Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-14T17:53:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 729222 bytes, checksum: 9e0fad759a68ba07f6ac8df51dd3195f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T17:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 729222 bytes, checksum: 9e0fad759a68ba07f6ac8df51dd3195f (MD5) Previous issue date: 2016-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O aumento do uso da inseminação artificial (IA) em equinos com sêmen congelado necessita de estudos que possibilitem a melhora da qualidade dos espermatozoides criopreservados e diminua a variabilidade individual entre os garanhões quanto à congelabilidade dos ejaculados. Isto porque as taxas de fertilidade obtidas com o sêmen equino criopreservado são inferiores àquelas obtidas com o sêmen fresco e refrigerado dessa espécie e ao sêmen bovino criopreservado. Este estudo visou verificar a ação de diferentes crioprotetores adicionados ao diluente além da eficácia da solução coloidal Equicoll-SmallTM na filtragem do sêmen equino pós-descongelamento no intuito de se obter uma população espermática com menor concentração de patologias e com maior número de características favoráveis à fecundação. Foram utilizados quatro garanhões da raça Mangalarga Marchador, hígidos e com históricos reprodutivos normais. Após o descongelamento, as amostras de sêmen foram submetidas ou não à centrifugação com o Equicoll-SmallTM, e avaliadas por meio de sondas fluorescentes através da citometria de fluxo. A maioria dos parâmetros espermáticos mostrou melhora após a centrifugação em camada única (SLC) com o Equicoll-SmallTM (P<0,05). No pós-descongelamento as amostras de sêmen criopreservadas em diluentes com o crioprotetor glicerol mostraram piores resultados comparadas às amostras de sêmen criopreservadas em diluentes com outros crioprotetores (DMFA e DG) em relação à integridade de membrana plasmática e organização da bicamada lipídica (P<0,05). O uso do coloide propiciou a recuperação de uma população espermática com melhor integridade de membrana, maior organização da bicamada lipídica, menor potencial mitocondrial e menor integridade acrossomal (P<0,05). O rendimento espermático médio foi de 6,95 % (±0,91 %). Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que o uso de diluentes com os crioprotetores DMFA e DG mostraram ser mais eficazes em manter a viabilidade espermática in vitro em comparação ao diluente com o crioprotetor glicerol no pós-descongelamento. Além disso, o uso do Equicoll-SmallTM se mostrou eficaz na obtenção de uma população espermática viável, principalmente nas amostras de sêmen com maior porcentagem de crioinjúrias, porém seu rendimento espermático (concentração espermática final inseminante) pode ser um fator limitante para o uso desta técnica como rotina. / The use of artificial insemination (AI) in horses with frozen semen requires efforts to increase the quality of cryopreserved spermatozoa and decrease individual variability among stallions as theirs ejaculates freezeability. This is because of fertility rates obtained from cryopreserved stallion semen are lower than those obtained with fresh and cooled semen of this species and of cryopreserved bovine semen. This study aimed to verify the action of different cryoprotectants added to the diluent in addition to the effectiveness of the colloidal solution Equicoll-SmallTM, in filtering the stallion semen post-thawing in order to obtain a sperm population with lower concentrations of pathologies and with more favorable fertilization characteristics. Four healthy stallions of Mangalarga Marchador breed with normal reproductive historic were used. After thawing the semen samples were subjected or not to centrifugation with Equicoll-SmallTM and evaluated by fluorescent dyies via flow cytometry. Most sperm parameters showed improvement after Single Layer Centrifugation (SLC) with Equicoll-SmallTM (p<0.05). After thawing the treatment with glycerol showed worse results compared to others cryoprotectants (dimethylformamide and dimethylformamide+glycerol) in relation to the integrity of the plasma membraneand organization of the lipid bilayer (P<0.05). SLC recovered a sperm population with better membrane integrity, better organization of the lipid bilayer, lower mitochondrial potential and lower acrosomal integrity (P<0.05). The average of the sperm yield was 6.95% (±0.91%). Based on these results, it is concluded that the treatments with dimethylformamide and dimethylformamide + glycerol are shown to be more effective in maintaining the sperm viability in vitro when compared to the glycerol after thawing. In addition, it was concluded that the SLC with Equicoll-SmallTM is effective in obtaining a viable sperm population, especially in those samples that show more cryoinjuries, but its sperm yield can be a limiting factor for the technique.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-28T17:29:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1101547 bytes, checksum: 22262285235154782cb907f89229e0d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T17:29:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1101547 bytes, checksum: 22262285235154782cb907f89229e0d2 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Com este estudo objetivou-se avaliar o perfil proteômico total e diferencial do plasma seminal de garanhões da raça Mangalarga Marchador, que apresentam variações na motilidade espermática do sêmen após descongelamento, visando identificar proteínas candidatas a marcadores de congelabilidade. Foram utilizados quatro garanhões de fertilidade comprovada, divididos em dois grupos, com dois animais em cada grupo: T1: alta congelabilidade (n= 4 ejaculados) e T2: baixa congelabilidade (n= 4 ejaculados), sendo cada tratamento composto por dois ejaculados de cada garanhão. As análises físicas do sêmen foram realizadas antes e após a criopreservação espermática. Os grupos estudados foram divididos pós-descongelamento pela avaliação da motilidade espermática total. O perfil protéico do plasma seminal foi obtido por eletroforese bidimensional, as análises de imagem dos géis foram realizadas pelo programa ImageMaster 2D Platinum 6.0 (GE Healtcare ® ) e a identificação das proteínas foi por espectrometria de massas usando MALDI-TOF/TOF, com o software Mascot Daemon para a busca em banco de dados. A validação das proteínas identificadas entre os tratamentos foi realizada pelo programa SCAFFOLD (95%). Os dados foram analisados pela ANOVA com 5 % de probabilidade de erro, correlações simples de Pearson e análise de regressão linear. Observou-se diferença (p<0,05) em relação à motilidade espermática total do sêmen fresco e pós-descongelamento. No perfil protéico identificou-se 5 famílias de proteínas (HSP-1, HSP-2, CRISP-3, Calecreína e Albumina sérica). Destas famílias, algumas proteínas se apresentaram com diferenças em abundância (p<0,05) entre os grupos estudados, em que quatro destas podem ser consideradas possíveis candidatas a marcadores de congelabilidade (HSP-1: spot 175; HSP-2: spot 39; CRISP-3: spot 66 e 166). Conclui-se então que os garanhões da raça Mangalarga Marchador apresentam variação individual ao processo de criopreservação do sêmen e possuem possíveis proteínas candidatas a marcador de congelabilidade para raça. / This study aimed to evaluate the total and differential proteomic profile of the seminal plasma of stallions of Mangalarga Marchador breed that presented variations in sperm motility after thawing, intending to identify candidate proteins as freezability markers. Four proven fertility stallions were used and splited in two groups with two animals in each group: T1: high freezability (n= 4 ejaculates) and T2: low freezability (n= 4 ejaculates) with two ejaculates of each stallion in each treatment. Semen analysis were made before and after criopreservation. The studied groups were divided after thawing by the evaluation of total sperm motility. The protein profile of the seminal plasma was obtained by bidimensional electrophoresis. The analyses of the images of the gels were performed by the ImageMaster 2D Platinum 6.0 (GE Healtcare ® ) program and the proteins identification were made by the mass spectrometry using MALDI-TOF/TOF with the software Mascot Daemon for database search. The validation of identified proteins between treatments was performed by SCAFFOLD (95%) program. The data were analyzed by ANOVA, Pearson's simple correlations and linear regression analysis with 5 % of error probability. Differences were observed (p<0.05) in relation to total sperm motility of fresh and after thawing semen. At protein profile, 5 protein families (HSP-1, HSP-2, CRISP-3, Kallikrein and Serum albumin) were identified. Of these families some proteins presented differences in abundance (p<0.05) between studied groups in which four of them can be considered as possible markers candidates of semen freezability (HSP-1: spot 175; HSP-2: spot 39; CRISP-3: spot 66 and 166). It can be concluded that stallions of Mangalarga Marchador breed present individual variation to semen cryopreservation process and have possible proteins as markers candidates of semen freezability.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-06T17:32:34Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 297886 bytes, checksum: f655fea34ead7fe70fe6945406d4a453 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T17:32:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 297886 bytes, checksum: f655fea34ead7fe70fe6945406d4a453 (MD5) Previous issue date: 2001-03-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo do presente experimento foi estudar os efeitos da heterose sobre a idade e peso corporal à puberdade e à maturidade sexual, os parâmetros reprodutivos durante as fases pré-puberal, puberal e maturidade sexual, bem como a interferência de diversas composições genéticas na caracterização dos estádios de maturação sexual em animais compostos Montana Tropical. Utilizou-se 140 touros, sendo 12 adaptados e 128 Montana Tropical que formavam 8 grupos de diferentes composições genéticas. Os animais foram criados em condições de pastagens com suplementação no período de maio até julho de 1999, posteriormente os mesmos foram confinados durante o período de 02/08 a 07/12/99, quando então passaram a ser manejados somente em regime de pastagem. O período experimental compreendeu a idade média de 11,5 a 17,5 meses. A puberdade e a maturidade sexual foram determinadas por meio de características ponderais e características físicas e morfológicas do sêmen. A puberdade foi alcançada em média aos 12,70±1,62 mês de idade, quando os animais pesavam 349,24±49,40 kg. Neste período os animais apresentaram perímetro escrotal (pe) de 28,71±2,60 cm, volume do ejaculado (vol) de 9,31±3,37 ml, turbilhonamento (turb) de 0,18±0,48 (0-5), motilidade espermática progressiva (mot) de 52,52±15,20 %, vigor (vig) de 2,41±0,74 concentração espermática no ejaculado (cejac) de 489±898,10, (0-5), defeitos espermáticos maiores (dm) de 54,12±28,42 %, defeitos espermáticos menores (dmen) de 27,67±17,60 % e defeitos espermáticos totais (dt) de 81,80±28,04 %. Não houve diferença (P<0,05) entre os animais dos diferentes grupamentos genéticos. A maturidade sexual foi alcançada em média com 13,83 ± 1,58 mês de idade, quando os animais apresentavam peso de 369,91 ± 45,74 kg, pe de 30,12±2,63 cm, vol de 9,39±4,20 ml, turb de 0,86±1,12 (0-5), mot de 62,16±13,98 %, vig de 3,10±0,84 (0-5), cejac de 1582,01±1726,91, dm de 9,95±4,84 %, dmen de 8,90±4,10 % e dt de 18,85±7,04 %. Estes resultados demonstram efeito positivo da heterose sobre a precocidade sexual e desenvolvimento ponderal dos animais e a homogeneidade do grupo, apesar das diferentes composições genéticas. Não houve diferença de médias registradas para características estudadas entre os animais dos diferentes grupamentos genéticos (P>0,05), com exceção das médias para defeitos espermáticos maiores, que diferiram (P<0,05) na ocasião da maturidade sexual. / The aim of this study was to verify heterosis effects on age and weight at puberty and sexual maturity, catacterize reprodutive aspects during pre puberal, puberal and sexual maturity phases and verify different genetic compositions effects on sexual maturity phases in Montana Tropical composite cattle. This experiment was realized with 140 bulls, being 12 adapted and 128 Montana Tropical ones, distributed in 8 groups of different genetic composition. Animals were raised under pasture and supplementation during May, 1999 to July 1999. After that, they were confined from 02/08 to 07/12/1999. After that they were raised only under pasture. The experimental period was comprehended between 11,5 to 17,5 months of age. Puberty and sexual maturity were determined by growth traits and phisical and morphological semen traits. Puberty was reached around 12,7+1,62 months of age, when animals weight was 349,24+49,40 Kg. In this period, animals’ scrotal perimeter (pe) was 28,71+2,60 cm, semen volume (vol): 9,31+3,37 ml, turbilhonamento (turb): 0,18+0,48 (0-5), sperm progressive motility (mot): 52,52+15,20%, vigor (vig): 2,41+0,74 (0-5), sperm concentration per ejaculates (cejac): 489+898,10, major sperm deffects (dm): 54,12+28,42, minor sperm deffects (dmen): 27,67+17,60 and total sperm deffects (dt):81,80+28,04%. There was no difference (P<0,05) among genetic groups. Sexual maturity was reached around 13,83+-1,58 months of age, when body weight was 369,91+45,74 kg, pe: 30,12+2,63 cm, vol: 9,39+4,2 ml, turb: 0,86+1,12 (0-5), mot: 62,16+12,98%, vig: 3,10+0,84 (0 -5), cejac: 1582,01+1726,92, dm: 9,95+4,84%, dmen: 8,90+4,10% and dt: 18,85+7,04%. These results show the positive effects of heterosis on sexual precocity and growth on these animals and on homogeneity of the group , instead of the different genetic compositions. There was no differences on the averages for the traits analysed among the genetic groups (P>0,05), except for the averages for major sperm deffects, that were different (P<0,05) at sexual maturity.

ALENCAR, Jôsy Maria Arruda de. Proteômica do plasma seminal e expressão gênica e localização da ngf e seus receptores (TRK1 e NGFR) no sistema genital de coelhos. 2016. 314 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2016. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-07T17:36:58Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jmaalencar.pdf: 20052410 bytes, checksum: 1881afb6d16896350a590efc7fdcb290 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-24T23:35:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jmaalencar.pdf: 20052410 bytes, checksum: 1881afb6d16896350a590efc7fdcb290 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-24T23:35:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jmaalencar.pdf: 20052410 bytes, checksum: 1881afb6d16896350a590efc7fdcb290 (MD5) Previous issue date: 2016 / The aim this study were (i) to map and identify proteins in seminal plasma of New Zealand white rabbits strain, using the techniques of two-dimensional electrophoresis coupled to mass spectrometry and to estimate associations between these proteins with sperm parameters and (ii) characterize expression of the nerve growth factor polypeptide beta ( -NGF) and its cognate neurotrophic receptor tyrosine kinase type 1 (NTRK1), and nerve growth factor receptor (NGFR) at gonads and sex glands in adult New Zealand white rabbits as well as the NGF concentration in seminal plasma of sexually mature animals, using RT - PCR and immunohistochemistry. Also was measured the NGF concentration in the blood and seminal plasma by ELISA. Study 1 was performed at Federal University of Ceará, in Fortaleza-Ce. Semen samples were collected from 18 adult rabbits, using an artificial vagina. After collecting proceeded to the evaluation of semen quality parameters: total motility, individual progressive motility, sperm concentration, sperm morphology and functional tests: membrane integrity (HOST), acrosomal integrity and vitality. The seminal plasma was obtained by centrifugation of semen, and subjected to two-dimensional electrophoresis. Gels were stained with colloidal Coomassie, scanned and analyzed in PDQuest application. The individual spots were excised from the gels, digested with trypsin, and submitted to mass spectrometry (ESI-QUAD-TOF) to identification. The results were subjected to statistical analysis to verify the existence of associations between the presence and / or intensity of the spots present in the protein maps of seminal plasma with the semen quality parameters. The associations between the parameters of ejaculated sperm and the expression of seminal plasma proteins of rabbits were estimated by multiple regression models using the REG procedure of SAS statistical application (v.9.0, 2002) with STEPWISE selection. 232 ± 69.5 spots/gel were detected with 34 spots consistently present in all gels. These 34 spots corresponded to 15% of the total number of spots, representing 32% of the optical intensity of all the spots. Mass spectrometry identified approximately 95% of the detected spots (identified: 220 spots; analyzed: 232 spots), which corresponded to 87 different proteins. The most abundant proteins were the annexins, zeta-globin, lipocalin, FAM 115 protein and a serpins cluster. Other proteins also have been identified, such as transferrin, heat shock protein, glutathione transferase and others. The NGF (protein nerve growth factor) presence also has been identified which has been reported in other species such as ovulation induction factor. This 87 proteins identified in seminal plasma of rabbits participate mainly of biological processes associated with cellular processes (65.25%), regulation (64.25%) and response to stimuli (22.9%). Significant associations were observed between the proteins identified in seminal plasma of rabbits with sperm evaluated parameters such as individual progressive motility, sperm viability, cells with morphology and functional membranes have been associated with specific proteins. Associations were observed for several proteins with the same sperm parameter. According to literature, this is first report about the proteome of seminal plasma of rabbits and its role on the seminal parameters. Knowledge of these proteins contributes to a better understanding of the regulatory mechanisms of seminal plasma on sperm function in rabbits. Study 2 was conducted at Università Degli Studi di Perugia in the city of Perugia-Pe, Italy. It was evaluated the expression of NGF protein that was previously identified during study 1. The immunoreactivity and gene expression of NGF and cognate receptors were detected in testis, prostate and seminal vesicle. The highest levels of NGF and NTRK1 transcripts were found in prostate, while intermediate expressions were found in testis. NGFR transcripts were expressed at the same level on both the testis and prostate, and were more abundant than in seminal vesicles. The widespread distribution of NGF in all glandular cells of the prostate, coupled with its high abundance of mRNA on confirm that the prostate is a major source of this neurotrophin in rabbits. In conclusion, the present data suggest that NGF is involved in developmental system and spermatogenesis of testis rabbits and that NGF can act as a potential factor for induction of ovulation, being abundantly present in seminal plasma. / Os objetivos deste estudo foram (i) mapear e identificar as proteínas do plasma seminal de coelhos da raça Nova Zelândia Branca, utilizando as técnicas de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa e estimar associações entre essas proteínas com os parâmetros espermáticos e (ii) caracterizar a expressão do fator de crescimento nervoso, poliptido beta ( -NGF), e os seus receptores cognatos neurotróficos da tirosina-quinase de tipo 1 (NTRK1) e receptor fator de crescimento nervoso (NGFR) nas gônadas e glândulas sexuais de coelhos da raça Nova Zelândia Branca, bem como as concentrações de NGF no plasma seminal de animais sexualmente maduros, utilizando as técnicas de RT - PCR e imunohistoquímica. Também foi dosada a concentração da NGF no sangue e no plasma seminal através da técnica de ELISA. O estudo 1 foi realizado na Universidade Federal do Ceará, na cidade de Fortaleza-Ce. Foram coletados amostras de sêmen de 18 coelhos adultos, utilizando- se uma vagina artificial. Após a coleta procedeu-se a avaliação dos parâmetros qualidade seminal: motilidade, vigor, concentração espermática, morfologia espermática e os testes funcionais: integridade de membrana, integridade acrossomal e vitalidade. O plasma seminal foi obtido pela centrifugação do sêmen, e submetido à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo PDQuest. Os spots foram cortados individualmente dos géis, digeridos com tripsina, e submetidos à identificação por espectrometria de massa (ESI- QUAD-TOF). Os resultados obtidos foram submetidos a avaliação estatística para verificar a existência de associações entre entre a presença e/ou intensidade dos spots presentes nos mapas protéicos do plasma seminal com os parâmetros de qualidade seminal. As associações entre os parâmetros dos espermatozoides ejaculados e a expressão das proteínas do plasma seminal dos coelhos foram estimadas por modelos de regressão múltipla usando o procedimento REG do aplicativo estatístico SAS (v.9.0, 2002) com a seleção STEPWISE. Foram detectados 232 ± 69,5 spots protéicos por gel, com 34 spots presentes consistentemente em todos os géis. Esses 34 spots corresponderam a 15 % do total do número de spots, representando 32 % da intensidade óptica de todos os spots. A espectometria de massa identicou aproximadamente 95% dos spots detectados (220 spots de um total de 232), que corresponderam a 87 proteínas diferentes. As proteínas mais abundantes foram as anexinas, zeta-globina, lipocalinas, proteina FAM 115 e um grupamento de serpinas. Outras proteínas também foram identificadas, tais como: transferrina, heat shock protein, glutationa transferase, entre outras. Também foi identificada apresença da proteína fator de crescimento nervoso (NGF) que tem sido relatada em outras espécies como fator de indução à ovulação. As 87 proteínas identificadas no plasma seminal de coelhos participam principalmente dos processos biológicos associados a processos celulares (65,25 %), regulação (64,25 %) e resposta a estímulos (22,9 %). Foram observadas associações significativas entre as proteínas identificadas no plasma seminal de coelhos com os parâmetros espermáticos avaliados,tais como vigor, número de células viáveis, morfologia espermática e células com membranas funcionais foram associados com proteínas específicas. Foram observadas associações de várias proteínas com um mesmo parâmetro espermático. De acordo com a literatura, este representa o primeiro relato sobre o proteoma do plasma seminal de coelhos e seu papel sobre os parâmetros seminais. O conhecimento dessas proteínas contribuirá para uma melhor compreensão dos mecanismos de regulação do plasma seminal sobre a função espermática em coelhos. O estudo 2 foi conduzido na Università Degli Studi di Perugia, na cidade de Perugia-Pe, Itália. Foi avaliada a expressão da proteína NGF que foi previamente identificada no estudo 1. A imunorreatividade e a expressão gênica da NGF e os seus receptores cognatos foram detectados nos testículos, próstata e vesícula seminal. Os níveis mais elevados de NGF e NTRK1 transcritos foram encontrados na próstata, enquanto expressões intermediárias foram encontradas no testículo. NGFR transcritos foram expressos nos mesmos níveis em ambos os testículos e da próstata e eram mais abundantes do que nas vesículas seminais. A distribuição generalizada de NGF em todas as células glandulares da próstata, juntamente com a sua abundância de RNAm relativo, confirmam que a próstata é das principais fontes desta neurotrofina em coelhos. Em conclusão, os presentes dados sugerem que o sistema NGF está envolvido no desenvolvimento testicular e espermatogênese de coelhos e que o NGF pode atuar como um potencial fator de indução à ovulação, sendo abundantemente presentes no plasma seminal.

RÊGO, João Paulo Arcelino do. Proteínas do plasma seminal e das células espermáticas de touros Bos indicus das raças brahman e guzerá associadas com os parâmetros seminais. 2014. 248 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-08T19:23:44Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_jparego.pdf: 4256300 bytes, checksum: ab05da85c9d9b6cb0dae767b2a1693c2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-25T21:40:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_jparego.pdf: 4256300 bytes, checksum: ab05da85c9d9b6cb0dae767b2a1693c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T21:40:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_jparego.pdf: 4256300 bytes, checksum: ab05da85c9d9b6cb0dae767b2a1693c2 (MD5) Previous issue date: 2014 / The aim of this work was to study seminal plasma and whole sperm proteins and their association with sperm morphology and methods of semen collection and cryopreservation in Bos indicus bulls using a proteomics approach . Seminal plasma proteins were separated by two-dimensional electrophoresis or diferential gel electrophoresis and identified by mass spectrometry gel. Firstly, we described the seminal plasma proteome of Bos indicus bulls, identified the Binder of Sperm Proteins as the more abundant proteins in seminal fluid, while the spermadhesins formed the second group with higher expression. Positive and negative associations were found between seminal plasma proteins and the percentage of morphologically normal spermatozoa constituing possible molecular markers of this characteristic. In other hand, differences were identified in ejaculate volume and seminal plasma protein profile of Bos indicus bulls subjected to different methods of semen collection (internal artificial vagina and electroejaculation). Based on the analysis of two-dimensional gels, 22 spots had larger volumes in samples collected by internal artificial vagina, corresponding to 21 proteins. In contrast, 33 spots had larger volumes of samples collected by electroejaculation corresponding to 26 differents proteins. The proteins with great volume in samples obtained by internal artificial vagina and electroejaculation had epididymal and accessory sex glands origin, respectively. In the present study, others associations have been made among protein expression in seminal plasma and sperm cells and semen parameters after cryopreservation in Bos indicus bulls. The animals had not differences between body weight, scrotal circumference and seminal parameters pre-freezing. After cryopreservation, the semen parameters were analyzed by computer system (CASA) and the animals were divided into groups of low and high freezability. In the high freezability group were more expressed three proteins of seminal plasma and five proteins of sperm. For the group of low freezability were more expressed six different seminal plasma proteins. Regression models adopted for the intensities of the spots in the seminal plasma and sperm cells, as well as analysis of protein-protein interactions, indicate that most of the proteins inversely associated with post -thaw sperm viability may be expressed as a response to an oxidative stress and/or microbial attack before the semen cryopreservation of animals with low freezability. These parameters could not be detected by conventional sperm analysis. This results obtened by applying of the proteomics approach, could serve as guideline for future researchs aimed to identifed molecular markers of reproductive processes based on the expression of proteins in seminal plasma and sperm cells of Bos indicus bulls. / O objetivo do presente trabalho foi realizar um estudo sobre as proteínas do plasma seminal e dos espermatozoides e suas associações com morfologia espermática e com métodos de coleta e criopreservação de sêmen de touros Bos indicus das raças Brahman e Guzerá, utilizando uma abordagem proteômica. Foram coletadas amostras de sêmen e as proteínas do plasma seminal foram separadas através de eletroforese bidimensional ou eletroforese bidimensional em gel diferencial e identificadas por espectrometria de massa. O proteoma do plasma seminal dos touros Bos indicus foi descrito identificando as Binder of sperm proteins como as proteínas mais abundantes no fluido seminal, enquanto que as spermadhesins formaram o segundo grupo com maior expressão. Foram encontradas associações positivas e negativas entre as proteínas do plasma seminal e a porcentagem de espermatozoides morfologicamente normais constituindo possíveis marcadores moleculares desta característica. Em outro aspecto, foram identificadas diferenças no volume do ejaculado e no perfil proteico do plasma seminal touros Bos indicus submetidos a diferentes métodos de coleta de sêmen (vagina artificial interna e eletroejaculação). Baseado nas análises dos géis bidimensionais, 22 spots tiveram volumes maiores nas amostras coletadas por vagina artificial interna, correspondendo a 21 proteínas. Em contrapartida, 33 spots correspondendo a 26 proteínas tiveram maiores volumes nos géis de amostras coletadas por eletroejaculação. As principais proteínas com maior expressão em amostras obtidas por vagina artificial interna e eletroejaculação eram de origem epididimária e das glândulas sexuais acessórias, respectivamente. No presente trabalho, ainda foram feitas associações entre a expressão de proteínas no plasma seminal e nas células espermáticas com os parâmetros do sêmen pós-criopreservação em touros Bos indicus da raça Guzerá. Os animais apresentaram, em média, peso corporal, circunferência escrotal e parâmetros seminias pré-criopreservação do sêmen sem diferença estatística. De acordo com os parâmetros espermáticos pós-criopreservação obtidos pelo sistema computadorizado de análise de sêmen os animais foram divididos em grupos de alta e baixa congelabilidade. Três proteínas do plasma seminal e cinco dos espermatozoides foram mais expressas no grupo de alta congelabilidade. Outras seis proteínas do plasma seminal foram mais expressas no grupo de baixa congelabilidade. Os modelos de regressão adotados para as intensidades dos spots do plasma seminal e das células espermáticas, bem como as análises de interações proteína-proteína indicam que a maioria das proteínas inversamente associadas com a viabilidade espermática pós-descongelação pode ser expressa como uma resposta a um estresse oxidativo e/ou ataque microbiano antes da criopreservação de sêmen de animais do grupo de baixa congelabilidade não detectado pelas análises convencionais do sêmen. Através da utilização de uma abordagem proteômica, os resultados encontrados no presente trabalho podem servir de orientação para futuras pesquisas que visem identificar marcadores moleculares de processos reprodutivos baseado na expressão de proteínas no plasma seminal e nas células espermáticas de touros Bos indicus.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:06:45Z : No. of bitstreams: 1 dellaquajr_ja_dr_botfmvz.pdf: 670093 bytes, checksum: e66aa1acd7f261d1156564e3e811bc30 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o intuito de verificar a ação do acetato de prednisolona e do plasma seminal sobre a resposta inflamatória uterina de éguas inseminadas com sêmen congelado, desenvolveu-se os seguintes procedimentos: inicialmente 36 éguas foram aleatoriamente divididas em 6 grupos experimentais: G1 grupo controle, éguas não inseminadas; G2 éguas inseminadas com 800 x 106 de espermatozóides in natura; G3 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação; G4 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + adição de 20 mL de plasma seminal; G5 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + corticóide-terapia; G6 éguas inseminadas com sêmen congelado 800 x 106 de espermatozóides viáveis pré-congelação + adição de 20 mL de plasma seminal + corticóide-terapia. A corticóide-terapia foi iniciada quando os animais apresentavam folículos de 35 mm e edema uterino, neste momento, se efetuava a administração da gonadotrofina coriônica humana (hCG) e concomitantemente 0,1 mg/kg de acetato de prednisolona por via intramuscular (Predef ), e repetia-se o corticóide a cada 12 horas até a ovulação. Os animais dos grupos tratados com corticóide G5 e G6, demonstraram um decréscimo significativo na função neutrofílica, frente ao teste da redução do tetrazólio nitroazul (NBT). O plasma seminal não alterou a intensidade da resposta inflamatória em nenhum dos testes realizados. No teste de fertilidade foram realizados dois grupos de inseminação, no primeiro, foram utilizadas éguas sem histórico de resposta inflamatória intensa pós-inseminação e não foi vista diferença estatística nos resultados de prenhes. Entretanto, no segundo teste de fertilidade, onde foram usadas éguas problemas, com... . / Aiming to verify the action of prednizolone acetate and of seminal plasma on the uterine inflammatory response of mares inseminated with frozen semen, the following procedures were developed. Thirty six mares were randomly allocated in 6 experimental groups: G1 control groups, with non-inseminated mares; G2 mares inseminated with 800 x 106 in natura sperm cells; G3 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells; G4 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + 20 mL seminal plasma; G5 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + cortico-therapy; G6 mares inseminated with 800 x 106 frozen-thawed sperm cells + 20 mL seminal plasma + cortico-therapy. The therapy with 0,1 mg/kg of prednizolone acetate (IM) (Predef ), was performed when the mares presented follicles with 35 mm and uterine edema. At this moment the ovulation was induced with human corionic gonadotrophin (hCG), and the corticoid administrations repeated every 12 hours until ovulation. In G5 and G6 when the animals were treated with corticoid, it was observed a significant decrease on the neutrophil function, analyzed by the tetrazolio nitroazul test (NBT). The infusion of seminal plasma did not modify the uterine inflammatory response in any of the performed tests. For the fertility test, two groups of inseminated mares were used. On the first one, mares with no history of intense uterine inflammatory response after insemination were used. No statistic differences were observed on pregnancy results. However, on the second group of fertility test when problem mares, with history of post-insemination endometritis, were used, the corticoid-treated group presented a significant high pregnancy rate when compared with the control group (67% and 0% respectively). The cortico-therapy showed to be a safe method with no side effects on treated animals, representing an adequate choice for animals... (Complete abstract, click electronic address below).

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-08-27T15:57:16Z : No. of bitstreams: 1 000777123.pdf: 900554 bytes, checksum: f64f40c857c81a9b6e9e00e1c3faa069 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi caracterizar o sêmen de Pimelodus britskii através de diferentes métodos de coleta e doses hormonais. O experimento foi executado em dois períodos reprodutivos, novembro/2011 a março/2012 e outubro/2012 a março/2013. No primeiro período reprodutivo (Experimento 1) em todos os meses 12 peixes foram divididos em dois grupos, um grupo induzido com Extrato Hipofisádo de Carpa-EHC (3,0 mg.kg-1) e um grupo sem indução hormonal, após 240 unidades térmicas acumuladas-UTAs os peixes dos dois grupos foram eutanasiados e tiveram seus testículos macerados. No segundo período reprodutivo (Experimento 2) 30 peixes foram divididos em cinco grupos para comparação de diferentes doses de EHC e Gonadotrofina Coriônica humana-hCG na espermiação (T1: controle; T2: 3,0 mg.kg-1EHC; T3: 0,5 mg.kg-1+3,0 mg.kg-1EHC; T4: 0,5mg.kg-1+7,0 mg.kg-1EHC; T5: 200UI.kg-1hCG), sendo que neste período os mesmos peixes foram utilizados todos os meses, e após 240 UTAs o sêmen foi coletado através de massagem abdominal. Foram avaliadas a motilidade e velocidade espermática por meio do software CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). As variáveis seminais por meio do Statistica 7.0. Por meio da maceração, verificou-se alterações na cor (branco a amarelado), pH (6 a 7) e concentração espermática (11,9x109±4,16x109 a 9,15x109±3,55x109 espermatozoides/mL-1). O volume mostrou relação entre meses e tratamentos (p<0,05). Para todos os exemplares a motilidade foi superior em nov/2011, diminuindo gradativamente até fev/2012. O mesmo ocorreu em relação aos valores dos IGS (p<0,05), mostrando a ação da indução hormonal no volume seminal. Os peixes do Experimento1 liberaram volume reduzido de sêmen ... / The aim of this study was to characterize the semen Pimelodus britskii through different collection methods and hormonal doses. The experiment was run in two reproductive periods, November/2011 to March/2012 and October/2012 to March/2013. In the first breeding season (Experiment 1 ) in all months 12 fish were divided into two groups, one experimental group with Carp Pituitary Extract - EHC (3.0 mg.kg- 1) and a group without hormonal induction, after 240 units accumulated thermal-UTA fish from both groups were euthanized and had their macerated testes. In the second reproductive period (Experiment 2 ) 30 fish were divided into five groups for comparison of different doses of human Chorionic Gonadotropin-hCG and EHC in spermiation (T1: Control, T2: 3,0mg.kg-1 EHC, T3: 0,5 mg.kg-1 +3,0 mg.kg-1 EHC , T4: 0,5 mg.kg-1 +7,0 mg.kg-1 EHC , T5: 200UI.kg-1 hCG ) , and in this period the same fish were used every month, and after 240 UTA semen was collected by abdominal massage. Motility and sperm velocity were evaluated through the CASA software (Computer Assisted Sperm Analysis). The seminal variables using Statistica 7.0. Through the soaking, there was color change (white to yellow), pH (6 to 7) and sperm concentration (11,9x109±4,16x109 to 9,15x109±3,55x109 spermatozoa/mL-1). The volum months showed relationship between treatments (p<0,05). For all copies motility was higher in November/2011, decreasing gradually until February/2012. The same occurred with the values of the IGS (p<0,05), showing the action of hormonal induction in seminal volume ...

A criopreservação de sêmen é um processo de grande estresse celular, que impõe aos espermatozóides condições extremamente desfavoráveis à manutenção de sua viabilidade. Diversos estudos propõem que a produção excessiva de espécies reativas de oxigênio e a perda da capacidade antioxidante do sêmen potencializam os efeitos prejudiciais dessa biotécnica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as atividades antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas e a concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), como indicador de lipoperoxidação do sêmen eqüino, durante a criopreservação. Quinze ejaculados de seis garanhões comprovadamente férteis da raça Crioula, foram submetidos a criopreservação, utilizando-se diluente comercial à base de citrato-Hepes, gema de ovo e leite. Foram avaliadas as atividades das enzimas catalase, glutationa peroxidase e superóxido dismutase; o potencial antioxidante total e a concentração de TBARS no sêmen fresco, diluído e congelado. Uma maior atividade das três enzimas estudadas foi observada no sêmen fresco em relação ao sêmen diluído e congelado (p<0,0001), não havendo diferença entre os dois últimos (p>0,05). Não houve diferença na atividade antioxidante não enzimática nas três fases estudadas (p>0,05). Não foi observada nenhuma associação tanto das defesas antioxidantes enzimáticas como das não enzimáticas com a qualidade do sêmen congelado. A queda na motilidade do sêmen congelado pode ser parcialmente explicada pelo aumento da peroxidação dos lipídios do sêmen. / Semen cryopreservation is a stressful procedure which exposes spermatozoa to harmful conditions leading to reduced cell viability. Several studies propose that reactive oxygen species overproduction and decreased antioxidant capacity of semen may increase the damaging effects of the technique. The aim of this work was to evaluate the enzymatic and nonenzymatic antioxidant activity, as well as the concentration of thiobarbituric acid reactive substances (TBA-RS) as and indicator of lipid peroxidation on equine semen during cryopreservation. Fifteen ejaculates from six fertile Criollo stallions were cryopreserved using a commercial extender (citrate-Hepes, egg yolk and skim milk). Activity of catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase; the total radical-trapping antioxidant potential and TBA-RS content was assessed in native semen, semen diluted in semen extender and thawed semen. All three enzymes showed higher activities in native semen than in diluted and thawed semen (p<0,0001). No difference was observed between diluted and thawed semen (p>0,05). The non-enzymatic defenses did not differ along cryopreservation process (p>0,05). There was not any association between semen quality and both enzymatics and non-enzymatics antioxidant defenses. The decreasing of spermatozoa motility might be partially explained by the increase in semen lipoperoxidation.

O presente estudo visou verificar o efeito sobre alguns parâmetros da seleção por gradiente de Percoll® e da adição de plasma seminal do sêmen eqüino preservado a +4oC. O primeiro experimento avaliou a taxa de recuperação de espermatozóides após seleção por Percoll® em diferentes protocolos de centrifugação. Foram realizadas 5 coletas de sêmen de um garanhão. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração. Foram retiradas duas amostras de 4 mL, diluídas em leite desnatado UHT com concentrações de 50 e 100 x 106 espermatozóides por mL cada. Cada uma destas amostras foi dividida em 4 alíquotas de 1 mL, que foram então colocadas sobre Percoll® e submetidas a diferentes tempos e velocidades de centrifugação. V1 - 200 g (5 min) + 800 g (10 min); V2 - 800 g (10 min); V3 - 800 g (15 min); V4 - 800 g (20 min). Após esse processo, o sobrenadante foi desprezado e o pellet de cada alíquota ressuspendido com 0,5 mL de leite UHT. As 8 amostras foram novamente avaliadas para concentração, motilidade e vigor. O segundo experimento estudou o efeito da adição de plasma seminal de diferentes qualidades ao sêmen eqüino selecionado por gradiente de Percoll® e resfriado a +4°C por até 72 horas. Foram utilizados 40 ejaculados de 4 garanhões, sendo dois com boa qualidade de sêmen e dois com baixa qualidade de sêmen. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor e concentração e preparadas cinco frações de 100x106 espermatozóides, diluídas 1:1 (v/v) em EDTA-Glicose. Quatro delas, constituídas por 1mL a 2mL, foram depositadas sobre Percoll®. A fração restante foi centrifugada em tubo de vidro de 10 mL, sob as mesmas condições de tempo e velocidade das demais amostras. Foi realizada centrifugação por 5 minutos em 200 g, seguida de 10 minutos em 800 g. O sobrenadante foi descartado e o pellet ressuspendido com leite UHT desnatado compondo os seguintes tratamentos: Sp: 1,5 mL de leite UHT desnatado sem adição de plasma seminal; Hp: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal homólogo; Ap: 1,425 mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L de plasma seminal do pool de alta qualidade; Bp: 1,425mL de leite UHT desnatado acrescido de 75 L plasma seminal do pool de baixa qualidade; Cc: foi centrifugada sem seleção por Percoll®, teve seu sobrenadante descartado e ressuspendida com 2 mL de leite UHT; C : uma amostra de sêmen diluído em leite UHT foi mantida como controle no processo de armazenamento. As amostras foram resfriadas a +4°C e examinadas a cada 24h até as 72 horas em relação à motilidade, funcionalidade de membrana (teste hiposmótico) e integridade de membrana (CFDA/PI). A seleção por gradiente descontínuo de Percoll® 90/45% mostrou-se efetiva na recuperação de espermatozóides com motilidades progressiva e total. A adição de 5% de plasma seminal ou a ausência de plasma não influenciaram os valores da motilidade das amostras selecionadas por gradiente de Percoll®. A seleção por Percoll não influenciou na percentagem de células com membrana plasmática funcional. Concentrações superiores a 2% de plasma seminal resultaram em decréscimo do número de células com membrana funcional, enquanto que as amostras sem plasma seminal apresentaram os melhores resultados e o grupo controle, que apresentava a maior percentagem de plasma, os piores. A utilização de Percoll® não separou células com alteração de membrana. A percentagem de células com membrana completamente íntegra foi significativamente maior nas amostras que sofreram processo de centrifugação, independentemente da seleção. O processo de seleção por Percoll® foi efetivo na recuperação de espermatozóides de eqüino com motilidade progressiva, mas não selecionou espermatozóides quanto à funcionalidade nem à integridade de membrana. Concentrações inferiores a 2% de plasma seminal melhoraram a funcionalidade de membrana. A ausência de plasma seminal melhorou os resultados de integridade das membranas plasmática e acrossomal; e a adição de plasma de alta qualidade não melhorou a motilidade de espermatozóides selecionados por Percoll®.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-21Bitstream added on 2014-06-13T18:08:12Z : No. of bitstreams: 1 sanches_ea_me_jabo.pdf: 1805723 bytes, checksum: 57436a068bd303d903231a9efc47438f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da temperatura de estocagem a curto prazo e da temperatura da água sobre os ovócitos e sêmen de jundiá, Rhamdia quelen. O experimento foi realizado em três etapas: (1) avaliar a qualidade dos ovócitos após estocagem e ativação em diferentes temperaturas; (2) padronizar a utilização de análise espermática computadorizada por meio de softwares livres; (3) avaliar os parâmetros espermáticos computadorizados após estocagem e ativação em diferentes temperaturas. Para a primeira, utilizou-se um delineamento experimental fatorial no tempo (5×3×3×3), com os tratamentos realizados em triplicata a cada 48h, na exposição de ovócitos nas temperaturas de 15; 25 e 35ºC e, ativados com água à 15; 25 e 35ºC cada, nos períodos de: 0; 45; 90; 135 e 180 minutos pós-coleta. A segunda etapa foi realizada através da captura de vídeos da movimentação espermática pelo software AMCAP, a uma taxa de 60 frames por segundo, processados no software VIRTUALDUB e analisados no software IMAGEJ por meio do aplicativo CASA. Os seguintes parâmetros foram analisados: taxa de motilidade espermática (MOT), velocidade curvilinear (VCL), velocidade média do deslocamento (VMD), velocidade em linha reta (VLR), linearidade (LIN), balanço (BAL) e freqüência de batimentos (FBAT). Os parâmetros espermáticos foram avaliados em um segundo de imagem nos tempos de 15, 25 e 35 segundos após a ativação espermática. Para a terceira etapa foi utilizado um delineamento experimental fatorial no tempo semelhante à primeira ,com 13 tempos de avaliação pós-coleta: 0; 2; 4; 6; 8; 10; 12; 16; 20; 24; 32; 40 e 48 horas. Os tratamentos foram realizados em triplicata e em protocolos sequenciais a cada 50 horas avaliando-se os parâmetros obtidos na segunda etapa. Estes foram submetidos às análises de correlação (Pearson)... / The study was conducted to evaluate the effect of temperature of storage in the short-term and the temperature of the water on the oocytes and sperm of jundiá, Rhamdia quelen. The experiment was conducted in three stages: (1) assess the quality of oocytes after storage and activation at different temperatures; (2) standardize the use of computerized sperm analysis by software free, (3) evaluate the computerized sperm parameters after storage and activation at different temperatures. For the first, was used a factorial experimental design in time (5×3×3×3), with treatments performed in triplicate every 48 hours, the exposure of oocytes at temperatures of 15, 25 and 35 C, and activated with water to 15, 25 and 35 C each, in the periods of: 0; 45; 90; 135 and 180 minutes post-collection. The second stage was performed by video capture of the movement of sperm through AMCAP software at a rate of 60 frames per second, processed and analyzed in VirtualDub software and ImageJ software using the CASA application. The following parameters were analyzed: rate of sperm motility (MOT), velocity curvilinear (VCL), velocity average path (VAP), velocity straight line (VSL), linearity (LIN), wobble (WOB), beating cross frequency (BCF). The sperm parameters were evaluated in a second image in the times of 15, 25 and 35 seconds after sperm activation. For the third step we used a factorial experimental design similar to the first in time, with 13 times of evaluation post-collection: 0; 2; 4; 6; 8; 10; 12; 16; 20; 24; 32; 40 and 48 hours. The treatments were performed in triplicate and sequencing protocols to be evaluated every 50 hours if the parameters obtained in the second stage. These were submitted to analysis of correlation (Pearson). The significant parameters (P<0.05) were summarized by the principals components analysis. For the first stage interaction (P<0.05) between time and temperature... (Complete abstract click electronic access below)