, sendo que no grupo I obteve 6 gestações (18,75%) de receptoras que receberam embriões da raça Nelore, 9 gestações (26,47%) de receptoras que receberam embriões da raça Brangus e 12 gestações (35,3%) de receptoras que receberam embriões da raça Brahman... / The aim of this study was to contribute to the knowledge of the technique of cryopreservation of embryos in vitro. Oocytes (n = 965) were matured for 24h in TCM- 199 supplemented with 0.2 mM pyruvate, 25 mM sodium bicarbonate and 75 mg / ml of gentamicin. Zygotes were cultured in medium supplemented with 0.5% SOFm BSA and 2.5% FCS. Cultures were performed at 38.5 ° C in 5% CO2 in humidified air in 100 l of medium droplets recovered with mineral oil. On the seventh day of culture, the embryos (n = 387) were scored and only good quality excellent blastocysts were cryopreserved (10 embryos / straw 0.25 ml). The following experimental groups were designed, named according to the cryoprotectant solution used: glycerol 1.0 M ethylene glycol in PBS (G) 1.0 M glycerol + 0.3 M sucrose in PBS (GS), ethylene glycol 1.5 M PBS (E) and 1.5 M + 0.3 M sucrose in PBS (ES). After thawing, the embryos were re-grown in 100 ml of medium SOFm drops to 38.5 º C and 5% CO2 in air for 72 h. The data demonstrated that embryo quality was evaluated by scoring the number of embryos and embryonic cells, seems to be better in group E and ES. In the process of vitrification, 300 embryos of excellent morphology, Bi and Bl, were vitrified, and 500 were synchronized embryo recipients were divided into 3 groups of 150 animals each group. Pregnancies after embryo transfer in recipient embryos were performed after 42 days. The conception rate varied between the groups, whereas in group I had six pregnancies (18.75%) of recipients that received embryos Nellore, 9 pregnancies (26.47%) of recipients that received embryos of Brangus and 12 pregnancies (35.3%) of recipients that received embryos from Brahman ... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-04-26T14:15:43Z No. of bitstreams: 1 jeansoaresmiranda.pdf: 6014272 bytes, checksum: a6aaf905414159a41b45b4d6a499eb38 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-05-02T00:50:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 jeansoaresmiranda.pdf: 6014272 bytes, checksum: a6aaf905414159a41b45b4d6a499eb38 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T00:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jeansoaresmiranda.pdf: 6014272 bytes, checksum: a6aaf905414159a41b45b4d6a499eb38 (MD5) Previous issue date: 2016-01-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo dessa pesquisa foi avaliar a influência do tempo de condicionamento com ácido fluorídrico a 10%, sobre a resistência de união entre uma cerâmica Y-TZP vitrificada e um cimento resinoso. Blocos pré-sinterizados de cerâmica Y-TZP (IPS e.max® ZirCAD - Ivoclar-Vivadent) foram cortados para obtenção de 40 amostras. Previamente à sinterização, os blocos foram regularizados com lixas d’água de granulação #180, #600 e #1200. Eles foram, então, divididos aleatoriamente em quatro grupos (n=10), sendo um o grupo controle no qual foi realizada a silicatização com Rocatec Soft (RS) e três grupos teste vitrificados com glaze spray (VITA Akzent Plus, Vita Zanhfabrik, Bad Sachingen, Alemanha), com diferentes tempos de condicionamento com ácido fluorídrico a 10% (Condac Porcelana, FMG, Brasil) executado na superfície destinado a adesão: por 20s (GS20s), 60s (GS60s) ou 100s (GS100s). Para cimentação foi utilizado um adesivo universal (Single Bond Universal, 3M ESPE) contendo monômero MDP em sua composição e um cimento resinoso dual (RelyX Ultimate, 3M ESPE). Em cada bloco foram obtidas duas colunas de cimento, totalizando 20 amostras por grupo. Após termociclagem, o teste de cisalhamento foi realizado (EMIC,DL 2000), a resistência de união foi registrada e utilizada para cálculo da resistência adesiva. Além disso, a análise de falha também foi realizada em todas as amostras com um estereomicroscópio (Stemi 2000-C). Uma amostra extra de cada grupo teve metade de sua superfície tratada para obtenção de imagens por perfilometria e microscopia eletrônica de varredura (MEV), além de realização de espectrometria por energia dispersiva (EDS). O teste de Kruskal-Wallis apresentou p valor igual a 0,001 e o teste de Dunn demostrou diferença apenas do grupo RS (22,10Mpa) para os grupos GS (GS20s: 8,10Mpa; GS60s: 10,49; GS100s: 7,53), porém não houve nenhuma diferença dentre os diferentes grupos GS. As imagens de perfilometria e MEV revelaram um padrão irregular de disposição do glaze após o condicionamento com HF 10%. Por meio da perfilometria foi possível aferir a espessura da camada do glaze remanescente (GS20s: 5 ± 1μm; GS60s: 4 ± 1μm; GS100s: 3 ± 1μm). Todas as falhas foram adesivas. E foi possível concluir que a resistência de união entre uma cerâmica Y-TZP vitrificada e um cimento resinoso com MDP não é influenciada por diferentes tempos de condicionamento com ácido fluorídrico. / The purpose of this research is to evaluate the influence of conditioning time with hydrofluoric acid on the bond strength of a Y-TZP glazed ceramics and a resin cement. Ceramic pre-sintered Y-TZP blocks (IPS e.max® ZirCAD - Ivoclar Vivadent-) were cut to obtain 40 samples. Prior to sintering the blocks were smoothed with sandpaper water granulation #180, #600 and #1200. They were then randomly divided into four groups (n = 10), one control group was performed silicatization with Rocatec Soft (RS) and three vitrified test groups with different acid conditioning times surface: GS20s, GS60s and GS100s (application hydrofluoric acid for 20, 60 and 100 seconds respectively). For cementation was used a universal adhesive containing the MDP monomer in its composition (Single Bond Universal, 3M ESPE) and a dual resin cement (RelyX Ultimate, 3M ESPE). In each block was obtained two cement columns, totaling 20 samples per group. After thermocycling, the shear test was performed (EMIC, DL 2000), the maximum force to fracture was recorded and used to calculate the bond strength. Furthermore, the failure analysis was also performed with a esteriomicroscópio (Stemi 2000-C). An extra sample of each group had half of its surface treated to obtain images by profilometry and scanning electron microscopy (SEM), as well as conducting energy dispersive spectrometry (EDS). The Kruskal-Wallis test showed ap value of 0.001 and the Dunn test demonstrated differences only the RS group (22,10Mpa) for GS groups (GS20s: 8,10Mpa; GS60s: 10.49; GS100s: 7.53 ), but there was no difference among different GS groups. The profilometry and SEM images revealed an irregular pattern of glaze layout after conditioning with HF 10%. By profilometry it was possible to measure the thickness of the remaining glaze layer (GS20s: 5 ± 1μm; GS60s: 4 ± 1μm; GS100s: 3 ± 1μm). All failures were adhesive. And it concluded that the bond strength between Y-TZP glazed pottery and a resin cement with MDP is not influenced by different conditioning times with hydrofluoric acid.

Introdução: A criopreservação de fragmentos de tecido ovariano previamente ao início da terapia oncológica e posterior reimplante do tecido ovariano tem sido sugerido como promissora alternativa para preservação de fertilidade. Neste sentido, um novo sistema de vitrificação denominado Ovarian Tissue Cryosystem (OTC), vem sendo desenvolvido visando aperfeiçoar a conservação do tecido congelado. Objetivo: Avaliar o impacto da criopreservação sobre a viabilidade do tecido ovariano murino vitrificado por três diferentes protocolos, dentre eles o sistema OTC. E avaliar o impacto do reimplante heterotópico do tecido ovariano murino fresco e descongelado pelos mesmos protocolos, sobre a sua viabilidade. Metodologia: Este é um estudo experimental onde foram utilizados tecido ovariano de camundongos C57BL/6. Três protocolos de vitrificação foram testados simultaneamente: protocolo murino (PrM); protocolo humano (PrH); protocolo OTC (PrOTC) em comparação ao grupo frescos (GF). As amostras foram analisadas imediatamente após o descongelamento (Etapa 1) ou após 15 ou 30 dias de reimplante retroauricular (Etapa 2). Para análise da viabilidade utilizou-se imunohistoquímica para proliferação celular (Ki-67), dano celular (NF-kB) e dano oxidativo (4-HNE e Nitrotirosina). Os resultados foram obtidos utilizando-se o teste Q-quadrado para verificar a distribuição entre os grupos e a imunomarcação (% de folículos marcados), sendo que o nível de significância adotado foi p<0,05. Resultados: Etapa 1: Os grupos PrOTC e PrM apresentaram melhor desempenho em relação à proliferação celular. Entretanto, estes mesmos protocolos apresentaram graus variados de dano oxidativo quando analisados pela imunomarcação de nitrotirosina, aonde o PrOTC teve maior marcação do que o GF, portanto maior dano, e o PrM teve maior marcação em relação ao HNE em comparação com os demais protocolos. Não houve nenhuma diferença na marcação do NF-kB entre os grupos descongelados. Etapa 2: O reimplante em si não pareceu comprometer significativamente o tecido, uma vez que as amostras GF e GF reimplantado com 15 e 30 dias tiveram desempenho semelhante em relação à todos os marcadores, com exceção do GF 30 dias que mostrou algum grau de dano oxidativo pela nitrotirosina (p<0,05). E ao se avaliar a somatória de efeitos entre congelamento e reimplante entre os diferentes protocolos apenas o PrH evidenciou dano tecidual imediatamente após o descongelamento e dano progressivo após o reimplante. Conclusão: Os PrM e PrOTC foram semelhantes ao GF na conservação da amostra durante o processo de criopreservação, sendo que o PrOTC causou algum grau de dano oxidativo. O reimplante retroauricular do tecido não impactou sobre a sua viabilidade do mesmo nem no GF e nem nos PrM e PrOTC. O PrH mostrou-se inadequado para a conservação de tecido ovariano murino. / Introduction: The Cryopreservation of fragments of ovarian tissue prior to initiation of oncotherapy and subsequent reimplantation of ovarian tissue has been suggested as promising alternative for fertility preservation. In this sense, a new system of vitrification called Ovarian Tissue Cryosystem (OTC), has been developed in order to improve the frozen ovarian tissue conservation. Objective: To compare the viability of murine ovarian tissue vitrified by three different vitrification protocols and to verify the efficiency of the Ovarian Tissue Cryosystem (OTC). Methods: This is an experimental study using ovarian tissue of C57BL/6 mice. Three vitrification protocols were tested simultaneously: Murine protocol (PrM); Human Protocol (PrH) and Protocol OTC (PrOTC); in comparison to Fresh Tissue (GF). Samples were analyzed immediately after thawing (Step 1) or after 15 or 30 days of retroauricular reimplantation (Step 2). For viability analysis immunohistochemistry for cell proliferation (Ki-67), cell damage (NF-kB) and oxidative damage (4-HNE and Nitrotyrosine) was used. The results were obtained using the Q-square test to analyze immunostaining counted as % of labeled follicles and the level of significance was set at p <0.05. Results: Step 1: The PrOTC and PrM presented the best performance in relation to cell proliferation. However, these same protocols presented varying degrees of oxidative damage when analyzed by the nitrotyrosine immunolabeling, where PrOTC had higher marking than GF, thus greater damage, and PrM had a greater marking in relation to HNE compared to the other protocols. There was no difference in the labeling of NF-kB between the thawed groups. Step 2: The reimplantation procedure did not appear to significantly impair the ovarian tissue quality once day 15 and 30 after fresh tissue engrafment of was similar for all markers except for nitrotyrosine after 30 days (p<0,05). And when assessing the sum of effects of freezing and reimplantation among the 3 different protocols only PrH showed tissue damage immediately after thawing and progressive damage after reimplantation. Conclusion: The PrM and PrOTC were similar to the GF in the preservation of the sample during the cryopreservation process, and PrOTC caused some degree of oxidative damage. Retroauricular reimplantation of the tissue did not impact on its viability in either the GF or PrM and PrOTC. PrH was found to be unsuitable for the cryopreservation of murine ovarian tissue.

O presente trabalho foi composto de dois estudos distintos. O Estudo I, com um foco conservacionista, teve como objetivo a avaliação e comparação de diferentes métodos de criopreservação de sêmen de bugio-preto (Alouatta caraya). Para tanto, o estudo foi dividido em dois experimentos: Experimento I composto de dois ensaios no primeiro ensaio foram comparados dois diluidores comerciais BotuBOV e Test-yolk buffer (TYB) e no segundo ensaio foram comparados dois métodos de criopreservação de sêmen congelação lenta e vitrificação; Experimento II avaliação dos efeitos da adição de DHA e de Trolox (análogo da vitamina E) ao diluidor para criopreservação de sêmen. O diluidor TYB apresentou melhores resultados quando comparados ao BotuBOV. A congelação lenta apresentou melhores resultados quando comparada à vitrificação. Não houve diferença entre o diluidor controle e os diluidores com Trolox, DHA ou combinação dos dois (DHAT), com exceção da integridade de acrossoma, que foi significativamente menor para o diluidor DHAT. Conclui-se que são necessários mais estudos, com utilização de outras doses de DHA e Trolox, além de outros antioxidantes. O Estudo II, com foco em pesquisa biomédica, teve como objetivo a criopreservação de sêmen de macaco-rhesus (Macaca mulata) e avaliação da qualidade pós-descongelação por meio de fecundação in vitro (FIV). Para tanto, o estudo foi dividido em três experimentos: Experimento I avaliação e comparação de dois métodos de criopreservação de sêmen congelação lenta e vitrificação; Experimento II avaliação e comparação de quatro métodos de preparação do sêmen pós-descongelação lavagem simples (LS), swim-up (SU), separação por gradiente de densidade (SGD) e filtragem em lã de vidro (FLV); Experimento III avaliação da qualidade seminal pós-descongelação por meio de FIV. A congelação lenta apresentou melhores resultados que a vitrificação (p<0,05). LS apresentou os melhores resultados, seguido por SGD e SU, enquanto FLV apresentou os piores resultados. LS e SGD foram utilizados para avaliação da qualidade seminal por meio de FIV, utilizando sêmen fresco como controle. As taxas de fecundação (média±EPM%) para oócitos MI inseminados com sêmen fresco (43.5±16.4) foram significativamente maiores (p<0,05) que LS (2.0±2.0), mas não diferiram de SGD (25.1±14.2). Não houve diferença na taxa de blastocistos (média±EPM%) entre os tratamentos (variação de 0 a 11.9±7.9). As taxas de fecundação para oócitos MII inseminados com sêmen fresco (41.4±3.6) também foram significativamente maiores que SGD e LS (18.4±6.9 e 12.7±7.7, respectivamente), assim como a taxa de blastocistos (64.7±13.6; 4.7±4.7; 30.9±13.8, respectivamente). Conclui-se que, espermatozoides criopreservados foram capazes de fertilizar oócitos e os embriões atingiram o estágio de blastocisto. A SGD selecionou espermatozoides pós-descongelação de melhor qualidade para FIV em macacos-rhesus, quando comparada à LS / This work was divided in two studies. The objective of Study I was to test and compare different cryopreservation methods for sperm from black-and-gold howler monkeys (Alouatta caraya), with a focus on species conservation. The study was divided in two experiments. Experiment I composed of two trials the first trial compared two commercial extenders BotuBOV and Test-yolk buffer (TYB), and the second trial compared two cryopreservation methods slow freezing and vitrification; Experiment II evaluation of the effects of DHA and Trolox (vitamin E analog) as additives to the freezing extender. TYB had better results when compared to BotuBOV. Slow freezing had better results when compared to vitrification. There was no difference between control extender (TYB) and extender containing Trolox, DHA or a combination of both (DHAT), except for acrosome integrity, which was significantly lower for DHAT. In conclusion, more studies are necessary, using other doses of DHA and Trolox, as well as other antioxidants. The objective of Study II was to assess the quality of frozen-thawed sperm from rhesus macaques (Macaca mulatta) by in vitro fertilization (IVF). The study was divided in three experiments. Experiment I evaluation and comparison of two cryopreservation methods slow freezing and vitrification; Experiment II evaluation and comparison of four preparation methods for frozen-thawed sperm simple wash (SW), swim-up (SU), density gradient centrifugation (DGC), and glass wool filtration (GWF); and Experiment III evaluation of frozen-thawed sperm quality by IVF. Slow freezing had better results when compared to vitrification (p<0,05). SW had better results, followed by DGC and SU, while GWF had the worse results. SW and DGC were further evaluated by IVF. Fertilization rates (mean±SEM%) with MI oocytes using fresh sperm were significantly higher (43.5±16.4) than with SW (2.0±2.0) and did not differ from DGC (25.1±14.2). There was no difference in blastocyst rates between treatments (range 0 to 11.9±7.9). Fertilization rates with MII ova were also significantly higher with fresh sperm (41.4±3.6) than DGC and SW (18.4±6.9 and 12.7±7.7, respectively), and more blastocysts developed from MIIs fertilized with fresh sperm (64.7±13.6) than SW and DGC (4.7±4.7 and 30.9±13.8, respectively). In conclusion, frozen-thawed sperm were able to fertilize oocytes and embryos reached the blastocyst stage. DGC yielded better frozen-thawed sperm for IVF in rhesus macaques, when compared with SW