Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-23T19:26:27Z No. of bitstreams: 1 2018_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 2276578 bytes, checksum: 7c790f11bfc3aa7cf2eac6c91bc4d69c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-29T16:49:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 2276578 bytes, checksum: 7c790f11bfc3aa7cf2eac6c91bc4d69c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T16:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_PaulaLorenaGrangeiraSouto.pdf: 2276578 bytes, checksum: 7c790f11bfc3aa7cf2eac6c91bc4d69c (MD5) Previous issue date: 2018-08-23 / O objetivo deste estudo foi comparar a qualidade seminal de touros localmente adaptados com touros de raça comercial criados na região do Planalto Sul Catarinense e analisar as relações com a adaptação climática. Características da morfologia externa dos touros, respostas fisiológicas e proteínas do plasma seminal foram investigadas no verão e no inverno. Em cada estação houve três coletas de sêmen por touro e as amostras foram avaliadas para motilidade total e vigor, concentração espermática, viabilidade das membranas e defeitos da célula. O plasma seminal foi obtido por centrifugação e submetido à proteômica por shotgun para identificação das proteínas. Dados ambientais como temperatura e umidade relativa do ar, temperatura do globo negro (BGT), índice de temperatura e umidade (ITU) e os índices de conforto térmico foram obtidos. As condições climáticas diferiram significativamente entre as estações. No Capítulo 2, concluiu-se que touros Crioulo Lageano e Angus apresentaram qualidade seminal similar e satisfatória ao longo do ano. Temperatura do ar, BGT e ITU foram os principais fatores que potencialmente afetariam as características espermáticas. No Capítulo 3, foi possível concluir que os touros experimentaram estresse térmico moderado no verão, o que levou a mudanças fisiológicas significativas, porém a normotermia foi mantida o que mostrou boa adaptação às condições climáticas da região estudada. Características de morfologia externa do animal foram as mais importantes para explicar as respostas fisiológicas, enquanto que no inverno prevaleceram as características climáticas. No Capítulo 4, determinou-se que houve efeito de raça e de estação sobre a abundância de proteínas no plasma seminal. Sugerese que as proteínas diferencialmente abundantes fazem parte dos mecanismos envolvidos com a adaptação climática e manutenção da homeostase dos touros. Este estudo contribui para o conhecimento sobre a fisiologia do trato reprodutivo de touros de raças localmente adaptadas e argumentam em favor da utilização das mesmas na cadeia pecuária. / This study aimed to compare the semen quality of locally adapted bulls with bulls of a commercial breed raised at Southern Highlands of Santa Catarina, as well as, to analyse the relationships with climate adaptation. Characteristics of the external morphology of the animals, physiological responses and proteins in the seminal plasma were investigated in summer and in winter. Semen samples were obtained three times in each season, from all bulls, and analysed for sperm motility, vigor, number of sperm per millilitre, sperm membrane status and sperm defects. Seminal plasma was obtained by centrifugation and the proteins identified by shotgun proteomics. Environmental data, such as air temperature, air humidity, black globe temperature (BGT), temperature humidity index (THI) and thermal comfort indexes were obtained. Climate conditions differed significantly between seasons. Chapter 2 unveiled that the semen quality of Crioulo Lageano and Angus bulls was similar and satisfactory across the year. Air temperature, BGT and THI were considered the most important factors that could affect seminal traits. In Chapter 3, it was possible to conclude that the bulls experienced moderate heat stress in summer, which led to significant physiological responses, but they were able to maintain normothermia, showing good adaptation to the climate conditions at the region studied. External morphological characteristics were highly important to explain physiological responses in summer, whereas in winter the climatic features prevailed. In Chapter 4, it was determined that season and breed influenced on the abundance of the proteins in seminal plasma. We suggest that the differentially abundant proteins are part of a range of mechanisms that participate in climate adaptation and homeostasis maintenance of the sires. This study contributes to the knowledge about the male physiology in locally adapted cattle and argues in favour of the use of them in the livestock breeding systems.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-20. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:13:44Z : No. of bitstreams: 1 000866927.pdf: 585944 bytes, checksum: 976b997ede2e6fb1c664f9142a6fcbaf (MD5) / Muitos garanhões não respondem de forma satisfatória frente ao processo de criopreservação sendo vários os fatores envolvidos nessa intolerância. Visando elucidar resultados superiores de alguns animais aos processos de criopreservação espermática, foram realizados dois experimentos. No experimento I, o objetivo foi avaliar a ação do estresse oxidativo e as consequências no sêmen de garanhões resistentes e sensíveis ao processo de congelação espermática, verificando também a influência do fator racial frente ao processo de congelação espermática. No experimento II, o objetivo foi avaliar a influência da presença do plasma seminal sobre a resistência espermática no sêmen refrigerado de garanhões considerados bad e good coolers. Para avaliação das amostras seminais foi realizada análise computadorizada de cinética espermática (CASA, Thorne Research - HTMA IVOS), análise e quantificação do estresse oxidativo pela mensuração das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), análise da fragmentação do DNA espermático (HALOMAX) e análises de translocação de fosfolipídios da membrana, índice de caspase ativada e quantificação de espécies reativas de oxigênio pela citometria de fluxo. No experimento I, não houve influência racial com relação à qualidade espermática, além disso, os garanhões bad freezer, que apresentaram maior perda de qualidade seminal após a congelação espermática, revelaram maiores níveis de estresse oxidativo e fragmentação do DNA espermático. No experimento II, os garanhões sensíveis à refrigeração apresentaram melhora da qualidade espermática ao retirarmos o plasma seminal. Já nos good coolers houve uma manutenção da qualidade espermática na presença do plasma seminal e uma diminuição da qualidade sem o plasma seminal. Além disso, observamos ao submeter as amostras ao teste-desafio, que as análises espermáticas se tornam mais confiáveis... / A significant number of stallions do not respond in a satisfactory way to the cryopreservation process and that there are many factors involved. In order to elucidate the reasons why some animals have superior results in the spermatic cryopreservation processes, two experiments were conducted. In experiment I, the goal was to evaluate the action of oxidative stress and the consequences in the semen of stallions that were resistant and susceptible to the spermatic freezing process. The influence of the racial factor to the spermatic freezing process was also verified. In experiment II, the goal was to evaluate the influence of the seminal plasma presence on spermatic resistance in cooled semen of stallions considered as bad and good coolers. To evaluate seminal samples, computer analysis of the spermatic cinetic was done (CASA, Thorne Research - HTM IVOS), oxidative stress levels were assessed by thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), sperm DNA fragmentation (HALOMAX) and analysis of the translocation of membrane phospholipids, activated caspase indices and quantification of ROS with flow cytometry were done. In experiment I, there was no influence of the breed factor in relation to the sperm quality of the analyses that were done. Furthermore, the bad freezers stallions, that showed the most loss of seminal quality after spermatic freezing, presented higher rates of oxidative stress and spermatic DNA fragmentation. In experiment II, the stallions that were considered sensitive showed improvement of the sperm quality as the SP was removed. Furthermore, in the good coolers we observed the preservation of sperm quality in the presence of SP and a quality decrease in the samples without the SP. Additionally, we also observed the importance of the test challenge for the evaluation of the sperm analysis, because when submitted to stressful situations, the differences were evident. Keywords: Semen, cryopreservation, oxidative stress...

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Junior / Coorientador: / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Fabiana Ferreira Souza / Banca: Marcio Teoro do Carmo / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: Muitos garanhões não respondem de forma satisfatória frente ao processo de criopreservação sendo vários os fatores envolvidos nessa intolerância. Visando elucidar resultados superiores de alguns animais aos processos de criopreservação espermática, foram realizados dois experimentos. No experimento I, o objetivo foi avaliar a ação do estresse oxidativo e as consequências no sêmen de garanhões resistentes e sensíveis ao processo de congelação espermática, verificando também a influência do fator racial frente ao processo de congelação espermática. No experimento II, o objetivo foi avaliar a influência da presença do plasma seminal sobre a resistência espermática no sêmen refrigerado de garanhões considerados bad e good coolers. Para avaliação das amostras seminais foi realizada análise computadorizada de cinética espermática (CASA, Thorne Research - HTMA IVOS), análise e quantificação do estresse oxidativo pela mensuração das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), análise da fragmentação do DNA espermático (HALOMAX) e análises de translocação de fosfolipídios da membrana, índice de caspase ativada e quantificação de espécies reativas de oxigênio pela citometria de fluxo. No experimento I, não houve influência racial com relação à qualidade espermática, além disso, os garanhões bad freezer, que apresentaram maior perda de qualidade seminal após a congelação espermática, revelaram maiores níveis de estresse oxidativo e fragmentação do DNA espermático. No experimento II, os garanhões sensíveis à refrigeração apresentaram melhora da qualidade espermática ao retirarmos o plasma seminal. Já nos good coolers houve uma manutenção da qualidade espermática na presença do plasma seminal e uma diminuição da qualidade sem o plasma seminal. Além disso, observamos ao submeter as amostras ao teste-desafio, que as análises espermáticas se tornam mais confiáveis... / Abstract: A significant number of stallions do not respond in a satisfactory way to the cryopreservation process and that there are many factors involved. In order to elucidate the reasons why some animals have superior results in the spermatic cryopreservation processes, two experiments were conducted. In experiment I, the goal was to evaluate the action of oxidative stress and the consequences in the semen of stallions that were resistant and susceptible to the spermatic freezing process. The influence of the racial factor to the spermatic freezing process was also verified. In experiment II, the goal was to evaluate the influence of the seminal plasma presence on spermatic resistance in cooled semen of stallions considered as bad and good coolers. To evaluate seminal samples, computer analysis of the spermatic cinetic was done (CASA, Thorne Research - HTM IVOS), oxidative stress levels were assessed by thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), sperm DNA fragmentation (HALOMAX) and analysis of the translocation of membrane phospholipids, activated caspase indices and quantification of ROS with flow cytometry were done. In experiment I, there was no influence of the breed factor in relation to the sperm quality of the analyses that were done. Furthermore, the bad freezers stallions, that showed the most loss of seminal quality after spermatic freezing, presented higher rates of oxidative stress and spermatic DNA fragmentation. In experiment II, the stallions that were considered sensitive showed improvement of the sperm quality as the SP was removed. Furthermore, in the good coolers we observed the preservation of sperm quality in the presence of SP and a quality decrease in the samples without the SP. Additionally, we also observed the importance of the test challenge for the evaluation of the sperm analysis, because when submitted to stressful situations, the differences were evident. Keywords: Semen, cryopreservation, oxidative stress... / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: O surgimento das biotecnologias aplicadas ao sêmen equino, como a refrigeração e congelação, representaram um grande avanço para equinocultura, principalmente por permitir um melhor aproveitamento do ejaculado, otimizando a utilização de animais considerados geneticamente superiores. Entretanto a aplicação dessas técnicas imprime estresse térmico às células espermáticas, resultando em injúrias físicas e químicas, dentre elas uma elevação significativa na produção de espécies reativas do oxigênio (EROs). Quando em excesso, estes agentes instáveis são capazes de reagir e promover lesão às enzimas, lipídeos de membrana e ácidos nucleicos, reduzindo a viabilidade dos espermatozoides criopreservados. Desta maneira surge a necessidade de se introduzir elementos que desempenhem função antioxidante nos meios de refrigeração e congelação. A quercertina, um polifenol do grupo dos flavonoides, é considerada um poderoso antioxidante por reduzir o surgimento das principais EROs, quelar íons metálicos formadores de radicais livres e estabilizar a peroxidação lipídica. Apesar disto, a eficiência da aplicação deste antioxidante sobre o ejaculado equino durante o processo de criopreservação ainda é controversa e pouco referenciada, sendo necessário mais estudos para que se determine a influência de sua utilização no ejaculado de garanhões durante a refrigeração e congelação. / Abstract: The emergence of biotechnologies applied to the equine semen as cooling and freezing process represented a major breakthrough for Equine, especially for allowing a better use of the ejaculate, optimizing the use of genetically superior animals. However the application of these techniques induces thermal stress on sperm cells, resulting in physical and chemical injuries, among them a significant rise in the production of reactive oxygen species (ROS). These unstable agents when in excess, are able to react and promote damage to enzymes, lipid membrane and nucleic acids, thereby reducing the viability of cryopreserved sperm. Thus is required to introduce elements that perform antioxidant function in cooling and freezing extenders. The quercertina, a polyphenol of the flavonoids group, is considered a potent antioxidant by reducing the emergence of the main ROS, chelate metal ions producers of free radicals and stabilize the lipid peroxidation. Despite this, the efficiency of application of this antioxidant on the equine ejaculate during the process of cryopreservation is still controversial and poorly referenced, requiring further studies in order to determine if there is influence of their use in the ejaculate of stallions during cooling and freezing. / Mestre

Os objetivos do estudo foram: (a) relatar os procedimentos no condicionamento dos machos reprodutores no período pré-pubere de criação, averiguando o percentual de montas com sucesso, volume do ejaculado e concentração espermática. (b) Avaliar o efeito da suplementação de vitamina A em machos reprodutores nos parâmetros: volume, motilidade, concentração espermática e alterações morfológicas. A pesquisa foi desenvolvida no Laboratório de Pesquisa em Suínos, da FMVZ-USP, utilizando-se de animais de linhagens híbridas sintéticas, provenientes de uma granja reprodutiva localizada no sudoeste de São Paulo, local este, onde foi realizada a seleção dos animais a partir de 70 dias de idade e com peso médio de 25,16 Kg. Aos 117 dias de idade foi realizada a inspeção dos aprumos, testículos, bolsa prepucial e pênis, sendo selecionados 12 animais, que foram transferidos para o referido laboratório, aos 193 dias de idade, com peso médio de 147,00 Kg. O condicionamento iniciou-se aos 210 dias de idade dos animais, e, após 8 semanas, todos os reprodutores já estavam saltando no manequim, havendo a estabilização das colheitas. A partir deste período os valores das características, volume e concentração tornaram-se estáveis, demonstrando-se a homogeneidade dos animais que serviram para a fase experimental subsequente, relativa à avalição dos efeitos da vitamina A em animais submetidos a suplementação de vitamina A e controle. Nesta segunda fase experimental, foram verificadas diferenças significativas (p< 0,05) quanto à motilidade, concentração espermática quantificada pela câmara de Neubauer e alterações morfológicas, não havendo significância quanto à concentração total e volume do ejaculado. Houve significância (p< 0,05) quanto ao tempo nas 25 colheitas, semanais, quanto a concentração, quantificada na câmara de Neubauer e total, não se evidenciando interação x tratamento. Inferiu-se com o estudo que, dada à condição metabólica diferencial dos animais de genéticas híbridas sintéticas, novas averiguações devem ser direcionada para a relação nutrição x reprodução, devem ser averiguadas, uma vez que, os efeitos positivos da suplementação da vitamina A na espermatogênese foram destacados, principalmente nas características que mais se relacionam com a formação da célula espermática / The objectives of the study were: (a) Report the procedures for the conditioning of boars in the pre pubescent period of the breeding, by checking the percentage of succeed mounts, semen\'s concentration and volume. (b) Evaluate the effect of the vitamin A supplementation in boars, related to the parameters: volume, motility, semen concentration and changes in the morphology of the spermatozoids. The research was developed in the Swine Research Laboratory from the FMVZ, University of São Paulo, Pirassununga campus. In the first phase of the trial, which corresponded to the conditioning of the boars to the semen\'s collection process, 12 boars were utilized. The boars for the experiment came from a breeding swine operation located at the southeast of the SP state and were born from a hybrid synthetic genetic line. They were 70 days old and weighted an average of 25.16 Kg. At 117 days of age the inspection of the legs, testicles, prepuce\'s bag and penis was done. 12 animals among the 24 were selected and, at 193 days of age and weighting an average of 147 kg, they were transferred to the boars\' unit of the referred Laboratory. The conditioning process started at 210 days of age and 8 weeks after all the boars were already mounting on the dummy, which completed the phase of the collections\' stabilization. From this period, the values of the characteristics (volume and concentration) become stable, showing the homogeneity of the animals, which were used in the next experimental phase, related to the evaluation of the vitamin A effects on both treatments (Control and Vitamin A supplementation). In this second experimental phase we found significant differences (p< 0.05) considering motility, semen concentration determined by the Neubauer chamber and changes in the morphology of the spermatozoids, while no significant differences were found considering semen\'s concentration and volume. There was significance (P<0.05) considering time in the 25 collections, weekly collections, concentrations, Neubauer chambers and the total, while the interaction time x movement was not significant. The study lead us to conclude that due to the differential condition of the animals which were born from the present hybrid genetics, it is necessary to study the relationship nutrition x reproduction, once the positive effects of the vitamin A supplementation in the semen production was emphasized, mostly in the characteristics that are related to the formation of the sperm cells.

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Júnior / Resumo: O espermatozoide exige um fornecimento constante de energia para a manutenção de suas funções celulares e quando desafiado por processos de criopreservação do sêmen, sofrem danos irreversíveis. Para o desenvolvimento de técnicas que visam o aumento da longevidade espermática, é necessário considerar que mesmo em metabolismo basal, o espermatozoide necessita de substratos para garantir sua motilidade e poder fecundante após a ejaculação. Para atender suas demandas energéticas, estudos recomendam o uso de nutrientes exógenos, como o piruvato de sódio e a coenzima Q10 (CoQ10), substratos fundamentais na bioenergética celular. Visto a importância da refrigeração de sêmen em garanhões e o potencial destas substâncias em melhorar os parâmetros seminais atuando como substrato energético e antioxidante, respectivamente, o presente trabalho tem por objetivo abordar aspectos relacionados ao metabolismo espermático, bem como o papel do piruvato e CoQ10 visando minimizar os efeitos deletérios da refrigeração sobre a qualidade do sêmen equino. Foram adicionadas diferentes concentrações de piruvato de sódio e da CoQ10 ao sêmen de garanhões considerados “good coolers” (GC) e “bad coolers” (BC). Primeiramente, foram estabelecidas as concentrações mais eficazes de piruvato e CoQ10 no diluente de refrigeração BotuSêmen® (Botupharma Botucatu/SP Brasil) para preservar os parâmetros espermáticos na refrigeração a 5° C por até 48 horas. Foi utilizado 1 ejaculado de 25 garanhões das raças Quarto de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The spermatozoa require a constant supply of energy for the maintenance of their cellular functions and when challenged by processes of cryopreservation of the semen, they suffer irreversible damages. For the development of techniques that aim to increase sperm longevity, it is necessary to consider that even in basal metabolism, the spermatozoa require substrate to ensure their motility and fertilizing power after ejaculation. To attend their energy demands, studies recommend the use of exogenous nutrients, such as sodium pyruvate and coenzyme Q10 (CoQ10), key substrates in cellular bioenergetics. Considering the importance of semen cooling in stallions and the potential of these substances to improve seminal parameters acting as an energetic and antioxidant substrate, this review aims to address aspects related to cooling, as well as the role of sodium pyruvate and CoQ10 in minimizing the effects of cooling on the quality of equine semen. Different concentrations of sodium pyruvate and CoQ10 have been added to semen from good coolers (GC) and bad coolers (BC). First, the most effective concentrations of sodium pyruvate and CoQ10 in the BotuSêmen® extender (Botupharma Botucatu / SP Brazil) were established to preserve the sperm parameters at 5°C for up to 48 hours. Each ejaculate was split into 7 treatments, with sodium pyruvate and CoQ10 being added at concentrations of 1 mmol/l (P1), 2 mmol/l (P2), 3 mmol/l sodium pyruvate (P3), 25 µmol/l (Q25), 50 µmol/l (Q50) and 75 µmol... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Resumo: A composição dos lipídeos da membrana espermática e do plasma seminal estão entre os fatores que podem influenciar a capacidade fecundante do sêmen. Desta maneira, este estudo objetivou analisar as diferenças do perfil lipídico do ejaculado de bovinos da raça Nelore, resistentes e sensíveis à criopreservação. Foram utilizados 15 touros da raça Nelore para colheitas de sêmen utilizando eletroejaculador. Os ejaculados foram diluídos com meio convencional na concentração de 25x106 espermatozoides/palheta. Os animais foram divididos em dois grupos conforme a resistência pós-criopreservação, grupo A (Bad freezer, touros sensíveis à criopreservação) e grupo B (Good freezer, touros resistentes à criopreservação). O sêmen fresco foi analisado quanto morfologia realizada por microscopia de interferência diferencial (DIC), cinética espermática e integridade da membrana. Na pós-descongelação as amostras foram avaliadas quanto a cinética espermática, integridade das membranas plasmáticas e acrossomal, caspase ativa, peroxidação lipídica. A análise do perfil de lipídios foi realizada por espectrometria de massa MALDI-MS. Foi possível observar diferença no perfil lipídico dos espermatozoides e do plasma seminal entre os grupos, com maior abundância relativa dos íons m/z 704,59; m/z 804,59 e m/z 943,77 no grupo A nos espermatozoides. No plasma seminal houve maior abundância relativa de 34 íons lipídicos nos touros do grupo B. Assim sendo, conclui-se que existe diferença no perfil de lipídio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-07T17:20:00Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1688152 bytes, checksum: dea3857aba803e685276552e0efbb3a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T17:20:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1688152 bytes, checksum: dea3857aba803e685276552e0efbb3a4 (MD5) Previous issue date: 2000-07-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudou-se criopreservação do sêmen canino, utilizando dois diluidores e dois protocolos de resfriamento do sêmen, para avaliar o efeito desses sobre a qualidade espermática in vitro, após a congelação/descongelação. Os meios diluidores utilizados foram o Tris-citrato e o Tes-Tris e os procedimentos de resfriamento foram realizados em um congelador de células digital e em caixa de isopor. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal - DVT-UFV, utilizando-se três machos, submetidos a uma coleta de sêmen por semana, durante cinco semanas, totalizando quinze amostras, em cada delineamento experimental. Os testes in vitro aplicados às amostras de sêmen foram os de: avaliação da motilidade espermática progressiva, vigor espermático, avaliação da integridade da membrana plasmática e do acrossoma, por meio dos testes hipo-osmótico (HOS-T) e câmara úmida, respectivamente e avaliação da longevidade espermática, por meio do teste de termo-resistência rápido (TTR). A análise comparativa entre os meios diluidores evidenciou que o meio diluidor Tris-citrato foi superior (P<0,05) ao meio Tes-Tris, por ter obtido nos resultados de todos os testes in vitro, valores em torno de 15% mais altos. Concluiu-se, portanto, que o Tris-citrato foi mais eficiente em conservar a qualidade espermática, por ter mantido viável uma maior porcentagem de espermatozóides, após a criopreservação. Houve correlação positiva entre vários testes, indicando coerência entre os resultados. A análise comparativa dos protocolos de resfriamento demonstrou que não houve diferença (P>0,05) entre a caixa de isopor e o biocool, logo após o resfriamento. Após a descongelação, os resultados demonstraram que houve igualdade entre os protocolos quanto ao vigor espermático, ao HOS-T e a condição de acrossoma, havendo diferença (P<0,05) apenas na motilidade espermática após a descongelação e durante o teste de termo-resistência, que foram superiores quando o sêmen foi resfriado na caixa de isopor. A curva de resfriamento na caixa de isopor foi de, aproximadamente, -0,45°C/min. e no biocool de -0,55°C/ min., porém, na caixa de isopor a queda de temperatura não foi constante durante os 60 minutos do resfriamento, sendo que nos primeiros dez minutos a temperatura diminuiu 13°C. Parece que o perfil dessa curva favoreceu a manutenção das reservas energéticas dos espermatozóides, por terem tido seu metabolismo mais rapidamente diminuído. Os resultados dos testes para ambos os diluidores e ambos protocolos de resfriamento são compatíveis com os considerados normais para o sêmen criopreservado na espécie canina. / A study on different extenders and cooling systems on the canine semen was taken, in order to evaluate the effects on in vitro characteristics of cryopreserved spermatozoa. The extenders studied were Tris-citrate and Tes-Tris and the cooling systems were accomplished in a programmable cells freezer and in a polystyrene container. The experiment took place at the Animal s Reproduction Laboratory-DVT-UFV, where three stud dogs were collected weekly for five weeks for each experiment protocol. The in vitro evaluations applied to the semen samples were sperm motility and forward progression, plasm membrane and acrosome integrity, through hypo-osmotic swelling test and phase contrast microscopy, respectively and semen longevity, through the thermo resistance test. A comparative analysis between the extenders has showed that Tris-citrate was superior (P<0,05) to Tes-Tris because the results of all the in vitro evaluations after cryopreservation were 15% higher for the first compared to the second extender. It was concluded, therefore, that Tris-citrate was more xivefficient in preserving spermatozoa quality because it has maintained the viability of a larger percentage of them, after cryopreservation. The results of the tests are in agreement with the standard values for the freezing semen in dogs and there was also positive correlation among several semen evaluations, showing relationship among the results. The comparative analysis of the cooling systems has showed that there was no difference (P>0,05) between the programmable freezer and the polystyrene container, immediately after cooling and equilibration time. However, after freezing and thawing the results of forward progression, HOS-T and acrosome integrity was equal for both cooling systems but the motility and thermo resistance test was better (P<0,05) at polystyrene container. The cooling rate at this system was approximately -0,45°C/min. and at the programmable freezer was -0,55°C/ min.. The temperature fall was not constant at the polystyrene container and dropped faster on the beginning of the cooling time, it seems that this cooling rate at the polystyrene container favored the maintenance of spermatozoa energy sources. The tests results for both procedures were close to the standard values for the freezing semen in dogs.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-08-04T10:14:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520639 bytes, checksum: dc14b395e24975ee7ac9955dbe0f97bd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-04T10:14:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520639 bytes, checksum: dc14b395e24975ee7ac9955dbe0f97bd (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivou-se neste estudo verificar se a melatonina influencia a integridade estrutural da membrana plasmática, o acrosssoma, a produção de peróxido de hidrogênio e atividade mitocondrial dos espermatozoides caprinos criopreservados, bem como, verificar o potencial uso deste antioxidante em meio diluente comercial para criopreservação de sêmen. Foram utilizados dois machos adultos da raça Alpina e dois da raça Saanen. Foi utilizada vagina artificial obtendo-se sete ejaculados por animal. Após a coleta, fez-se a avaliação das características por meio de testes complementares. Em seguida, o sêmen foi diluído com os seguintes tratamentos: Botubov ® (T 1 ), Botubov ® + 1μM (T 2 ), Botubov ® + 1 mM Melatonina (T 3 ), Botubov ® + 2 mM Melatonina (T 4 ), Botubov ® + 3 mM Melatonina (T 5 ) e Botubov ® + 4 mM Melatonina (T 6 ). Em seguida foram avaliados a motilidade progressiva e vigor espermático. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL, que foram resfriadas a 5oC, durante três horas. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio durante 15 minutos. Após esse período, as palhetas foram imersas no nitrogênio para o congelamento final do sêmen. As partidas foram descongeladas em banho-maria a 37°C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos e homogeneizadas para as análises de motilidade e vigor espermáticos, teste de termorresistência e citometria de fluxo. No sêmen fresco, as características de motilidade e vigor mantiveram-se dentro de parâmetros normais. As médias de motilidade e vigor para o sêmen descongelado diferiram entre os tratamentos, para aqueles utilizaram melatonina a partir de 1 e 2mM, principalmente após o descongelamento nos tempos zero e 30 minutos, sendo observado diferenças ao longo de todo TTR (P < 0,05). A análise por citometria de fluxo, para quase todas as características, apresentou diferenças entre o tratamento controle e os demais tratamentos (P < 0,05) quando a concentração de melatonina excedeu valores entre 1 e 2 mM no diluente. Conclui-se que a melatonina, em elevadas concentrações, apresenta resultados insatisfatórios no congelamento de sêmen caprino e que sua adição nas concentrações de 1 μM no diluente não afetou qualquer parâmetro avaliado neste estudo. / The aim of this study was to verify whether melatonin affects the structural integrity of the plasma membrane, acrosssoma, the production of hydrogen peroxide and mitochondrial activity of sperm cryopreserved goats, as well as to investigate the potential use of this antioxidant in commercial diluent for semen cryopreservation. Two adult males of the Alpine race and two Saanen were used. For semen collection was used artificial vagina resulting in seven ejaculations per animal. After collection, made up the evaluation of the characteristics through additional tests. Then, semen was diluted with the following treatments: Botubov® (T1), Botubov® + 1μM (T2), Botubov® + 1 mM Melatonin (T3), Botubov® + 2 mM melatonin (T4), Botubov® + 3 Melatonin mM (T5) and Botubov® + 4 mM Melatonin (T6). They were then evaluated motility and sperm vigor in each treatment. The semen was packaged in 0.25 ml palettes, which were cooled to 5 ° C for three hours. The pre-freezing was performed in liquid nitrogen vapor for 15 minutes. After this period, the palettes were immersed in nitrogen for the final freezing of semen. The palettes were defrosted in a water bath at 37 ° C for 30 seconds, put into microtubes and homogenized for analysis of spermatic motility and vigor, heat resistance test and flow cytometry. In fresh semen, the motility and vigor remained within normal parameters. The average motility and vigor to the defrosted semen differ between treatments to those used melatonin from 1 and 2 mM, especially after defrosting at zero and 30 minutes, and observed differences throughout TTR (P <0, 05). The integrity of the plasma membrane and acrossomal, production of peroxides and sperm mitochondrial activity were assessed by flow cytometry and for almost all the features presented differences between control treatment and other treatments (P <0.05) when the concentration of melatonin exceeded values from 1 and 2 mM in diluent. It is concluded that the addition of melatonin, in high concentrations, shows unsatisfactory results in freezing goat semen and that the addition of melatonin in 1 uM concentrations in the diluent did not affect any of the parameters evaluated in this study.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-14Bitstream added on 2014-06-13T20:06:39Z : No. of bitstreams: 1 dellaqua_cpf_dr_botfmvz.pdf: 1556422 bytes, checksum: 1d36e424398f8b56c6af3fc18521061c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As biotécnicas de refrigeração e congelação podem causar danos irreversíveis à célula espermática devido ao estresse gerado pela queda de temperatura ou, no caso da criopreservação, pela formação de cristais de gelo intracelulares. Estas alterações resultam na diminuição da longevidade do espermatozóide no trato reprodutor da fêmea e, conseqüentemente, na queda dos índices de fertilidade. Sabendo-se que as alterações das características espermática afetam a viabilidade do sêmen sobre as diferentes formas de preservação seminal e que garanhões de diferentes taxas de fertilidade nem sempre apresentam diferenças significativas nas análises seminais padrões, faz-se necessário uma análise mais específica da células espermática, como a avaliação de vários parametros funcionais em células individuais, o que possivelmente reduziria as incertezas inerentes a previsão da fertilidade na avaliação in vitro do sêmen. Para comprovação desta hipótese três experimentos foram realizados. No experimento 1 o objetivo foi identificar e avaliar as principais modificações ocorridas nas características morfofuncionais do sêmen equino estocado a temperatura ambiente (18-22ºC) por um período de 12 horas. No experimento 2 o objetivo foi verificar a possibilidade de modular estas alterações através de duas temperaturas de refrigeração (5ºC e 15ºC), e, no experimento 3, o objetivo foi avaliar e verificar a relação destas alterações com os índices de fertilidade em sêmen congelado. Para os experimentos 1 e 2, três ejaculados de seis diferentes garanhões foram avaliados quanto a cinética espermática através da análise computadorizada do movimento espermático; para a avaliação morfofuncional foram avaliadas a integridade das membranas plasmática... / Cooling and freezing can cause irreversible damage to sperm cells due to the stress generated by the decrease in temperature or, in the case of cryopreservation, the formation of intracellular ice crystals. These changes result in decreased longevity of sperm in the female reproductive tract and, consequently, a decrease in fertility rates. The changes in sperm characteristics affect the viability of the semen, and these changes vary based on the different preservation techniques used to preserve the semen from different stallions. In addition, fertility rates do not always show significant differences in semen analysis patterns. Therefore, a more specific analysis of sperm cells is necessary. This analysis should include a functional assessment of multiple parameters in individual cells, which might reduce uncertainties in the prediction of fertility based on the in vitro evaluation of semen. To test this hypothesis, three experiments were performed. In experiment 1, the objective was to identify and assess the main characteristic morph functional changes in equine semen that is stored at room temperature (18-22°C) for a period of 12 hours. In experiment 2, the objective was to determine the possibility of modulating these changes using two refrigeration temperatures (5°C and 15°C). In experiment 3, the objective was to evaluate and compare the influence of these changes on fertility rates between semen at various temperatures and in frozen semen. For experiments 1 and 2, the sperm kinetics of three different ejaculates from six stallions were evaluated using a computerized analysis of sperm motility. For morphological and functional assessments, the following parameters were evaluated: plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, rate of DNA fragmentation, caspase activation and... (Complete abstract click electronic access below)