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Utilização de diferentes tipos de amidas como agentes crioprotetores para espermatozóides de garanhões

Medeiros, Antonio Sylvio Lopes de [UNESP] January 2003 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T20:38:44Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_asl_me_botfmvz.pdf: 309351 bytes, checksum: 0a3f78bcf756083f2e3741923096ea7b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The present work aimed to investigated several kinds of amides to freeze equine semen. Two ejaculates from 20 stallions of different breeds were used. All ejaculates with initial motility greater than 60 % were split and frozen in 0.5 ml French straws in a milk base extender (INRA 82) containing the different studied cryoprotectants. The post-thaw percentage of motility and other motility parameters wer evaluated using CASA .To evaluate cell viability fluorescent probes were used. Stains used were Carboxyfluorescein and propidium iodine (PI). The first experiment was designed to investigated the protective effect of 3 amides ; Dymethyl acetamide at 3 concentrations - 1, 3 and 5 % v/v; dymethyl formamide at 5% and methyl formamide at 5%. Differences on motion parameters between cryoprotectant treatments were determined by analysis of variance using SAS system. Utilization of amides significantly improved most of parameters evaluated when compared with Glycerol. Progressive motility evaluated by optical microscopy was higher (p< 0,0001) for semen that was frozen with MF 5% and DF5%. The progressive motility evaluated by CASA was higher for the MF 5 % and DA 3% groups. The electron microscopy evaluation showed that DA 5% and MF 5 % were superior in the ability to preserved the acrossomal integrity. The acrossomal status evaluated by fluorescence showed that the preservation was higher on the groups DA 5%, MF 5 % and DF5% (p<0.0001). On the second experiment the cryoprotective effect of two associations of glycerol (Gly) and dimethylformamide (DF) were tested ( Gly 3.5% + DF 1.5 % and DF 3.5% + Gly 1.5%)... (Complete abstract, click electronic address below).
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Efeito de dois métodos de resfriamento sobre a funçao espermática in vitro de semen criopreservado de felinos (Leopardus tigrinus, Leopardus pardalis E Felis catus), avaliada através de ensaio competitivo de ligaçao em ovócitos de gata doméstica (Felis

Baudi, Daiam Loyola Kampa January 2005 (has links)
A busca de estratégias eficientes para a manutenção de espécies em risco de extinção tem impulsionado a comunidade científica a pesquisar alternativas para a preservação de material genético, com intuito de formação de bancos de genoma e aplicação de biotécnicas reprodutivas. Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos de dois protocolos diferentes de resfriamento pré-congelamento para a criopreservação de sêmen de jaguatirica (n=3), gato-do-mato-pequeno (n=4) e gato doméstíco (n=15). Apenas seis amostras de sêmen de jaguatirica, sete de gato-do-mato-pequeno e treze amostras de gato doméstico apresentaram características qualitativas e quantitativas para serem submetidas aos dois métodos de resfriamento. Estas amostras foram processadas e diluídas em meio crioprotetor, com 4% de glicerol e divididas em duas alíquotas submetidas ao método rápido (30 min a 4°C) ou lento (= 2 horas a 4°C) de resfriamento e, em seguida congeladas. Após o descongelamento as amostras foram avaliadas para índice de motilidade, percentual de células com acrossoma intacto e de células viáveis. Ovócitos de gatas domésticas maturados in vitro foram utilizados para avaliar a capacidade de ligação espermática à zona pelúcida, em ensaios de ligação competitiva in vitro. Os espermatozóides criopreservados pelos dois métodos, diferenciados entre si pelo uso de corante vital, competiram pela ligação à zona pelúcida dos mesmos ovócitos, em iguais condições de tratamento. O índice médio da motilidade espermática, pós-congelamento, foi de aproximadamente 50% para todas as espécies nos dois métodos de resfriamento. O percentual de células com acrossoma intacto, para a jaguatirica, foi de aproximadamente 20% nos dois métodos de resfriamento enquanto o gato-do-mato-pequeno apresentou 30,8% de células com acrossoma intacto no método de resfriamento rápido e 33,4% no método lento. Para o gato doméstico, o percentual de células com acrossoma intacto foi de 33,4% e 32,7% nos métodos de resfriamento rápido e lento, respectivamente. O sêmen do gato-do-mato-pequeno sofreu a menor redução no percentual de células viáveis com 51,2% no método de resfriamento rápido e 44% no método lento. A jaguatirica apresentou os menores índices entre as três espécies com 24% de células viáveis no método rápido e 27,4% no método lento, e o gato doméstico apresentou 28,6% e 28,2% de células viáveis nos métodos rápido e lento, respectivamente. O número médio de espermatozóides ligados por ovócito foi maior (p < 0,05) para o resfriamento lento do sêmen de gato-do-mato-pequeno (5,8 +- 0,9) do que para o resfriamento rápido (2,7 +- 0,4). Já o resfriamento rápido proporcionou melhores resultados na taxa de ligação espermática para a jaguatirica (8,5 +- 1,3) (p < 0,01) e para gato doméstico (4,3 +-0,9) (p< 0,05), enquanto o método de resfriamento lento proporcionou 2,5 +- 0,3 espermatozóides de jaguatirica e 1,4 +- 0,2 espermatozóides de gato doméstico ligados por ovócito. As diferentes respostas entre as espécies podem ser devidas a características espermáticas espécie-específicas e individuais. Os resultados permitiram inferir que os protocolos de criopreservação devem ainda ser aperfeiçoados e adaptados à cada espécie e que o ensaio de ligação espermática competitiva foi eficiente na detecção de diferenças na função espermática entre tratamentos, o que não foi possível com as avaliações espermáticas de rotina
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Efeito da adição e/ou suplementação de antioxidante no processo de congelação/descongelação de sêmen de cães férteis e subférteis

Lopes, Bethania Vieira [UNESP] 27 August 2010 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-27Bitstream added on 2014-06-13T20:26:10Z : No. of bitstreams: 1 lopes_bv_dr_botfmvz.pdf: 1496519 bytes, checksum: 66727a17c8bb9d049c65239284863d62 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desse projeto foi determinar a eficiência do uso de antioxidantes na prevenção de efeitos deletérios da congelação de sêmen em cães férteis e subférteis. Para isso foram executados dois experimentos: O primeiro teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, utilizando meio diluente a base de TRIS/gema de ovo/glicerol, com a adição ou não de antioxidantes (Catalase, Superóxido Dismutase e suas associações, ácido ascórbico, tocoferol e suas associações). O segundo experimento teve como objetivo comparar os resultados da congelação do sêmen de cães férteis e subférteis, suplementados com 500mg de vitamina C e E, por via oral, durante 60 dias. Foram utilizados 13 cães, sendo 7 considerados férteis e 6 classificados com subférteis. Os cães férteis apresentavam exame andrológico dentro dos padrões recomendados pelo CBRA; os subférteis apresentavam baixa concentração espermática (< 20x10 6 sptz/mL) e/ ou alto índice de patologias espermáticas (> 30%). O sêmen foi congelado em três momentos, antes do início da suplementação (M1), 30 (M2) e 60 dias (M3) após o início da suplementação oral. O sêmen foi coletado por manipulação digital do pênis e analisado para: motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). A descongelação foi realizada a 70ºC por 8 segundos. Logo após as amostras foram avaliadas na análise computadorizada (CASA) e avaliação de integridade de membrana acrossomal e plasmática. Também foi analisada a taxa de peroxidação lipídica e antioxidantes: SOD, catalase, vitaminas C e E no plasma seminal. Pode-se concluir que a suplementação oral, no meio diluente ou a sua associação pode trazer benefícios para o processo de congelação/descongelação de cães... / The aim of this project was to determine the efficiency of antioxidants in preventing the deleterious effects of freezing semen in fertile and subfertile dogs. For this purpose two experiments were performed: The first aim was to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs, using the TRIS diluent / egg yolk / glycerol extender, with or without addition of antioxidants (Catalase, Superoxide dismutase and their associations, ascorbic acid, tocopherol and their associations). The second experiment aimed to compare the results of frozen semen of fertile and subfertile dogs supplemented with 500mg of vitamin C and E, orally for 60 days. We used 13 dogs, 7 were considered fertile and 6 classified as subfertile. The dogs had been considered fertile breeding soundness examination within the standards recommended by CBRA; the subfertile had lower sperm concentration (<20x10 6 sptz / mL) and / or high rate of sperm pathologies (> 30%). Semen was frozen in three stages, before the start of supplementation (M1), 30 (M2) and 60 days (M3) after the initiation of supplementation. Semen was collected by digital manipulation of the penis and analyzed for: motility, vigor, concentration and morphology. The frozen semen was performed by the method described by Chirinea et al. (2006). Thawing was performed at 70 ° C for 8 seconds. Soon after the samples were evaluated in the computerized analysis (CASA) and assessment of membrane integrity and acrosomal plasma. We also analyzed the rate of lipid peroxidation and antioxidants: SOD, catalase, vitamins C and E in seminal plasma. It can be conclude that oral supplementation, in the extender or your association can benefit the process of freezing / thawing of dogs. Especially for those with reproductive problems and may even, with oral therapy to reduce or eliminate this feature
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Comparação entre diferentes taxas de sêmen na viabilidade espermática em garanhões de alta e baixa congelabilidade

Maziero, Rosiára Rosária Dias [UNESP] 01 July 2010 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-01Bitstream added on 2014-06-13T20:56:11Z : No. of bitstreams: 1 maziero_rrd_me_botfmvz.pdf: 928128 bytes, checksum: 359ec822b473e1e1a55462f120819df5 (MD5) / A criopreservação de sêmen equino mostra-se como importante instrumento no ganho genético de rebanhos pela maximização do uso de bons reprodutores. Porém, nos programas de inseminação artificial, a utilização de espermatozóides criopreservados apresenta índices de fertilidade inferiores aos obtidos com sêmen a fresco, constituindo um dos maiores entraves à plena difusão dessa biotecnologia. Assim, o experimento 1 teve como objetivo avaliar o movimento espermático pelo sistema computadorizado (CASA) e a integridade da membrana plasmática por microscopia de epi-fluorescência de espermatozóides equino congelados em palhetas de 0,5 e 0,25 mL, em diferentes taxas de congelação na viabilidade espermática. Para desenvolver o projeto foram utilizadas três metodologias de congelação: o método convencional em caixa de isopor e dois equipamentos automatizados, um deles a máquina Mini Digitcool® (IMV - Technologies - França), que possibilita uma variação de -10ºC a -60ºC por minuto e o outro equipamento TK® 4000C (TK Equipamentos para Congelação) que possibilita uma variação de -10ºC a -40ºC por minuto. Para tanto foram utilizados 3 ejaculados de 4 garanhões de diferentes raças, para cada protocolo de congelação, sendo o protocolo 1: caixa de isopor x máquina TK® 4000C na taxa de -20ºC/min x máquina Mini Digitcool® na taxa de -20ºC/min; protocolo 2: caixa de isopor x máquina TK® 4000C na taxa de -40ºC/min x máquina Mini Digitcool® na taxa de -40ºC/min e protocolo 3: caixa de isopor x máquina TK® 4000C na taxa de -40ºC/min x máquina Mini Digitcool® na taxa de -60ºC/min. Para a análise pós-descongelação as palhetas de 0,5 mL foram descongeladas a 46ºC por 20 segundos e as palhetas de 0,25 mL a 46ºC por 15 segundos. A análise estatística das variáveis estudadas no sêmen congelado/descongelado foi realizada mediante o pacote... / Equine semen cryopreservation comes as an important tool to enhance the herd gene pool by maximizing the use of the top genetic merit stallions. However, the use of frozen semen in the artificial insemination programs presents reduced fertility rates in comparison to those obtained with fresh semen, being one of the biggest hindrances to spread this biotechnology. Thus, Experiment 1 aimed to evaluate the motility pattern using a computer-assisted sperm analysis (CASA) and plasma membrane integrity by epifluorescence microscopy of equine semen that were frozen in 0.5 and 0.25mL straws at different freezing rates and their relationship with sperm viability. Three different methodologies were used: conventional method with isothermic box and two automated systems: the Mini Digitcool® machine (IMV - Technologies - France), which allows a range from -10oC to -60oC per minute, and the TK® 4000C (TK Equipamentos para Congelação, Brazil), that provides a range from -10ºC to -45ºC per minute. Therefore 3 ejaculates for 4 animals were used for each freezing protocol. On protocol 1 we compared isothermic box vs. TK® 4000C machine at a -20ºC/min rate vs. Mini Digitcool® at a -20ºC/min rate; Protocol 2 compared isothermic box vs. TK® 4000C machine at a -40ºC/min rate vs. Mini Digitcool® at a -40ºC/min rate; and Protocol 3 compared isothermic box vs. TK® 4000C machine at a -40ºC/min rate vs. Mini Digitcool® at a -60ºC/min rate. The 0.5mL-straw samples were thawed at 46oC/20 sec whereas samples from the 0.25mL straws were thawed at 46oC/15 sec for post-thawing analysis. Statistical analysis from the frozen-thawed semen evaluated parameters was performed using the statistics software SAS 9.1. At first, it was used the descriptive analysis Box Plot R program. Then, data were analyzed using Proc. MIXED, a variance analysis to investigate the treatment effect (freezing rates and... (Complete abstract click electronic access below)
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Avaliação da fragmentação do DNA espermático de sêmen refrigerado de garanhões

Farrás, Marcel Cavalcanti [UNESP] 26 January 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-26Bitstream added on 2014-06-13T18:58:50Z : No. of bitstreams: 1 farras_mc_me_botfmvz.pdf: 544796 bytes, checksum: 513d0af00d97f12c80a9d388b7fd8f78 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nas últimas décadas, muitos estudos têm sido realizados nas diferentes espécies com o intuito de se determinar os fatores envolvidos no processo da fragmentação do DNA espermático. A biologia molecular voltada à área da reprodução tem resultado em inúmeras técnicas para a avaliação da qualidade da cromatina e determinação da fragmentação do DNA espermático. Em trabalhos recentes, um novo teste denominado Halomax® tem se mostrado tão eficiente quanto a outros tradicionais para a avaliação da fragmentação do DNA espermático, apresentando como vantagens a sua praticidade e o fato não requerer o uso de equipamentos de alto custo. O presente experimento teve por objetivo comparar as raças Mangalarga Marchador (MM) e Quarto de Milha (QM) quanto à resistência à refrigeração, bem como utilizar o Teste Dispersão de Cromatina Espermática denominado Halomax® para avaliar a fragmentação da cromatina espermática do sêmen refrigerado dos garanhões dessas raças em duas temperaturas de armazenamento de sêmen refrigerado (5°C e 15°C). Os resultados deste trabalho demonstraram que não houve diferença entre as temperaturas de armazenamento (5°C e 15°C), mostran do que ambas são eficientes na manutenção da viabilidade espermática pelo período de 24 horas para ambas as raças estudadas. Além disso, foi observada uma característica espermática superior dos garanhões da raça Quarto de Milha quando comparada aos da raça Mangalarga Marchador, tanto nos parâmetros de velocidade espermática, avaliado pelo CASA, quanto com relação à fragmentação do DNA espermático, revelando uma maior sensibilidade dos animais da raça Mangalarga ao processo de refrigeração do sêmen / Many studies have been conducted in different species in order to determine the factors involved in the process of sperm DNA fragmentation. Molecular biology studies focused on the reproductive area has resulted in several techniques for assessing the quality of chromatin and sperm DNA fragmentation. Recently, a new test called HALOMAX ® has been shown to be as efficient as other traditional assessment of sperm DNA fragmentation, having the advantage of practicality and not require the use of expensive equipment. The aim of this study was to compare breeds Mangalarga and Quarter Horses for cooling resistance and use the Sperm Chromatin Dispersion Test called HALOMAX ® to evaluate the sperm chromatin fragmentation using two cooled semen storage systems (5°C and 15°C). Our results showed no difference between storage systems (5°C and 15°C), showing that both are effective in maintaining sperm viability for a period of 24 hours for both breeds studied. In addition, the Quarter Horse shown superiority in semen quality parameters assessed by CASA and sperm DNA fragmentation when compared with the Mangalarga, revealing higher sensitivity of the Mangalarga stallions for cooling semen
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Estudo de diferentes sistemas e curvas de congelação na eficiência da congelabilidade e fertilidade de sêmen equino

De Vita, Bruna [UNESP] 07 April 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-07Bitstream added on 2014-06-13T19:38:30Z : No. of bitstreams: 1 vita_b_me_botfmvz.pdf: 1310712 bytes, checksum: 968ab4386692666cb0cda1f45e9f5d04 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O presente estudo objetivou comparar diferentes curvas de congelação utilizando-se uma máquina com curvas programadas (TK3000®) com congelação em vapor de nitrogênio liquido, utilizando sêmen de garanhões de alta e baixa congelabilidade. Comparou-se a eficácia do período de estabilização do sêmen em diferentes sistemas de transporte refrigerado (Botutainer® e Equitainer®) em relação à estabilização feita em refrigerador Minitüb® previamente à congelação. No experimento I e II foram utilizados 4 garanhões com sêmen de alta congelabilidade. As amostras foram refrigeradas durante 20 minutos previamente à congelação em refrigerador Minitüb® (GM), Botutainer® (GB) e Equitainer® (GE). Não houve diferença entre os grupos quanto a motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP): GM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) demonstrando que os dispositivos podem ser utilizados como uma alternativa aos refrigeradores. Os valores de integridade de membrana plasmática (IMP%) foram GM(49,43a); GB(48,70a); GE(44,90b). No experimento II foram utilizadas 3 curvas programadas na TK3000® (C1, C2, C3) e a metodologia em caixa de isopor (GC). As comparações foram realizadas em relação ao GC e não apresentaram diferença significativa. Valores em porcentagem de MT, MP e IMP: GCxC1 (70 x 67,5; 35,7 x 32; 48,3 x 46); GCxC2 (63,3 x 67,66; 33,3 x 34,8; 45,4 x 48,3); GCxC3 (63,2 x 65; 32,2 x 32,4; 48,09 x 49,3). No teste de fertilidade, as inseminações foram realizadas com amostras congeladas com C2 e GC apresentando índices de prenhez de 65 e 60% respectivamente, sem diferença significativa. A TK3000® foi tão eficaz quanto à metodologia de congelação em caixa de isopor em relação à congelabilidade e fertilidade. Todas as curvas testadas foram eficientes na manutenção da viabilidade... / This present study compared freezing ratios in a programmable freezer (TK3000) performed by usual methodology, using good freezers and poor freezers stallions. The semen stabilization period efficiency was compared in cooled semen transport systems (Botutainer® e Equitainer®) in relation with Minitüb® fridge before the cryopreservation. Four good freezers stallions was used in experiments I and II. Samples were cooled during 20 minutes before the cryopreservation in a Minitüb® fridge (GM), Botutainer® (GB) and Equitainer® (GE). There was not difference between groups in relation with total motility (TM) and progressive motility (PM): CM (67,1;32,1%); GB (65,2;31,9%); GE (63,4;30,4%) showing that transport systems can be used as an alternative instead of fridges. Plasma membrane integrity (MPI%) values were CM (49,43a); GB (48,70a); GE (44,90b). Three frozen rations were used in experiment II in the TK3000® (C1, C2, C3) and the isothermic box (CG). Results from each freezing ratio were compared to the control group and no difference was observed. Percentage values from TM, PM and MPI were the following: CGxC1(70x67,5; 35,7x32; 48,3x46); CGxC2 (63,3x67,66; 33,3x34,8; 45,4x48,3); CGxC3 (63,2x65; 32,2x32,4; 48,09x49,3). In the fertility test, artificial inseminations were performed with C2 and GC frozen samples showing pregnancy rates of 65 and 60%, respectively, without significant difference. The TK3000® was as efficient as the isothermic box frozen methodology in relation to freezability and fertility. All freezing ratios were efficient in semen viability maintenance. Ten Mangalarga Marchador breed stallions were used in the experiment III. The samples were shared and frozen simultaneously in two programmable freezers with different ratios (G2 e G3) and in an isothermic box (CG). For the statistical analisys, semen ...(Complete abstract click electronic access below)
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Avaliação do sêmen de búfalos em três meios de criopreservação

Zorzetto, Mariana Furtado [UNESP] 05 March 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-05Bitstream added on 2014-06-13T18:39:01Z : No. of bitstreams: 1 zorzetto_mf_me_botfmvz.pdf: 1249993 bytes, checksum: b41bc94bf30e1281fc157ffc76b1e023 (MD5) / Os programas que visam aumentar a incorporação de biotecnologias reprodutivas a fim de se obter um incremento genético dos rebanhos bubalinos, visando aumentar a produtividade dos mesmos. No entanto, a melhoria do sistema produtivo e reprodutivo será possível mediante a utilização de tecnologias que viabilizem o melhor aproveitamento dos animais, como a congelação de sêmen. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade das amostras seminais de búfalos diluídas em três meios diferentes: Botu-bov® (BB), água de coco em pó (ACP-111) e Tris-gema antes e após a criopreservação utilizando o mesmo protocolo. No presente estudo foram utilizados 4 touros bubalinos para colheitas seminais utilizando vagina artificial, os ejaculados foram diluídos com BB, Tris-gema e ACP-111. O sêmen fresco foi analisado quanto ao seu volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), morfologia realizada por microscopia de interferência diferencial (DIC), cinética pelo sistema CASA e pela microscopia de epifluorescência. Na pós-congelação as amostras foram avaliadas pelo CASA, citometria de fluxo (membrana plasmática, acrossoma, lesões semelhantes à capacitação e fragmentação do DNA) e pela microscopia de epifluorescência. Os diluentes BB e Tris-gema apresentaram melhores resultados para congelação do sêmen de búfalos, em relação ao meio ACP-111 (BB 58,59%; Tris-gema 52,64% e ACP-111 36,94% para MT). Porém o diluente BB demonstrou superioridade em relação à motilidade progressiva espermática (MP para BB, Tris-gema e ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectivamente), menor porcentagem de índice de fragmentação de DNA (0,85%) e de espermatozoides lesados (24,97%). Assim sendo, mediante o protocolo do presente estudo deduz-se que o BB apresenta superioridade na congelação de sêmen de búfalos, sendo este a melhor opção de diluente para essa biotecnologia / These programs aim to increase the incorporation of reproductive biotechnologies in order to obtain a genetic increment of buffalo herds to increase their productivity. However, improving the productive and reproductive system will be possible through the use of technologies that enable the best use of animals, such as semen freezing. Therefore, this study aimed to evaluate the quality of semen samples of buffalo diluted in three different extenders: Botu-bov ® (BB), powdered coconut water (ACP-111) and Tris-yolk before and after cryopreservation using the same protocol. In the present study was used four buffalo bulls for seminal collection using artificial vagina. The ejaculates were diluted with BB, Tris-yolk and ACP-111. The fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), morphology performed by differential interference microscopy (DIC), the kinetic by CASA system and membrane integrity by epifluorescence microscopy. In the post-freeze moment the samples were evaluated by CASA, flow cytometry (plasma membrane, acrosome, lesions similar to capacitation and DNA fragmentation) and by epifluorescence microscopy. The extenders BB and Tris-yolk showed superior results for semen freezing of buffalo in relation to the ACP-111 (BB 58,59%; Tris-yolk 52,64% e ACP-111 36,94% for MT). However the diluent BB demonstrated superiority for progressive sperm motility (MP for BB, Tris-yolk and ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectiblely), lower percentage of DNA fragmentation (0,85%) and lower percentage of damaged sperm (24,97%). Thus, through the protocol of this study it shows that the BB has superiority in semen freezing of buffalo, appearing to be the best option of extender for this biotechnology
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Influência da suplementação oral com L-carnitina na qualidade do sêmen criopreservado de garanhões

Lima, Marcelo Mandrá [UNESP] 14 February 2003 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-14Bitstream added on 2014-06-13T19:17:42Z : No. of bitstreams: 1 lima_mm_me_jabo.pdf: 215055 bytes, checksum: 1a2d1414c1ce8862b1dc8a0b31b6a6b5 (MD5) / A utilização da L-carnitina - ácido y-trimethilamino- ß-hidróxido butírico - visando melhorar os parâmetros espermáticos tem sido intensivamente utilizado em medicina humana e em menor escala em medicina veterinária com resultados satisfatórios. O objetivo deste estudo foi verificar a influência da suplementação oral de L-carnitina em sêmen criopreservado de garanhões. Utilizou-se neste experimento quatro garanhões submetidos a duas colheitas de sêmen por semana por um período de quatro semanas durante o mês de agosto de 2001; amostras se sêmen desses animais, agora denominado TO, foram criopreservadas. Os mesmos quatro garanhões receberam uma suplementação oral de quinze gramas de L-carnitina uma vez ao dia nos meses de maio, junho, julho e agosto de 2002 e no mês de agosto de 2002 foram submetidos a duas colheitas de sêmen semanais, tendo suas amostras também criopreservadas, que passaram a ser denominado tratado (T1). Foram analisados e comparados entre si os seguintes parâmetros espermáticos:- total de espermatozóides no ejaculado e integridade da membrana espermática e através de análise computadorizada as variáveis motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), velocidade de trajeto (VAP), velocidade progressiva (VSL) e velocidade curvilinear (VCL) antes e após da realização de um teste de termo-resistência (TTR). Foi realizado um delineamento casualizado com oito repetições (dois tratamentos e quatro garanhões); empregou-se análise de variância - ANOVA - com posterior desdobramento para estudar o efeito dos tratamentos em cada um dos garanhões - Teste de Tukey - o nível de significância adotado foi p<0,05... / Owing its positive effect on the improvement of spermatic parameters, L- carnitine - ?-trimethilamino- ß-hidroxid butiric acid - has been intensively utilized in human medicine and in a lower scale in veterinary medicine with satisfactory results. The objective of this study was to verify the influence of oral supplementation with L-carnitine on cryopreserved stallion semen. Four stallions were submitted to semen collection twice a week during a four week period in August of 2001. The collected samples from those horses were then cryopreserved and they were assigned as a control group (T0). The same horses received fifteen grams of L- carnitine by oral supplementation, once a day, during May, June, July and August of 2002, and then they were submitted to semen collection twice a week in August of 2002. Those collected samples were also equally cryopreserved, and assigned as treatment group (T1). The following spermatic parameters were analyzed and submitted to a pair wise comparison: total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity and by computer analyze, variables as: total motility (TM), progressive motility (PM), linearity (LIN), path velocity (VAP), progressive velocity (VSL), and track speed (VCL). Those variables were then determined before and after a term resistance test (TRT). A casual design was established using eight repetitions (two treatments and four stallions). To investigate the treatment effect, analysis of variance (ANOVA) was performed and to investigate de effect within stallion, the Tukey's test - significance level was established as p£ 0.05. The means and standard errors of means for the variable total motility, determined before and after the term resistance test, total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity was significantly higher in the treatment group (T1) when compared to the control group (T0)... (complete abstract, access undermentioned eletronic address)
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Efeito da substituição da gema de ovo pela lecitina de soja na criopreservação de sêmen equino

Felício, Gabriel Barcellos [UNESP] 03 November 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-11-03Bitstream added on 2014-06-13T19:38:33Z : No. of bitstreams: 1 felicio_gb_me_botfmvz.pdf: 193754 bytes, checksum: 08b79f22861822c2b5ed82d28f43112c (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo do presente trabalho foi verificar a eficiência na congelabilidade e fertilidade da substituição da gema de ovo pela lecitina de soja no diluidor comercial Botu-Crio® (BC). Foram realizados dois experimentos laboratoriais e os respectivos testes de fertilidade. No experimento I comparou-se o diluente Botu-Crio® com o diluidor o Botu-Crio em que a gema de ovo foi substituída pela lecitina de soja numa concentração de 45g/L (BCLS45). Utilizou-se um ejaculado de 15 garanhões da raça Brasileiro de Hipismo (BH). Para o teste de fertilidade do Experimento I foi utilizado um garanhão da raça BH. Foram inseminados 12 éguas com o BC e 17 com o BCLS45. No experimento II comparou-se o diluente BC com o Botu-Crio sem gema de ovo (BCLS) acrescido de diferentes concentrações de lecitina de soja: 10,0; 12,5; 15,0; 17,5 e 20,0g/L (BCLS10; BCLS 12,5; BCLS15; BCLS17,5 e BCLS 20). Para tal, foram utilizados 1 ejaculado de 10 garanhões dde diferentes raças. Para o teste de fertilidade do experimento II utilizou-se um garanhão da raça Trakener e foram realizadas inseminações comparativas entre BC e BCLF20, sendo utilizadas 12 éguas com BC vs 10 éguas com BCLS20. Também comparou-se os diluente BC com o BCLS10, no qual foi utilizado um garanhão da raça Westfalen e foram inseminadas 8 éguas com BC vs 12 éguas com BCLS10. No Experimento I, os resultados de motilidade total, (61,4±16,2x61,4±15,9); motilidade progressiva, (27,0±9,8x26,7±10,6); íntegridade da membrana plasmática (IMP) (53,4±11,5x57,4±7,0); respectivamente para os diluidores Botu-Crio® e BCLS45, não havendo diferença entre os parâmetros espermáticos (p>0,05). No experimento II também não foram observadas diferenças entre os parâmetros avaliados, sendo para motilidade total BC (68,1±15,9) e BCLS10; BCLS12,5; BCLS15; BCLS17,5 e BCLS20 (65,8±13,5; 65,9±17,6; 67,6±11,2; 64,0±15,3 e 60,5±15,3)... / The objective of the present study was to verify the freezability and fertility of the BotuCrio without egg yolk extender where the egg yolk was replaced by soy been lecithin. Two experiments were performed on experiment 1 Botu-Crio® (BC) and Botu Crio without egg yolk containing 45g/L soy been lecithin (BCLS45) were compared. One ejaculated from 15 stallions from Braziliam Jump Horse Bred were used. On experiment 2, different concentrations of de soy bean lecithin: 10,0; 12,5; 15,0; 17,5 e 20,0g/L (BCLS10, BCLS12,5, BCLS17,5 e BCLS20) were compared. On the first fertility trial 12 mares were inseminated. With BC and 17 mares with Botu-Crio without egg yolk (BCLS45) using semen from only one stallion. On the second fertility trial 12 mares were inseminated with BC and another 10 mares with BCLS20. In another fertility trial 12 mares were inseminated with Botu-Crio vs and 8 mares with BCLS10 using frozen semen from a Westfalen stallion. No differences were observed on total motility (61.4 x 61.4); progressive motility, (27.0x26.7); plasmatic menbrane integrity (IMP) (53.4x57.4); between Botu-Crio® and Botu-Crio without egg yolk, (p>0,05). Also no differences were observed when different concentrations of soy been lecithin were used. The results were : For total motility BC (68,1±15,9) BCLS10, BCLS12,5, BCLS17,5 , BCLS20 (65,8±13,5; 65,9±17,6; 67,6±11,2; 64,0±15,3 ,60,5±15,3), for progressive motility: BC (28,8±9,2) and BCLS10, BCLS12,5, BCLS17,5 e BCLS20(29,8±9,8; 29,6±9,7; 31,4±8,2; 30,2±10,5 and 26,6±11,5) and IMP BC (50,7±10,3) and BCLS10, BCLS12,5, BCLS17,5 e BCLS20 (47,5±8,5; 46,6±12,2; 49,9±8,8; 46,1±10,3 and 43,6±10,9). The results of the fertility trials were: BC vs BCLS45 , 66,0 e 17% respectively (p<0,01); BC vs BCLS20 66,0 e 40,0% e BC vs BCLS10 75,0 e 41,0 respectively. In spite of similar laboratorial finds the fertility was different between... (Complete abstract click electronic access below)
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Qualidade espermática após seleção por centrifugação em Ovipure® ou gradiente de Percoll® do sêmen ovino criopreservado

Bergstein, Tacia Gomes [UNESP] 29 November 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-29Bitstream added on 2014-11-10T11:58:47Z : No. of bitstreams: 1 000790225.pdf: 849889 bytes, checksum: ea42408a16377fb6d95fbec0bcbb46cc (MD5) / O sêmen ovino congelado e descongelado sofre alterações morfofuncionais que impossibilitam ou diminuem a eficiência na fecundação. Os métodos de seleção espermática visam melhorar a qualidade e viabilidade do material fecundante. Quatro métodos de seleção espermática utilizando duas soluções de sílica coloidal revestida por silano (silica coloidal-silano) ou por polivinilpirrolidona (silica coloidal-PVP), variando o volume de solução coloidal. Foram testados a cinética espermática no CASA e a recuperação espermática. Os protocolos utilizando silica coloidal-silano apresentaram maior motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e porcentagem de espermatozoides rápidos (%RAP) quando comparado aos métodos utilizando a silica coloidal-PVP e às amostras antes da seleção espermática. A silica coloidal-PVP teve maior recuperação espermática quando comparado à silica coloidal-silano. Somente o método utilizando 4mL de silica coloidal-PVP não foi eficiente na seleção de amostras com melhor qualidade quando comparado às amostras analisadas antes da seleção espermática. Os métodos utilizando menores volumes de solução coloidal não diferiram dos métodos de maior volume, sendo a silica coloidal-silano com 1 mL o método que apresentou os melhores resultados. Como conclusão os resultados encontrados no trabalho apontaram a maior eficiência da silica coloidal-silano em selecionar sêmen ovino congelado e descongelado quando comparado à seleção em silica coloidal-PVP. O método utilizando 1mL de silica coloidal-silano foi igualmente eficiente ao método com maior volume, sendo uma alternativa para processar amostras com baixa concentração espermática / Frozen and thawed ovine semen undergo morphofunctional changes that prevent or decrease the efficiency of fertilization. Sperm selection methods have beneficial effects on the selected sperm, improving sperm quality and viability. Four methods of sperm selection were tested using two colloidal silica solutions coated with silane (silica colloid- silane) ou povinilpirrolidone (silica colloid-PVP), varying the volume of colloidal solution. Furthermore, analyses of sperm kinetics in CASA and sperm recovery were carried out. The protocols using silica colloid-silane resulted in greater MT, MP, and %RAP when compared to the methods using silica colloid-PVP and the semen before selection. Silica colloid-PVP had higher sperm recovery when compared to silica colloid-silane. Only the method using 4mL of silica colloid-PVP was not efficient in the selection of best quality samples when compared to the semen before selection. The methods using lower volumes of colloidal solutions did not differ from the methods with higher volumes, being the method with 1mL of silica collois-silane better than the 4mL method. In conclusion the results of the study indicate the superiority of silica colloid-silane in selecting frozen and thawed ovine semen when compared to silica colloid-PVP. The method using 1mL of silica colloid-silane was equally efficient to the standard method and has lower costs, being an interesting alternative to process samples with low sperm concentration

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