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Viabilidade e fertilidade de sêmen ovino criopreservado com glicerol e dimetilacetamida acrescido de trealose EDTA

Bittencourt, Rodrigo Freitas [UNESP] 03 August 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-03Bitstream added on 2014-06-13T19:43:41Z : No. of bitstreams: 1 bittencourt_rf_dr_botfmvz.pdf: 2402327 bytes, checksum: fd3294b446a90eae988a29bec85c0499 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia e o efeito dos crioprotetores glicerol (GLI) e dimetilacetamida (DMA) em duas concentrações (3 e 6%), em meio diluidor com e sem trealose (TRE), associada ou não ao EDTA, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Para tanto, foram utilizadas quarenta e nove amostras de sêmen de 20 carneiros da raça Santa Inês. Os estudos foram divididos em três experimentos. O primeiro comparou as duas concentrações de GLI em meio com ou sem a TRE, associada ou não ao EDTA. O segundo experimento avaliou a DMA em duas concentrações (3 e 6%) em meio com ou sem TRE, associada ou não ao EDTA. O terceiro experimento testou os dois diluidores com os melhores resultados in vitro no experimento 1 e os dois do experimento 2. Todos os experimentos tiveram os parâmetros da cinética espermática avaliados subjetivamente e pela análise computadorizada (CASA). A análise da viabilidade espermática foi realizada através da associação das sondas fluorescentes iodeto de proprídio, JC-1 e FITC-PSA. Para a análise estatística das características avaliadas, foi empregado o programa estatístico (SAS), versão 5.0 (1996). A DMA a 6% apresentou toxicidade e a 3% demonstrou baixo efeito crioprotetor sobre o espermatozóide ovino. A adição da TRE promoveu efeito negativo sobre a cinética espermática, entretanto melhorou os níveis de integridade das membranas espermáticas pós-descongelação. O diluidor com GLI a 6% sozinho foi o protocolo mais eficaz para a manutenção da integridade espermática, entretanto a taxa de prenhez das fêmeas não diferiu entre os grupos / The objective of this study was to evaluate the efficacy and the effect of the cryoprotectants glycerol (GLY) and dimethyl acetamide (DMA) in two grades (3 and 6%) in extender with and without trehalose (TRE) extender associated or not with EDTA, on the post-thawing sperm viability. For that, they were used forty nine semen samples of 20 rams of the Santa Inês breed. The studies were divided into three experiments. The first one compared the two GLY grades (3 and 6%) in extender with or without TRE, associated or not with EDTA. The second experiment evaluated the DMA at two concentrations (3 e 6%) in medium with or without TRE, associated or not with EDTA. The third one tested the two extenders with the best in vitro results in experiment 1 and the two from experiment 2. All experiments had the kinetics sperm parameters evaluated subjectively and by computer analysis (CASA). The sperm viability evaluation was performed through the multiple sperm parameter staining with propidium iodide, JC-1 and FITC-PSA. For the statistical analysis of the characteristics evaluated was used the statistical package (SAS), version 5.0 (1996). The DMA at 6% was toxic and at 3% had a poor cryoprotective effect for ram semen. The addition of TRE promoted negative effect on sperm kinetics, entertain improved levels of sperm membranes integrity post-thawing. The extender with GLI at 6% alone was the best protocol for maintaining the sperm integrity, however the pregnancy rates of the ewes did not present difference (P>0.05) among the groups
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Criopreservação de sêmen humano : comparação entre método de congelação e tipos de envase / Criopreservação of semen human being : comparison between method of congelation and types of plants

Cavalcante, Marcelo Borges January 2004 (has links)
CAVALCANTE, Marcelo Borges. Criopreservação de sêmen humano : comparação entre métodos de congelação e tipos de envase. 2004. 101 f. Dissertação (Mestrado em Tocoginecologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-24T12:10:10Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_mbcavalcante.pdf: 637772 bytes, checksum: ace79c400c029e261085272b9318a825 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-24T12:11:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_mbcavalcante.pdf: 637772 bytes, checksum: ace79c400c029e261085272b9318a825 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-24T12:11:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_mbcavalcante.pdf: 637772 bytes, checksum: ace79c400c029e261085272b9318a825 (MD5) Previous issue date: 2004 / This research has as objective determines the best freezing method and storage of human semen, when compared the fast method with the slow method and the storage in 0,25ml straws with cryotubes of 2ml, using as variables the morphology and motility of the spermatozoa before and after the cryopreservation. It is an experimental study, laboratorial technique validation. It was developed in the Assisted Reproduction Center of Ceará. Eighteen semen samples from eighteen men were analyzed. The samples were submitted to the analysis of the morphology and motility previous the cryopreservation. It was still determined a spermatozoa motility curve in the first three hours. TEST-YOLK was used as cryoprotective media. After having added the TEST-YOLK media, the semen was divided in same parts and storage in cryotubes and straws. Half of the cryotubes and of the straws was cryopreserved by the fast method (RT and RP, respectively) and the other half by the slow method (LT and LP, respectively). The samples were thawed and analyzed the morphologies, as well as the motilities soon after the thawed and every hour for three hours. Statistical analysis was done by the SPSS program - Windows version 11.0.0. Motility of spermatozoa decrease after the cryopreservation, initial motility was 58,1% and motilities in the different treatments were 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) and 19,2% (RP). There was a significant decrease of the normal morphology after the cryopreservation, in relation to the initial morphology, but difference was not observed among the methods (RP=12,8%, RT=12,6%, LP=12,6% e LT=12,4%). The motility of LT method was closer than that obtained in the fresh semen. The method LT showed the best recovery of motile cells after freezing and thawing. There was not difference among the methods when appraised the morphology. Key-Word: Cryopreservation; Semen preservation; Spermatozoa; Reproduction. / O presente trabalho tem como objetivo determinar o melhor método de congelação e envase de sêmen humano, quando comparado o método rápido com o lento e o envase em palhetas de 0,25ml com criotubos de 2ml, utilizando como variáveis a morfologia e motilidade dos espermatozóides antes e após a criopreservação. Trata-se de um estudo experimental, de validação de técnica laboratorial. Foi desenvolvido no Centro de Reprodução Assistida do Ceará. Foram analisadas dezoito amostras de sêmen de dezoito voluntários. As amostras foram submetidas à análise da morfologia e motilidade espermática prévia à criopreservação. Foi determinada ainda uma curva de motilidade espermática nas primeiras três horas. O meio TEST-YOLK foi utilizado como crioprotetor. Depois de adicionado o crioprotetor, o sêmen foi dividido em partes iguais e envasado em criotubos e palhetas. Metade dos criotubos e das palhetas foi submetida a criopreservação pelo método rápido (RT e RP, respectivamente) e a outra metade pelo método lento (LT e LP, respectivamente). Em seguida, as amostras foram descongeladas e determinadas as morfologias, bem como as motilidades logo após a descongelação e a cada hora durante três horas. Análise estatística foi realizada pelo programa de SPSS for Windows versão 11.0.0. Houve uma queda, estatisticamente significante, da motilidade após a criopreservação, motilidade inicial de 58,1% e motilidades nos diferentes tratamentos de 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) e 19,2% (RP). Também houve uma diminuição significante da morfologia normal após a criopreservação, em relação à morfologia inicial (14,2%), mas não foi observada diferença entre os métodos (12,8%, 12,6%, 12,6% e 12,4%; RP, RT, LP e LT, respectivamente). O método LT foi o que obteve uma curva de motilidade espermática mais próxima da observada no sêmen in natura. Conclui-se que o método LT foi o que menos afetou a motilidade espermática e que, apesar de ter sido observada uma piora significativa da morfologia espermática após a criopreservação, não houve diferença entre os métodos. Palavras-chaves: Criopreservação; Preservação do Sêmen; Espermatozóide; Reprodução
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Viabilidade e fertilidade de sêmen ovino criopreservado com glicerol e dimetilacetamida acrescido de trealose EDTA /

Bittencourt, Rodrigo Freitas. January 2009 (has links)
Orientador: Eunice Oba / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Rubens Paes Arruda / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia e o efeito dos crioprotetores glicerol (GLI) e dimetilacetamida (DMA) em duas concentrações (3 e 6%), em meio diluidor com e sem trealose (TRE), associada ou não ao EDTA, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Para tanto, foram utilizadas quarenta e nove amostras de sêmen de 20 carneiros da raça Santa Inês. Os estudos foram divididos em três experimentos. O primeiro comparou as duas concentrações de GLI em meio com ou sem a TRE, associada ou não ao EDTA. O segundo experimento avaliou a DMA em duas concentrações (3 e 6%) em meio com ou sem TRE, associada ou não ao EDTA. O terceiro experimento testou os dois diluidores com os melhores resultados in vitro no experimento 1 e os dois do experimento 2. Todos os experimentos tiveram os parâmetros da cinética espermática avaliados subjetivamente e pela análise computadorizada (CASA). A análise da viabilidade espermática foi realizada através da associação das sondas fluorescentes iodeto de proprídio, JC-1 e FITC-PSA. Para a análise estatística das características avaliadas, foi empregado o programa estatístico (SAS), versão 5.0 (1996). A DMA a 6% apresentou toxicidade e a 3% demonstrou baixo efeito crioprotetor sobre o espermatozóide ovino. A adição da TRE promoveu efeito negativo sobre a cinética espermática, entretanto melhorou os níveis de integridade das membranas espermáticas pós-descongelação. O diluidor com GLI a 6% sozinho foi o protocolo mais eficaz para a manutenção da integridade espermática, entretanto a taxa de prenhez das fêmeas não diferiu entre os grupos / Abstract: The objective of this study was to evaluate the efficacy and the effect of the cryoprotectants glycerol (GLY) and dimethyl acetamide (DMA) in two grades (3 and 6%) in extender with and without trehalose (TRE) extender associated or not with EDTA, on the post-thawing sperm viability. For that, they were used forty nine semen samples of 20 rams of the Santa Inês breed. The studies were divided into three experiments. The first one compared the two GLY grades (3 and 6%) in extender with or without TRE, associated or not with EDTA. The second experiment evaluated the DMA at two concentrations (3 e 6%) in medium with or without TRE, associated or not with EDTA. The third one tested the two extenders with the best in vitro results in experiment 1 and the two from experiment 2. All experiments had the kinetics sperm parameters evaluated subjectively and by computer analysis (CASA). The sperm viability evaluation was performed through the multiple sperm parameter staining with propidium iodide, JC-1 and FITC-PSA. For the statistical analysis of the characteristics evaluated was used the statistical package (SAS), version 5.0 (1996). The DMA at 6% was toxic and at 3% had a poor cryoprotective effect for ram semen. The addition of TRE promoted negative effect on sperm kinetics, entertain improved levels of sperm membranes integrity post-thawing. The extender with GLI at 6% alone was the best protocol for maintaining the sperm integrity, however the pregnancy rates of the ewes did not present difference (P>0.05) among the groups / Doutor
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Efeito da centrifugação e filtragem do sêmen bovino sobre a criopreservação espermática /

Campanholi, Suzane Peres. January 2016 (has links)
Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Fabio Morato Monteiro / Banca: César Roberto Esper / Banca: Marcelo Roncoletta / Resumo: O plasma seminal já foi descrito como benéfico e ao mesmo tempo prejudicial aos espermatozoides e isto está relacionado com o tempo de contato entre eles. A criopreservação do sêmen em touros pode ser prejudicada por exposição contínua dos espermatozoides ao plasma seminal (PS) e a aplicação de métodos para sua remoção pode aumentar a qualidade dos espermatozoides recuperados pós-descongelação, melhorando os resultados de biotécnicas que utilizam sêmen criopreservado. Pelo fato da centrifugação causar muitos danos aos espermatozoides, a filtragem com Sperm Filter® apresenta-se como um novo método de remoção do PS que almeja melhores resultados, porém não foi encontrado relato da sua aplicação em bovinos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos métodos de centrifugação e filtragem com Sperm Filter® sobre a criopreservação do sêmen bovino. Para isso, o sêmen de 38 touros Nelore foi colhido por eletroejaculação. Após a colheita, o sêmen foi fracionado em três alíquotas iguais para divisão em três grupos: controle (N), em que o sêmen foi diluído com PS; centrifugação (C), em que o PS foi removido por centrifugação a 600 X g por 10 minutos; e filtragem (F), em que o PS foi removido por filtragem com Sperm Filter®. As amostras foram criopreservadas, e pós-descongelação foram avaliados a cinética espermática, a integridade das membranas plasmática e acrossomal, o potencial mitocondrial, o estresse oxidativo e a capacidade fecundante através da produção in vitr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Seminal plasma has been described as beneficial and harmful to the spermatozoa and this is related to the contact time between them. Cryopreservation of semen from bulls can be undermined by continuous exposure of sperm to the seminal plasma (SP) and the application of methods for removal can increase the quality of post-thaw sperm recovered, improving fertilization. Centrifugation cause a lot of damage to sperm and filtering with Sperm Filter® is a new SP removal method that aims to better results, but has not yet been applied in bull. The aim of this study was to evaluate the effect of the methods of centrifugation and filtering with Sperm Filter® on cryopreservation of bovine semen. For this, semen of 38 Nelore bulls was collected by electroejaculation. Semen was fractioned into three equal aliquots for division into three groups: control (N), wherein the semen was diluted with SP; centrifugation (C), in which the SP was removed by centrifugation at 600 X g for 10 minutes; and filtration (F), in which the SP was removed by filtration with Sperm Filter®. Samples were cryopreserved and was evaluated after thawing sperm kinetics, the integrity of plasma and acrosomal membranes, mitochondrial potential, oxidative stress and the fertilizing capacity by in vitro embryo production (IVP). The kinetics, higher values of the path velocity (P = 0.0005) and progressive speed (P = <0.0001) were observed in the groups C and F and the beat frequency parameters, straightness and linearity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Criopreservação e fertilidade de espermatozoides do ejaculado e recuperados da cauda do epidídimo de garanhões subférteis

Monteiro, Gabriel Augusto [UNESP] 02 May 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-02Bitstream added on 2014-08-13T18:01:15Z : No. of bitstreams: 1 000732142.pdf: 1071161 bytes, checksum: 2cb970afdbdc6d295fe573aeb86e30a8 (MD5) / Apesar dos benefícios proporcionados pelo plasma seminal durante a cobertura, quando biotecnologias são utilizadas, como a inseminação artificial, sua função é questionável, visto que trabalhos utilizando espermatozoides da cauda do epidídimo acrescido ou não do plasma seminal não apresentaram diferença nas taxas de concepção. Além disso, estudos relataram efeito deletério das secreções das glândulas anexas sobre a viabilidade espermática e taxa de concepção, principalmente em garanhões com baixa qualidade seminal. Neste sentido, o objetivo do presente estudo é: 1) comparar os parâmetros de cinética espermática, viabilidade estrutural e fertilidade dos espermatozoides recuperados do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis; 2) avaliar diferenças na composição eletrolítica do plasma seminal de animais com alta e baixa fertilidade. 3) comparar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e viabilidade dos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis. As avaliações das amostras seminais consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) e nas análises de citometria de fluxo da integridade da membrana plasmática, da integridade acrossomal, da peroxidação das membranas espermáticas, da fragmentação do DNA, da capacitação espermática, da translocação de fosfatidilserina da membrana e da ativação de caspase. Os espermatozoides do epidídimo após descongelação apresentaram superioridade nos parâmetros de cinética e viabilidade espermática, além de melhor fertilidade, demonstrando que estes espermatozoides são mais resistentes ao processo de congelação quando comparado aos espermatozoides do ejaculado. O plasma seminal de garanhões subférteis apresentou maiores concentrações de sódio ... / Despite the benefits provided by seminal plasma during natural cover when biotechnology are used as artificial insemination, its function is questionable, since studies using spermatozoa from cauda epididymis with or without the addition of seminal plasma showed no difference in conception rates. Furthermore, studies have reported deleterious effects of secretions from accessory glands on sperm viability and conception rate, especially in stallions with poor semen quality. Thus the aims of this study were: 1) compare the kinetic parameters, structural viability and fertility of sperm recovered from ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. 2) evaluate differences in electrolyte composition in the seminal plasma of animals with high and low fertility. 3) compare the effect of seminal plasma addition from stallions with high and low fertility on freezability and viability of sperm from the ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. The assessment of each samples was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) and flow cytometry analyses of plasma membrane integrity, acrosome integrity, peroxidation of sperm membranes, DNA fragmentation index, degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface and caspase activity. The epididymal sperm after thawing showed superiority in kinetic parameters and sperm viability, as well as better fertility, demonstrating that these spermatozoa are more resistant to freezing process when compared to sperm from the ejaculate. The seminal plasma of subfertile stallions has higher sodium concentrations in the seminal plasma than fertile stallions, what makes this finding a possible way to explain the deleterious effect of seminal plasma in these animals. Moreover, it was found that this deleterious effect is dose-dependent since the addition of 20% of seminal plasma from fertile and ...
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Comparação entre dois métodos de remoção de plasma seminal na criopreservação de sêmen de búfalos (Bubalus bubalis) /

Albuquerque, Rodrigo dos Santos. January 2016 (has links)
Orientador: Lindsay Unno Gimenes / Coorientador: Fabio Morato Monteiro / Coorientador: Moyses dos Santos Miranda / Coorientador: Rinaldo Batista Viana / Banca: Marcílio Nichi / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: A criopreservação provoca injúrias aos espermatozoides e necessita de métodos que minimizem esses danos. Embora seja bastante discutida, a remoção do plasma seminal tornou-se uma alternativa para melhorar a qualidade e viabilidade espermática após a congelação e vem sendo utilizada em outras espécies na tentativa de obter bons resultados. O objetivo deste estudo foi comparar a remoção do plasma seminal de bubalinos tanto por filtragem (SpermFilter®) quanto por centrifugação sobre a qualidade do sêmen descongelado de búfalos. Foram utilizados sete touros da raça Murrah, os quais foram submetidos à colheita de sêmen por vagina artificial uma vez por semana. Os ejaculados foram diluídos com Botu-Bov® e fracionados em alíquotas para confrontar três técnicas antes da congelação: grupo C (Criopreservação convencional com plasma seminal), grupo CE (Criopreservação removendo o plasma seminal por centrifugação) e grupo F (Criopreservação removendo o plasma seminal por filtragem). O sêmen fresco foi analisado quanto ao volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), turbilhonamento, motilidade progressiva, vigor e morfologia espermática. No sêmen descongelado, foram avaliados a cinética espermática pelo CASA, a integridade de membrana plasmática, acrossoma, potencial de membrana mitocondrial e quantificação de EROs por citometria de fluxo e, adicionalmente, foi estimado o grau de peroxidação lipídica pela técnica de TBARS. Os resultados revelam que a remoção de plasma seminal ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryopreservation promotes injury to sperm and methods to minimize such damage are necessary. Although much discussed, removal of seminal plasma that has been successfully used in other species has become an alternative for improving sperm quality and viability after freezing. The aim of the present study was compare to removal seminal plasma in buffalo both by filtering (SpermFilter®) and by centrifugation on the quality frozen thawed buffalo semen. For this purpose, semen of seven Murrah buffalo-bulls, which were submitted to semen collection by artificial vagina once a week. The samples were diluted with Botu-Bov® and were fractionated in aliquots to confront three techniques before freezing: C group (conventional cryopreservation with seminal plasma), CE group (cryopreservation removing the seminal plasma centrifuge) F group (Cryopreservation removing the seminal plasma with Sperm Filter®). Fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), gross motility, progressive motility, vigor and sperm morphology. In the thawed sperm, sperm kinetics was evaluated by CASA, plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and estimation of the levels of reactive oxygen species were assigned by flow cytometry and was estimated degree of lipid peroxidation by TBARS technique. The results show that the removal seminal plasma did not improve sperm kinetics, mitochondrial membrane potential and does not modify the degree of l... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Congelação de células espermáticas provenientes de epidídimo de gatos domésticos contendo antioxidante no meio diluidor

Macente, Beatrice Ingrid [UNESP] 27 February 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-04-09T12:48:20Z : No. of bitstreams: 1 000815802.pdf: 379971 bytes, checksum: 5c1eebb69ace1989d5a3aab6dcace168 (MD5) / Este estudo foi conduzido com o objetivo de o uso do meio diluente Botu-crio associado a vitamina E, em diferentes concentrações, que se demonstrem efetivas para a criopreservação de sêmen obtido de recuperado epididimário em felinos domésticos. Cinquenta e quatro gatos domésticos foram utilizados no experimento após serem submetidos à orquiectomia eletiva e os espermatozóides obtidos diretamente da cauda e ducto deferente do epidídimo. Foram constituídos 18 “pools”, com o material de três animais cada e estes, divididos em quatro grupos experimentais. No grupo controle (G0) o sêmen foi congelado com o diluente Botu-Crio®. Nos grupos G 0,3, G 0,6 e G 0,9, ao diluente Botu-Crio® foi acrescido vitamina E em três concentrações, 0,3, 0,6 e 0,9mM, respectivamente. Para cada grupo, as amostras de sêmen fresco foram inicialmente avaliadas quanto à motilidade, vigor, morfologia supravital e teste hiposmótico, para verificar a qualidade mínima exigida para a congelação (motilidade ≥70% e vigor ≥3). Os mesmos parâmetros foram reavaliados após a descongelação também para o TBARS. Na avaliação da motilidade e vigor, não foi observado diferença estatística entre o grupo controle e as concentrações de vitamina E. Nos testes supravital, hiposmótico, morfológico e teste TBARS, também não houve significância entre as três diferentes concentrações de vitamina E e o grupo controle. Pode-se concluir que as três concentrações de vitamina E, não ofereceram proteção antioxidante ao recuperado de epidídimo de felinos domésticos / This study was conducted with the objective of using the medium Botu-crio®, associated vitamin E, at different concentrations, which demonstrate effective for cryopreservation of epididymal semen obtained recovered from domestic cats. Fifty-four domestic cats were used in the experiment after undergoing elective orchiectomy and sperm obtained directly from the tail of the epididymis and vas deferens. 18 pools were made with the material of three animals each and these were divided into four experimental groups. In the control group (G0) semen was frozen with Botu-crio®. In the groups G 0.3, G 0.6 to G 0.9, the diluent was added at three concentrations of vitamina E, 0.3, 0.6 and 0.9 mM, respectively. For each group, the fresh semen samples were initially evaluated for motility, viability, morphology and supravital and hypoosmotic test to verify minimum quality required for freezing (≥ 70 % motility and vigor ≥ 3). The same parameters were reassessed after thawing also for TBARS. In the evaluation of motility and vigor, no statistical difference was observed between the control group and the concentrations of vitamin E. In supravital tests, hyposmotic, morphological and TBARS assay, there was no significance between the different concentrations of vitamin E and the control group. It can be concluded that the three concentrations of vitamin E, antioxidant protection not offered recovered from epididymis of domestic cats
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Parâmetros seminais, ultraestruturais, criopreservação e androgênese de espécies do gênero Brycon ameaçadas de extinção

Faustino, Francine [UNESP] 26 February 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-08-27T15:57:15Z : No. of bitstreams: 1 000777559.pdf: 3234476 bytes, checksum: cc41e2672688abab324484d35dd5bb14 (MD5) / A Tese de Doutorado foi estruturada em três capítulos, além da “Introdução Geral”, que abrange uma revisão bibliográfica das espécies em estudo e dos temas abordados, e das “Considerações Finais”. Os três capítulos darão origem a artigos científicos em revistas indexadas. O primeiro artigo (Capítulo I) descreve os parâmetros seminais e a ultraestrutura dos espermatozoides de Brycon vermelha, “vermelha” (Characiformes, Characidae). O sêmen da B. vermelha possuiu consistência viscosa, e concentração espermática média de 4,34 ± 0,75x1010 espermatozoides.mL-1. O tempo de motilidade espermática, quando ativado com água destilada, foi curto, sendo necessários 46,48 ± 0,07 segundos para perda da motilidade de 100% dos espermatozoides. A análise dos espermatozoides por MEV revelou três regiões distintas: cabeça, peça intermediária e flagelo, sendo cada região caracterizada detalhadamente em MET. Tais características sugerem que os espermatozoides de B. vermelha apresentam características ancestrais próprias de peixes com fecundação externa classificando-os como “espermatozoides aquáticos uniflagelados anacrossomais”, ou seja, aquasperm do Tipo I. Estas informações são as primeiras em relação ao sêmen e espermatozoides de B. vermelha, podendo ser uma referência para futuros estudos, embasando especialmente pesquisas que adotem biotécnicas, como a criopreservação e androgênese. O segundo artigo (Capítulo II) descreve, ultraestruturalmente, as alterações dos espermatozoides da Brycon orbignyanus, “piracanjuba” (Characiformes, Characidae) durante o processo de criopreservação. O exame ultraestrutural dos espermatozoides descongelados criopreservados em soluções contendo DMSO, metilglicol e metanol, em três tempos de armazenamento (1 dia, 1 mês e 1 ano), revelou a presença de alterações no espermatozoide, variando desde ... / The doctoral thesis consisted of three main chapters besides the “General Introduction”, which includes a bibliographic review of the species studied and the topics discussed, and the “Final Remarks”. Scientific research articles will be published from the data of the three chapters in the scientific journals listed in the index. The first scientific article (Chapter I) describes the seminal parameters and the spermatozoa structure of Brycon vermelha, “vermelha” (Characiformes, Characidae). The semen of the Brycon vermelha is viscous and contains, in average, 4.34 ± 0.75x1010 spermatozoa.mL-1. Spermatozoa motility was of short duration when activated with distilled water, 46.48 ± 0.07 seconds until 100% of spermatozoa lost their motility. Scanning transmission electron microscopy (STEM) of spermatozoa revealed three distinctive parts: head, middle piece and tail (flagellum). Each part was analysed in detail by transmission electron microscopy (TEM). The characteristics observed suggest that the spermatozoa of B. vermelha posses ancestral characteristics of fish that reproduce by external fertilization, and can thus be classified as “uniflagellate anacrosomal aquasperms”, or aquasperms Type I. These are the first reports on B. vermelha semen and spermatozoa and, therefore, could be used as a reference and benchmark for research studies using biotechniques such as cryopreservation and androgenesis. The second scientific article (Chapter II) describes the ultrastructural alterations of Brycon orbignyanus, “piracanjuba” (Characiformes, Characidae) spermatozoa after cryopreservation. Spermatozoa were cryopreserved for 1 day, 1 month or 1 year in solutions containing DMSO, methyl glycol and methanol. The ultrastructural analysis of the frozen-thawed spermatozoa revealed alterations varying from small damages to the different parts of the cell to total destruction of spermatozoa ...
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Efeito da adição da L-carnitina e acetil-L-carnitina sobre a viabilidade espermática na refrigeração do sêmen equino

Lisboa, Fernando Paixão [UNESP] 18 June 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-01-26T13:30:36Z : No. of bitstreams: 1 000793038.pdf: 311432 bytes, checksum: 05eabed55effbe08dbab4cd9131bfedb (MD5) / A biotécnica mais utilizada em equinos no Brasil é a inseminação artificial com sêmen refrigerado. Apesar dos avanços, ainda há uma grande variação nos resultados de fertilidade em programas reprodutivos. A carnitina é um composto vitamínico que desempenha um papel importante no metabolismo energético, já que ela garante a produção de energia pelo espermatozoide através do estímulo de vias metabólicas. Além disso, ascarnitinas apresentam potente poder antioxidante, conferindo maior proteção durante o armazenamento.No entanto, sua utilização pós-ejaculação é pouco estudada, já que existem poucos relatos deste tipo de aplicação, sendo nenhum deles em equinos. Devido a isso, este trabalho foi dividido em dois experimentos. O objetivo do experimento 1 foi determinar a concentração ideal l-carnitina (LC) e acetil-l-carnitina (AC) na refrigeração de sêmen equino a 5ºC. No experimento 2, o objetivo foi avaliar os efeitos da melhor dose de LC e AC e sua associação sobre a viabilidade espermática através da citometria de fluxo. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, os ejaculados foram divididos em sete grupos: controle (C), tratado com 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC-2), 15 mmol/L (LC-3)de LC, tratado com 5 mmol/L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) e 15 mmol/L (AC-3) de AC e após foram refrigerados a 5ºC por 48 horas. Para o experimento 2 foram utilizados os mesmos animais e manipulação dos experimentos anteriores, entretanto, os grupos testados foram: Controle (C), tratado com 10 mmol/L de LC (LC), tratado com 10 mmol/L de AC (AC) e 10 mmol/L de LC + 10 mmol/L AC (LC+AC). A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada do movimento espermático e a integridade de membrana plasmática (IMP) por microscopia de epifluorescência no experimento 1 e 2, entretanto, ... / Over the years, technology for cooling semen has developed. However, despite progress, pregnancy rates are still variable between reproductive programs.Carnitine is a vitamin compound which plays an important role in energy metabolism, since it guarantees the sperm energy production by stimulating metabolic pathways. Furthermore, carnitine has a powerful antioxidant effect, providing greater protection to plasma membrane during storage.However, post-ejaculation use is poorly studied, being none in horses. The aim of experiment 1 was determine optimal concentration of lcarnitine (LC) and acetyl-l-carnitine (AC) in equine semen cooled at 5°C. In experiment 2, the objective was evaluate dose effects between LC, AC and their association on sperm viability by flow citometry. Two ejaculates from 12 stallions were used in both experiments. After dilution with Botu-Semen®to 50 x 106 spermatozoa/ml, each ejaculate was split into seven groups: control (C), treated with 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC -2), 15 mmol/L (LC-3) of LC, treated with 5 mmol /L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) and 15 mmol/L (AC-3) of ACand then cooled at 5°C for 48 hours. In second experiment, groups were divided in: control (C), treated with 10 mmol /l of LC (LC), treated with 10 mmol /L of AC (AC) and 10 mmol/L of LC + 10 mmol/L of AC (LC+AC).In both experiments,sperm kinetics was evaluated by computerized analysis (CASA) and plasma membrane integrity (IMP) by epifluorescence microscopy.Moreover, in experiment 2 were assessed DNA, ROS and Lipid Peroxidation (PEROX) by flow cytometry.All analysis were performed before cooling (T0), 24 (T24) and 48 hours (T48) after. According to the results of first experiment, LC groups had higher IMP and better values of kinetic than control. Groups treated with AC showed higher results of sperm kinetics after 24 hours of refrigeration and IMP in all analysed times. In second experiment, treated groups were ...
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Influência da adição de plasma seminal ao sêmen congelado de jumento (Equus asinus) e da lavagem uterina, sobre a fertilidade de jumentas / Influence of the addition of seminal plasma to jack frozen semen (Equus asinus) and uterine lavage, on jenny fertility

Oliveira, Pedro Victor de Luna Freire [UNESP] 02 October 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-02. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:22Z : No. of bitstreams: 1 000866940.pdf: 700747 bytes, checksum: 6db0bad383acb05686e302f4f09fb4d7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição do plasma seminal autólogo ao sêmen criopreservado de jumentos, aliado a lavagem uterina pós-inseminação artificial influencia nos índices de fertilidade em jumentas. Para isso, dois experimentos foram realizados: No experimento I foram analisados os parâmetros de cinética espermática pelo método computer assisted sperm analysis (CASA), análise da integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI), peroxidação lipídica (PERO) e teor de espécie reativa de oxigênio intracelular (EROS) pela técnica de citometria de fluxo, de 15 ejaculados de 3 jumentos, diluídos em INRA-96®(IC - INRA, IMV Technologies, France) - Rota et al., (2012) ou em BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brasil), com e sem adição de plasma seminal (PS) após a descongelação. Os resultados do CASA foram semelhantes para os 2 diluentes (P>0,05), no entanto o BC proporcionou uma maior integridade de MPAI além da PERO menor que o IC, resultando em menor EROS (P<0,05). A adição do PS reduziu os parâmetros do CASA (p<0,05), porém sem ação na MPAI e PERO (p>0,05). No experimento II, avaliou-se a influência da adição do PS autólogo na pós-descongelação e sua associação à lavagem uterina (L) pós-inseminação artificial (IA), na fertilidade de jumentas. Foram utilizados 86 ciclos de 33 jumentas, divididas em 8 grupos: G1) BC + PS + L e G2) IC + PS + L foram testados mediante inseminações em 14 ciclos cada; G3) BC + L e G4) IC + L foram testadas em 11 ciclos cada, todas as L foram feitas 10 horas após a IA; G5) BC + PS e G6) IC + PS foram empregados em 8 ciclos cada, e o G7) BC e G8) IC foram avaliados em 10 ciclos cada. Verificou-se que o PS não influiu na fertilidade de jumentas (p = 0,6582) contudo a L,10 h pós-IA, interferiu positivamente na taxa de prenhez (p = 0,0097) elevando de 0% (G7 e G8) para 42,9% (G1 e G2) / The aim of this study was to evaluate whether the addition of autologous seminal plasma to frozen donkey semen, coupled uterine flushing after artificial insemination influence on fertility rates in jennies. Two experiments were conducted: experiment I, the parameters of sperm kinetics were analyzed by using computer assisted sperm analysis (CASA), analysis of plasma membrane integrity and acrosome (MPAI), lipid peroxidation (PERO) and reactive species content intracellular oxygen (ROS) by the technique of flow cytometry, 15 ejaculated 3 donkeys, diluted in INRA-96® (IC - INRA, IMV Technologies, France) -. Rota et al, (2012) or BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brazil), with and without addition of seminal plasma (SP) after thawing. The results were similar for CASA to 2 extenders (P> 0.05), however BC provided greater MPAI integrity beyond smaller PERO than the IC, resulting in lower EROS (P <0.05). The addition of PS reduced the parameters of CASA (P <0.05), but no action on the MPAI and Pero (P> 0.05). Experiment II, evaluated the influence of the addition of autologous SP in post-thaw and its association with uterine lavage (L) pos-IA, in the fertility jennies. 86 cycles of 33 jennies were used, divided into 8 groups: G1) BC + SP + Land G2) IC + SP + L, were tested by 14 cycles each; G3) BC+L and G4) IC+ L, were tested on each 11 cycles, all L were made 10 hours after AI; G5) BC + SP and G6) IC + SP were used in 8 cycles each, and the G7) BC and G8) IC were evaluated in 10 cycles each. It was found that the SP, had no effect on fertility jennies (p = 0.6582) however L 10 h post-IA, increased pregnancy rate (p = 0.0097) increasing from 0% (G7 and G8) to 42.9% (G1 and G2)

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