Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-03T17:06:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520179 bytes, checksum: 82f7ab11782c0fc92b88e2d7d0df243b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-03T17:06:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520179 bytes, checksum: 82f7ab11782c0fc92b88e2d7d0df243b (MD5) Previous issue date: 2016-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve como objetivo a avaliação comparativa dos crioprotetores glicerol, etilenoglicol e dimetilformamida, além da adição de antocianina ao meio base de congelamento, como tentativa de minimizar os danos celulares oriundos do processo de criopreservação. Foram utilizados seis garanhões da raça Mangalarga Marchador, maturos sexualmente, hígidos e aprovados para reprodução por meio de exame andrológico. As coletas de sêmen foram realizadas com intervalos de dois dias pelo método da vagina artificial com auxílio de uma fêmea em estro natural ou induzido ou manequim, totalizando cinco ejaculados por garanhão. A primeira etapa do estudo teve por finalidade determinar a melhor concentração destes crioprotetores e aditivo para que fosse usada na etapa seguinte. Para este fim foram realizadas análises de motilidade espermática progressiva total e vigor espermático. Verificou-se que as concentrações de 4, 5 e 6 % de etilenoglicol e dimetilformamida utilizadas isoladamente nos diluentes de criopreservação não tiveram diferença (P>0,05) sobre os parâmetros de motilidade espermática progressiva total e vigor espermático. Os mesmos crioprotetores utilizados em associação podem ser feitos nas proporções 1:4 e 2:3 % (etilenoglicol : dimetilformamida) sem proporcionar diferenças nos parâmetros físicos do sêmen espermatozoides. Na segunda etapa, as amostras de sêmen criopreservadasforam submetidas às análises físicas convencionais (motilidade espermática progressiva total e vigor espermático), teste de termo- resistência e a análise do grau de integridade das células espermáticas utilizando sondas fluorescentes e analisados por meio da citometria de fluxo. Os tratamentos experimentais foram assim constituídos: Controle Botucrio (B); Etilenoglicol 4% (E); Dimetilformamida 5% (D); Etilenoglicol + Dimetilformamida (ED) ou associados com antocianina (BA, EA, DA e EDA) na verificou-se os piores valores médios em todos os testes, enquanto nos tratamentos D e DA se mostraram menos agressivos às membranas plasmática e acrossomal. Os valores médios de motilidade espermática progressiva total e vigor espermático foram semelhantes em todos os tratamentos, exceto nos tratamentos E e EA, que foram inferiores. No entanto, os tratamentos empregando o diluente a base de dimetilformamida caíram aproximadamente 50 % nos valores de motilidade espermática nos primeiros 30 minutos do teste de termorresistência quando comparados ao tratamento controle (B) ou acrescido de antioxidante (BA). Resultado condizente com os valores percentuais de células com o potencial de membrana mitocondrial íntegro quantificados por meio de citometria de fluxo. A antocianina parece ter efeito neutralizador de radicais livres produzidos por células inviáveis, podendo ser utilizada como antioxidante não penetrante na criopreservação do sêmen de equinos da raça Mangalarga Marchador. / The present study aimed at comparative assessment of glycerol, ethyleneglycol and dimethylformamide as cryoprotectants, and the addition of an anthocyanin in the extander base of freezing, as an attempt to minimize cell damage arising from the cryopreservation process. Six stallions MangalargaMarchador breed, sexually mature, healthy and approved for breeding by breeding soundness evaluationwere used. Semen was collected in intervals of two days by artificial vagina method with the aid of a female in natural or induced estrus or manikin, totalizing five ejaculates per stallion.Thefirst stage of the study aimed to determine the best concentration of these cryoprotectants and additive to be used onthe following stage. For this purpose were conducted analysis of spermaticprogressive motilityand spermatic vigor. As results the concentrations of 4, 5 and 6% ethyleneglycol and dimethylformamide used alone had no differences ( P>0.05 ) on the spermatic progressive motilityand spermatic vigor. The same cryoprotectants can be used in association in the proportions 1:4and 2:3% (ethyleneglycol: dimethylformamide) without differences in the physical parameters of criopreservaited semen. The anthocyanin may be used in concentrations of 0.5 and 3 μL / 100 million of espermatozoa, but not on the concentration of 9 μL / 100 million of espermatozoa. At the second stage, the semen criopreservated samples were subjected to conventional physical analysis (total spermatic motility and spermatic vigor), thermal resistance test, and analysis of the level of integrity of sperm cells using fluorescent probes by flow cytometery. The treatments were constituted as follows: Control Botucrio (B); 4 % Ethyleneglycol (E); Dimethylformamide 5 % (D); Ethyleneglycol + Dimethylformamide (ED) orassociated with anthocyanin (BA, EA, DA, and EDA) at 0.5 μL / 100 million spermatozoaconcentration. For E and EA treatments, there were verified the worst average valuesfor all tests, meanwhile D and DA treatments showed to be less aggressive to the plasma and acrosome membranes. The mean values of spermatic progressive motility and spermatic vigorwere similar for all treatments, except for the treatments E and EA, witch presented inferior results. Even though, diluents Dimethylformamide-based treatments droppedalmost 50 % in the spermatic motility values at the first 30 minutes of the thermal resistance test compared to control treatment (B) or with anthocyaninadded (BA). This result was consistent with the percentual values of cells with intact mitochondrial membrane potential quantified by flow cytometery. Anthocyanin seems to have a scavenger effect over free radicals produced by unviable cells and can be used as non-penetrating antioxidant for cryopreservation in equine semen of MangalargaMarchadorbreed stallions.

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: José Antônio Dell'Aqua Junior / Banca: Márcio Teoro do Carmo / Resumo: Métodos de processamento espermático são rotineiramente utilizados para otimização do sêmen de garanhões. As biotecnologias aplicadas a reprodução permitem que animais geneticamente superiores disseminem suas características. Apesar disso, mesmo em garanhões clinicamente sadios, o sêmen criopreservado possui taxas de fertilidade inferiores quando comparado ao sêmen fresco, em decorrência do estresse químico e físico gerados pela preservação através do frio. Tal, condição pode ser intensificada em animais que apresentam alterações no trato reprodutivo que comprometam a qualidade seminal, como por exemplo, a presença de sangue no ejaculado, denominado hemospermia. Esta afecção geralmente é observada em decorrência de lesões na uretra, processo uretral, pênis e vesícula seminal. O efeito dos componentes sanguíneos sobre a qualidade do sêmen ainda não está bem estabelecido. A manipulação do sêmen por meio da centrifugação com gradientes de densidade além de proporcionar a seleção das células espermáticas, possivelmente permite a separação das hemácias do ejaculado em casos de hemospermia. Em virtude da escassez de informações sobre a viabilidade do sêmen na presença do sangue, visto que os ejaculados com quadro de hemospermia são descartados e a possibilidade de separar as hemácias do ejaculado apresentam dificuldades no aproveitamento do sêmen, mais estudos são necessários acerca do assunto para minimizar as dúvidas da utilização ou não do ejaculado. / Abstract: Sperm processing methods are routinely used for stall optimization of stallions. Biotechnology applied to reproduction allows genetically superior in animals to be better harvested, to disseminate their characteristics through generations. Despite this, even in clinically healthy stallions, cryopreserved semen has lower fertility rates when compared to fresh semen, due to the stress generated by cryopreservation. Such a condition can be intensified in animals that present pathologies in the reproductive tract that compromise seminal quality, such as the presence of blood in the ejaculate, called hemospermia. This condition is usually seen as a result of injuries to the urethra, urethral process or penis. It is unknown what amount of blood in an ejaculate leads to subfertility. The manipulation of semen by centrifugation with density gradients in addition to providing the selection of the spermatic cells possibly allows the separation of the red blood cells from the ejaculate in cases of hemospermia. Due to the scarcity of information on the viability of semen in the presence of blood and the possibility of separating red blood cells from ejaculate more studies are needed on the subject. / Mestre

Considerando-se que a leptospirose pode ser transmitida pela inseminação artificial e a existência de possíveis falhas na Instrução Normativa vigente do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento-MAPA, quanto ao controle desta enfermidade em touros em serviço reprodutivo em Centrais de lnseminação Artificial -CIA, e ainda pelas baixas taxas na FIV em vista da presença de microbiota autóctone no sêmen industrializado, o presente trabalho propôs avaliar: l-a microbiota autóctone presente nas amostras de muco prepucial e sêmen quanto a sazonalidade e a idade (<4 e ≥4 anos) de touros de uma CIA; 2-0 efeito do tratamento com protocolos antibióticos adicionados ao extensor: A - gentamicina (250 ug/ml.), tilosina (50 ug/rnl.); lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.; B -penicilina (500 UI), estreptomicina (500 UI), lincomicina (150 ug/ml.), espectinomicina (300 ug/ml.); CI- sulfato de amicacina (500 ug/rnl.); C2 - sulfato de amicacina (1500 ug/ml. ) e C3 - sulfato de amicacina (2500 ug/ml.) sobre a microbiota presente nas amostras de sêmen; 3-0 efeito dos protocolos de antibióticos (A, B, C I, C2, C3) sobre esperrnatozóide através do teste de integridade de membrana.; 4-0 efeito bactericida dos protocolos A, B e C2 adicionados ao extensor, sobre o sêmen experimentalmente contaminado com Leptospira spp. sorovares Hardjo (estirpes Hardjoprajitno e Hardjobovis) e Wolffi (estirpe 3705), pelo cultivo microbiológico e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), comparando-as entre si. Das amostras de sêmen e muco prepucial de oito touros de uma CIA, observou-se correlação entre os gêneros bacterianos detectados no cultivo bacteriológico das amostras de muco prepucial e sêmen na mesma colheita, não houve diferença entre a microbiota quanto à idade dos animais e a sazonalidade das colheitas; os protocolos antibióticos (A, B, Cl , C2, C3) não interferiram na integridade de membrana citoplasmática dos espermatozóides; protocolos A e C3 mostraram maior redução na microbita do sêmen, embora sem significado estatístico; PCR foi mais sensível que o cultivo na detecção de Leptospira spp. de amostras de sêmen experimentalmente contaminadas, entretanto a diminuição na freqüência de resultados positivos na PCR, em amostras de sêmen contaminadas com três estirpes de Leptospira spp e tratadas com os protocolos A, B ou C2, está relacionada a fatores intrínsecos da técnica e não ao efeito bactericida dos antibióticos empregados. O cultivo bacteriológico revelou baixa sensibilidade no isolamento de estirpes de Leptospira spp em sêmen experimentalmente contaminado com 106 bactérias/mL. A transmissão de leptospiras pelo sêmen industrializado de touros doadores em ClA é principalmente dependente da concentração de leptospiras excretadas no momento da colheita. A PCR confirma ser uma ferramenta fundamental na detecção da presença de leptospiras no sêmen de touros doadores em Centrais de Inseminação Artificial, devendo ser empregada em pelo menos duas colheitas na quarentena, e posteriormente no monitoramento do animal / Considering that leptospirosis can be transmitted by the artificial insemination route and the existence of possible fails on current Normative Instruction of the Ministerio de Agricultura, Pecuária e Abastecimento- MAPA, for the control of this disease in bulls in reproductive service in Artificial Insemination Centers-AIC, and still for the low rates due to the presence of autoctone microbiota in the industrialized semen affecting the production of embryos by in vitro fertilization, the present study aimed to evaluate the autoctone microbiota presented in preputial mucus and semen samples according to season (falls and dry) and bull ages (<4 e ≥4 years) from the AIC; the effect of the treatment with antibiotic protocols added to the semen extensor: A- gentamicine (250 ug/rnl.), tilosine (50 11gim L); lincomicine (150 ug/rnl.); espectinomicine (300 11gim L; B- penicillin (500 UI); estreptomicine (500 UI); lincomicine (150 ug/ml.); espectinomicine (300 ug/ml.); C 1 amicacine sulphate (500 ug/ml.); C2- amicacine sulphate (1500 ug/rriL) and C3- amicacine sulphate (2500 ug/ml.) on microbiota presents in the semen samples; the effect of the antibiotic protocols (A, B, C I, C2, C3) on spermatozoa by the test of membrane integrity; the bactericidal effect of the antibiotic protocols A, B and C2 added to the extensor, on the semen experimentally contaminated with Leptospira spp. serovars Hardjo (strains Hardjoprajitno and Hardjobovis) and Wolffi (strain 3705), for the bacteriological culture and polimerase chain reaction (PCR), comparing themselves. Of the samples of preputial mucus and semen samples of eight bulls of an AlC it was observed correlation among bacterial Genera detected by the bacteriological culture of preputial mucus and semen in the same collection; but it was not observed difference relative to animal age groups and seasons of the year. The antibiotic protocols (A, B, Cl, C2, C3) had no effect on the integrity of cytoplasmic membrane of the spermatozoa. C3 showed greater reduction on semen microbita, but no statistically significant. PCR was more sensible than the bacteriological culture in the detention of Leptospira spp. from semen samples experimentally contaminated, however the reduction on the frequency of positive results by PCR was not related to bactericidal effect of the antibiotic protocols, maybe it was due to intrinsic factors of this method. The bacteriological culture showed very low sensitivity to isolate Leptospira spp. from experimental contaminated semen with 106 bacterias/mL. The transmission of leptospires by industrialized semen from donor bulls of AlC depend mainly on the concentration of leptospires excreted at the moment of the semen collection. The PCR confirms to be a fundamental tool for the detention of leptospires in the semen of donor bulls in AlC, and must be used at least twice during the quarantine, and for the animal monitoring during service time

As biotecnologias reprodutivas têm uma importante relação com os resultados econômicos dos rebanhos leiteiros. Sua adoção implica o investimento de quantidades conhecidas de recursos, porém, há uma clara dificuldade por parte de produtores em avaliarem o retorno desses investimentos. O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo de simulação que permita analisar os impactos do uso de biotecnologias reprodutivas sobre o desempenho econômico de rebanhos leiteiros. Com o auxílio de uma planilha eletrônica do Microsoft® Office Excel®, foi desenvolvido um modelo determinístico, em função de parâmetros produtivos, reprodutivos e econômicos, com o fim de representar a conformação do rebanho em períodos de 21 dias ao longo de 25 anos. Foram realizadas simulações de quatro cenários de aplicação de biotecnologias: inseminação artificial com sêmen convencional (IAC) e com sêmen sexado (IAS), inseminação artificial em tempo fixo com sêmen convencional (IATFC) e com sêmen sexado (IATFS). Finalmente, foram calculados para cada cenário o Payback, o valor presente líquido (VPL) e a taxa interna de retorno (TIR) como indicadores da viabilidade econômica. Sob as condições simuladas, observou-se que o cenário com melhor desempenho econômico foi IATFS (Payback 3 anos; VPL R$ 2.558.490,80; e TIR 42,5% aa), seguido de IATFC (Payback 3 anos; VPL R$ 2.357.639,40; e TIR 42,9% aa). O cenário IAC apresentou valores superiores (Payback 3 anos; VPL de R$ 759.353,90; e TIR 29,3% aa), quando comparado com IAS (Payback 4 anos; VPL R$ 676.870,90; e TIR 23,3% aa). O modelo desenvolvido neste estudo permite auxiliar o processo de tomada de decisão na seleção da estratégia reprodutiva mais adequada com base em parâmetros específicos. / Reproductive biotechnologies have an economic impact on dairy herds. Its implementation requires the investment of known amounts of resources; however, the producers still have a clear difficulty in assessing the profitability of these investments. The aim of this study was to develop a simulation model to analyze how the use of reproductive biotechnologies impact on the economic performance of dairy herds. Using a Microsoft® Office Excel® spreadsheet, a deterministic model was created considering productive, reproductive and economic parameters, in order to represent the herd conformation in 21-day periods over 25 years. Then, four reproductive programs were simulated: artificial insemination using conventional semen (AIC) or sex-sorted semen (AIS) and fixed-time artificial insemination using conventional semen (FTAIC) or sex-sorted semen (FTAIS). Finally, indicators of economic viability: Payback, net present value (NPV) and internal rate of return (IRR) were calculated for each reproductive program. Under the simulated conditions, it was observed that the program with the best economic performance was FTAIS (Payback 3 years; NPV R$ 2,558,490.80; and IRR 42.5% per annum), followed by FTAIC (Payback 3 years; NPV R$ 2,357,639.40; and IRR 42.9% per annum). The AIC program presented higher economic returns (Payback 3 years, NPV R$ 759,353.90, and IRR 29.3% per annum) when compared with AIS (Payback 4 years; NPV R$ 676,870.90, and IRR 23.3% per annum). The mathematical model developed in this study can assists the decision-making process to select the most appropriate reproductive strategy based on specific parameters.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-27T17:29:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-28T13:47:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-28T13:47:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) Previous issue date: 2010 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Durante a criopreservação são inúmeras as alterações sofridas pelas células espermáticas, o que conduz à queda na motilidade e perda da sua viabilidade pós-descongelação. Por este motivo, surge a necessidade de aperfeiçoar os processos de tecnologia do sêmen, principalmente quanto ao uso de diluentes. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade de espermatozóides ovinos, submetidos ao processo de diluição e criopreservação, utilizando-se 3 diluentes (TES, TRIS e PBS) e 3 tempos de equilíbrio (4h, 8h e 12h), sendo o estudo dividido em 9 grupos: TES-4h, TES-8h, TES-12h, TRIS-4h, TRIS-8h, TRIS-12h, PBS-4h, PBS-8h e PBS-12h. Após a colheita, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente, e prédiluído nas soluções TES, TRIS e PBS, no entanto sem a adição dos crioprotetores (Solução A), onde permaneceram por 1h. Posteriormente, o sêmen foi diluído com as soluções TES, TRIS e PBS, já contendo os crioprotetores, novamente avaliado, para então ser envasado, sendo submetido aos diferentes tempos de equilíbrio, e em seguida, congelado. Após a descongelação, foi avaliado a motilidade e o vigor, e após o TTR, a motilidade, o vigor e o desprendimento do acrossoma. Na criopreservação com TRIS, a motilidade e o vigor foram estatisticamente similares (p>0,05) no sêmen congelado com equilíbrio de 4h (17,2% e 1,6), 8h (22,4% e 2,1) e 12h (14,8% e 1,6) (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade e o vigor em 4h (10,4% e 1,1) e em 12h (10,0% e 1,2) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (15,6% e 1,6) (p<0,05). Não houve diferença estatística (p>0,05) no índice de desprendimento do acrossoma entre 4h (35,1) e 12h (37,6) de equilíbrio, havendo uma redução nestes índices em 8h (30,4) (p<0,05). Na criopreservação com TES, a motilidade do sêmen congelado com equilíbrio de 4h (24,8%) e 12h (27,6%) foram estatisticamente similares (p>0,05), sendo que o tempo de 8h (40,4%) diferiu estatisticamente dos demais. O vigor foi estatisticamente similar (p>0,05) para o sêmen descongelado com equilíbrio de 4h (2,0), 8h (2,6) e 12h (2,3), não diferindo estatisticamente (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade em 4h (18,8%) e em 12h (17,4%) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (29,6%) (p<0,05). Em relação ao vigor e ao desprendimento do acrossoma não houve diferença estatística (p>0,05) em 4h (2,0 e 35,8), 8h (2,1 e 33,4) e 12h (1,8 e 42,2) de equilíbrio. Na criopreservação com o PBS, não foram observados motilidade e vigor após a descongelação. Esses resultados indicam que o diluente à base de TES e o tempo de equilíbrio de 8h mostraram-se mais adequados para a diluição e congelação de sêmen ovino. / During cryopreservation are numerous changes experienced by the sperm cells, which leads to the decrease in motility and loss of viability after thawing. For this reason, there arises the need to refine the process technology of semen, especially regarding the use of diluents. The aim of this study was to evaluate the viability of spermatozoa undergoing the process of cryopreservation and dilution, using three extenders (TES, TRIS and PBS) and three years of stability (4h, 8h and 12h), and the study was divided into nine groups: TES-4h-8h TES, TES- 12h, TRIS-4h-8h TRIS, TRIS-12h-4h PBS, PBS and PBS-8h-12h. After collection, semen was evaluated macro and microscopically, and pre-diluted solutions in TES, TRIS and PBS, but without the addition of cryoprotectants (Solution A), where they remained for 1 hour. Subsequently, semen was diluted with solutions TES, TRIS and PBS, already containing the cryoprotectants, again assessed to be so packed, and subjected to different periods of equilibrium, and then frozen. After thawing, motility was assessed and vigor, and after the TTR, motility, vigor and detachment of the acrosome. On cryopreservation with TRIS, motility and vigor were statistically similar (p> 0.05) in semen frozen with a balance of 4h (17.2% and 1.6), 8h (22.4% and 2.1) and 12h (14.8% and 1.6) (p> 0.05). After the TTR was not observed statistical difference (p> 0.05) in motility and vigor in 4h (10.4% and 1.1) and 12h (10.0% and 1.2) of balance, but there was an increase in 8h (15.6% and 1.6) (p <0.05). There was no statistical difference (p> 0.05) in the rate of detachment of the acrosome between 4h (35.1) and 12 (37.6) equilibrium, with a reduction in these indices at 8 am (30.4) (p <0 , 2005). On cryopreservation with ERT, the motility of frozen semen with a balance of 4h (24.8%) and 12h (27.6%) were statistically similar (p> 0.05), although the time of 8h (40.4% ) differed significantly from the others. The force was statistically similar (p> 0.05) for thawed-balanced 4h (2.0), 8h (2.6) and 12h (2.3), not statistically different (p> 0.05) . After the TTR was not observed statistical difference (p> 0.05) for sperm motility in 4h (18.8%) and 12h (17.4%) of balance, but there was an increase in 8h (29.6%) (p <0.05). In relation to the force and the detachment of the acrosome was no statistical difference (p> 0.05) 4h (2.0 and 35.8), 8h (2.1 and 33.4) and 12h (1.8 and 42 , 2) equilibrium. On cryopreservation with PBS, showed no motility and vigor after thawing. These results indicate that solvent-based TES and the equilibrium time of 8h were more suitable for dilution and freezing of ram semen.

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Coorientador: Katia Roberta A. Belaz / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Mateus José Sudano / Resumo: A congelação e refrigeração são biotecnologias muito utilizadas na reprodução equina, entretanto um significativo número de garanhões possuem baixa qualidade seminal após a criopreservação. Diversos autores descreveram a importância da composição e lipídica das membranas espermáticas sobre a resistência à criopreservação. Desta forma, este estudo teve como objetivo analisar a relação do perfil lipídico das membranas espermáticas com a raça e a resistência espermática à congelação e refrigeração. No experimento 1 foram verificadas as diferenças do perfil de fosfolipídios das membranas espermáticas de garanhões das raças Mangalarga Marchador e Quarto de Milhaa e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 728,6; 741,5 e 744,5 nos Mangalarga Marchador. No experimento 2 foram avaliados os fosfolipídios das membranas espermáticas entre garanhões com espermatozoides sensíveis ou resistentes à danos decorrentes da congelação e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 703,5; 728,6; 781,5; 808,5 e 836,6 nos animais sensíveis à congelação. No experimento 3 comparou-se os fosfolipídios das membranas espermáticas dos garanhões com a resistencia à refrigeração e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 772,5 e 774,6 nos animais resistentes à refrigeração. No experimento 4 observou-se não serem os mesmo lipídios que conferem resistência espermática à congelação e à refrigeração. Como os resultados do presente estudo, pode-se concluir que existe diferença no perfil lipídico das membranas espermáticas entre animais Quarto de Milha e Mangalarga Marchado, entre animais sensíveis e resistentes à congelação, entre animais sensíveis e resistentes à refrigeração. Além disso não há relação do perfil lipídicos que confere resistência espermática à congelação e à refrigeração / Abstract: The freezing and refrigeration are biotechnology very used in equine reprodution, although a significant number of stallion have low seminal quality after cryopreservation. Many authors described the importance of lipid composition of spermatic membrane in crypreservation resistance.The aim of this study is to analisy the lipid profile with MALDI-MS of plasmatic membrane of stallion sperm, checking its relation with breed and with spermatic resistance to freezing and refrigeration. Four experiments were done. The experiment 1 verified the diference of phospholipid spermatic membrane in stallions of Mangalarga Marchador and Quarter horse breeds, which was observed bigger relative abundance of ions m/z 728,6; 741,5 e 744,5 in Mangalarga Marchador. The experiment 2 evaluated the spermatic phospholipid membrane between stallions with weak and resistant to the damage of freezing and was observed bigger relative abundance of ions m/z 703,5; 728,6; 782,5; 808,5 and 836, 6 in the animals weaks to freezing. The experiment 3 compared the phospholipids of stallions spermatic membranes with sperm weaks or resistant to the damage of refrigeration and was observed bigger relative abundance of ions m/z 772,5 e 774,6 in animals resistants to refrigeration. The experiment 4 showed that not the same lipids offer spermatic resistance to freezing and refrigeration.The results of this study demonstrate tha there is a diference in lipid profile of spermatic membrane between Quarter Horse and Mangalarga Marchador breeds, between animals weak and resistant to freezing and between animals weak and resistant to refrigeration. Besides there is no relation of lipid profile that offer spermatic resistance to freezing and refrigeration / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: RESUMO A indução farmacológica da ejaculação é uma alternativa utilizada para aumentar a função ejaculatória de garanhões incapazes de ejacularem pelos métodos tradicionais de coleta de sêmen. No entanto, os protocolos desenvolvidos até o presente momento apresentam baixas taxas de sucesso na indução da ejaculação, alta variabilidade de doses, vias de administração e efeitos adversos. A ocitocina é um hormônio que participa ativamente no desencadeamento da ejaculação, no entanto, não existem estudos avaliando sua atuação em protocolos de indução farmacológica da ejaculação. Nesse sentido, o presente estudo teve por objetivos: 1) Comparar a eficiência de diferentes protocolos na indução da ejaculação; 2) A IX - Imipramina (3/mg/kg/v.o) + xilazina (0,66/mg/kg/i.v); IXO - Imipramina (3/mg/kg/v.o) + xilazina (0,66/mg/kg/i.v) + ocitocina (20UI/i.v); D- detomidina (0,02/mg/kg/i.v); DO - detomidina (0,02/mg/kg/i.v) + ocitocina (20 UI/i.v); ID-Imipramina (3mg/kg/ v.o) + detomidina (0,02mg/kg/i.v); IDO-Imipramina (3mg/kg/v.o) + detomidina (0,02mg/kg/i.v) + ocitocina (20 UI/i.v); IO- Imipramina (3mg/kg/v.o) + ocitocina (20 UI/i.v). xiv ocitocina quando adicionada aos protocolos; 3) Comparar os parâmetros seminais de ejaculados coletados em vagina artificial e por indução farmacológica da ejaculação. Foram avaliados os protocolos X - Xilazina (0,66/ valiar a eficiência da mg/kg/i.v); XO - xilazina (0,66/mg/kg/i.v) + ocitocina (20UI/i.v); Nenhum... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The pharmacological induction of ejaculation has been an alternative used to increase ejaculatory function of stallions incapable of ejaculating by the traditional methods of semen collection. However, the protocols developed to date are available in high rate of dose variation, routes of administration, adverse effects and ejaculation rates. In general, pharmacological protocols have shown low success rates in inducing ejaculation. Thus, the aims of the study were: 1) Compare the efficiency of different protocols to induce ex copula ejaculation when detomidine and oxytocin was added to the protocols; 2) Compare seminal parameters between in copula and ex copula ejaculates; We evaluated the nine protocols to ex copula ejaculation: X - xylazine (0.66mg/kg/ i.v); XO - xylazine + oxytocin (20UI/i.v); IX - imipramine (3mg/kg/v.o) + xylazine (0.66mg/kg/i.v); IXO - imipramine (3mg/kg/v.o) + xylazine (0.66 mg/kg/i.v) + oxytocin (20UI); D - detomidine (0.02mg/kg/i.v); DO - detomidine (0.02mg/kg/i.v) + oxytocin (20UI/i.v); ID - imipramine (3mg/kg/v.o) + detomidine (0.02mg/kg/i.v); IDO- imipramine (3mg/kg/v.o) + detomidine (0.02mg/kg/i.v) + oxytocin (20 UI/ i.v); IO- imipramine (3mg/kg/v.o) + oxytocin (20 UI/i.v). Four young stallions (2-3 y old) and 12 sexually mature stallions (6 to 26 y old) were each submitted to 2 treatment trials conducted at 3-day intervals. Induced ejaculates were collected into a plastic bag and compared with in copula ejaculates. None of the 4 young stallions... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:40Z : No. of bitstreams: 1 000852682_20160620.pdf: 79700 bytes, checksum: 3cf603415213794e29627e720a92e128 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-20T12:14:14Z: 000852682_20160620.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-20T12:14:51Z : No. of bitstreams: 1 000852682.pdf: 1984663 bytes, checksum: 5c39404e9531f1892485e096eb8f1752 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A congelação e refrigeração são biotecnologias muito utilizadas na reprodução equina, entretanto um significativo número de garanhões possuem baixa qualidade seminal após a criopreservação. Diversos autores descreveram a importância da composição e lipídica das membranas espermáticas sobre a resistência à criopreservação. Desta forma, este estudo teve como objetivo analisar a relação do perfil lipídico das membranas espermáticas com a raça e a resistência espermática à congelação e refrigeração. No experimento 1 foram verificadas as diferenças do perfil de fosfolipídios das membranas espermáticas de garanhões das raças Mangalarga Marchador e Quarto de Milhaa e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 728,6; 741,5 e 744,5 nos Mangalarga Marchador. No experimento 2 foram avaliados os fosfolipídios das membranas espermáticas entre garanhões com espermatozoides sensíveis ou resistentes à danos decorrentes da congelação e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 703,5; 728,6; 781,5; 808,5 e 836,6 nos animais sensíveis à congelação. No experimento 3 comparou-se os fosfolipídios das membranas espermáticas dos garanhões com a resistencia à refrigeração e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 772,5 e 774,6 nos animais resistentes à refrigeração. No experimento 4 observou-se não serem os mesmo lipídios que conferem resistência espermática à congelação e à refrigeração. Como os resultados do presente estudo, pode-se concluir que existe diferença no perfil lipídico das membranas espermáticas entre animais Quarto de Milha e Mangalarga Marchado, entre animais sensíveis e resistentes à congelação, entre animais sensíveis e resistentes à refrigeração. Além disso não há relação do perfil lipídicos que confere resistência espermática à congelação e à refrigeração / The freezing and refrigeration are biotechnology very used in equine reprodution, although a significant number of stallion have low seminal quality after cryopreservation. Many authors described the importance of lipid composition of spermatic membrane in crypreservation resistance.The aim of this study is to analisy the lipid profile with MALDI-MS of plasmatic membrane of stallion sperm, checking its relation with breed and with spermatic resistance to freezing and refrigeration. Four experiments were done. The experiment 1 verified the diference of phospholipid spermatic membrane in stallions of Mangalarga Marchador and Quarter horse breeds, which was observed bigger relative abundance of ions m/z 728,6; 741,5 e 744,5 in Mangalarga Marchador. The experiment 2 evaluated the spermatic phospholipid membrane between stallions with weak and resistant to the damage of freezing and was observed bigger relative abundance of ions m/z 703,5; 728,6; 782,5; 808,5 and 836, 6 in the animals weaks to freezing. The experiment 3 compared the phospholipids of stallions spermatic membranes with sperm weaks or resistant to the damage of refrigeration and was observed bigger relative abundance of ions m/z 772,5 e 774,6 in animals resistants to refrigeration. The experiment 4 showed that not the same lipids offer spermatic resistance to freezing and refrigeration.The results of this study demonstrate tha there is a diference in lipid profile of spermatic membrane between Quarter Horse and Mangalarga Marchador breeds, between animals weak and resistant to freezing and between animals weak and resistant to refrigeration. Besides there is no relation of lipid profile that offer spermatic resistance to freezing and refrigeration / FAPESP: 2012/24843-4

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Marcelo Alcindo de Barros Vaz Guimarães / Resumo: O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência das técnicas de inseminação artificial intra-vaginal (IAIV) e intra-uterina (IAIU) com sêmen congelado/descongelado em gatos domésticos através da taxa de prenhez. O ejaculado de dois gatos adultos foi colhido com vagina artificial e o sêmen avaliado para motilidade (CASA), morfologia espermática e integridade de membrana plasmática. Após diluição em meio TRIS/OEP (4% de glicerol), as amostras foram envasadas em palhetas francesas de 0,25 mL (25 x 106 de espermatozóides móveis) as quais, após 20 minutos à 5ºC, permaneceram por 15 minutos em vapor de nitrogênio líquido, sendo posteriormente mergulhadas. Para cada IA, quatro palhetas do mesmo gato foram descongeladas por 12 segundos à 46ºC e centrifugadas a 250xg por 8 minutos. O pellet ressuspendido em 100 æL do meio foi analisado como descrito anteriormente. Nas gatas, o estro e a ovulação foram induzidos com 100 UI de eCG e, após 84 horas, 100 UI de hCG. Após 30 horas da indução da ovulação, as gatas foram inseminadas pelo método intra-uterino ou intra-vaginal, com o sêmen obtido do gato A ou B (n=8 gatas para cada método de IA). Para a análise estatística os testes de Tukey e de Wilcoxon foram utilizados para as variáveis de qualidade espermática, enquanto o teste de Fisher foi usado para comparar os métodos de IA, estabelecendo diferença significativa quando p<0,05. Embora tenha sido observada uma queda acentuada de motilidade, integridade de acrossomo e integridade de membrana plasmática nas amostras seminais descongeladas de ambos os gatos, um índice de prenhez de 75% foi alcançado quando utilizado o método de IA intra-uterino, contra 0% com o método intra-vaginal. / Abstract: The aim of this study was to compare the efficiency of the intravaginal and the intrauterine artificial insemination methods using domestic cat frozen/thawed semen by determining the pregnancy rate. The sperm was collected from two tom cats using an artificial vagina and the samples were assessed for motility (CASA), sperm morphology and plasma membrane integrity. After dilution with TRIS/OEP (4% of glycerol), the sperm samples were loaded into 0.25 mL straws (25 x 106 of sperm cells presenting motility) which, after 20 minutes under 5ºC, were placed in liquid nitrogen vapour for 15 minutes, being afterwards immersed. For each AI, four straws from the same male were thawed during 12 seconds at 46ºC and centrifuged at 250xg for 8 minutes. The pellet was ressuspended in 100 æL of the extender and analyzed as described above. In the queens, estrus and ovulation were induced using 100 UI of eCG and, after 84 hours, 100 UI of hCG. After 30 hours from the ovulation induction, the females were inseminated by the intrauterine or by the intravaginal methods, using the semen obtained by male A or B (n=8 females for each AI method). For statistical analysis the Tukey test and the Wilcoxon test were used for the sperm quality results, while the Fisher test was used to compare the two AI methods, with p<0.05 taken as significant. Although a pronounced decrease in motility, acrosome integrity and plasma membrane integrity were observed for the sperm samples from both cats, a pregnancy rate of 75% was achieved when using the intrauterine AI method, against 0% with the intravaginal AI method. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 702747 bytes, checksum: 881b24ba4fe9f249940d1ad2d3923f73 (MD5) Previous issue date: 2008-02-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Although the first birth of pups with use of frozen semen has been reported almost 40 years ago, still today the conception rate with thawed canine semen is generally inferior to the observed in other species. Many factors influencing the semen quality through the cryopreservation process are known, including the centrifugation protocol, the extender composition, the association between the cryoprotectors, the cooling rate, the time of equilibrium and the freezing rate, as well as the association between thawing and freezing rates. Individual variations in the semen freezability are found in many species, including the dog. Some authors attribute these variations to the differences in the spermatic membrane lipid composition and spermatozoon sensitivity of the glycerol toxic effects. In present work 36 semen samples where collected, from 12 dog of the: Beagle, Schnauzer, Doberman and Boxer breeds, by digital manipulation. After the collection the semen was centrifuged, reextended in Tris-Citrato extender added with 1, 2, 4 and 6% of glycerol and packaged in 0,25mL straws. After that the semen were cooled for 1 hour until 4oC, then half of the straws of each treatment was immediately freezed and the remain was kept by more 1 hour in equilibrium at 4oC before the freezing. Two freezing rates had been tested in termical box contend liquid nitrogen through the positioning of the straws 5 and 10 cm above the surface of nitrogen per 10 minutes. The thawing was carried through immersion in water 38oC per 1 minute. The semen was evaluated at the moment of the collection, after the centrifugation and immediately after thawing for spermatozoa movement through motility, progressive status, and sperm index and for plasma membrane integrity and viability through hiposmotic swelling tests and live/dead stain. The sperm longevity was evaluated through the thermorresistece test. In the present work the individual averages of sperm motility and progressive status in the fresh semen had varied from 3.5 to 5.0 and 63 to 90% respectively, while the breed averages had varied of 4.4 the 4.9 and 80 to 90% respectively. The semen centrifugation resulted in significant fall of 13% in progressive status and 14% in the motility and spermatic index. The analysis of the parameters of plasma membrane viability and integrity in the semen after centrifugation shows significant reduction of 38% and 14% in the reactive cells to the hiposmotic swelling test and to the supravital coloration respectively. The results of the hiposmotic swelling test, live/dead stain and thermorresistence in the thawed semen demonstrate better performance when protocols of freezing were used with equilibrium time. Influence of the freezing rate, in isolated form, was not observed on the seminal parameters evaluated and significant variations had been only observed when equilibrium time and glycerol concentration were associated. Isolate the increase in the percentage of glycerol from 1 to 6% in the extender composition, promotes prompt improvement to plasma membrane integrity and to spermatic index in the thawed samples. However, when associates the observed results of biggest levels of glycerol to the presence of equilibrium time and to the slow rate of freezing, significant increases are observed in all the studied parameters. Individual variation was observed in spermatic index of thawed semen, but not in the fresh semen. Already the parameters of plasma membrane integrity and viability had presented individual variation in both. When the parameter breeds is evaluated, any significant alterations were observed on the evaluated parameters in fresh semen, however in the thawed semen, significant variations in the plasma membrane integrity and viability had been observed. The dogs of the Schnauzer breed had presented significantly shorter sperm longevity after the thawing. The Doberman and Boxer breeds had presented the best results of freezability in in vitro evaluation. With the exception of the test of live/dead stain, the studied parameters had presented significant correlations between the data collected in fresh semen with those observed in thawed semen. / O presente trabalho busca descrever a análise in vitro do sêmen fresco e as diferenças individuais e raciais na congelabilidade do sêmen de cães das raças Beagle, Schnauzer, Doberman e Boxer. Foi também avaliado o efeito da centrifugação, do tempo de equilíbrio, da taxa de congelamento e de diferentes concentrações de glicerol, sobre a qualidade o sêmen canino criopreservado em meio diluidor a base de Tris-Citrato. Foram ainda analisadas as correlação dos parâmetros de avaliação in vitro do sêmen antes e depois o congelamento. Para tanto, foram utilizados 12 cães das raças Beagle (n=3), Schnauzer (n=3), Doberman (n=3) e Boxer (n=3), sendo 3 ejaculados coletados por indivíduo, totalizando 36 ejaculados. Após a coleta o sêmen foi centrifugado, ressuspendido em meio Tris-Citrato contendo 1, 2, 4 e 6% de glicerol e evasado em palhetas de 0,25mL. Após o envase o sêmen foi resfriado por 1 hora a 40C e em seguida metade das palhetas de cada tratamento foi encaminhada para o congelamento e o restante foi mantido por mais 1 hora em equilíbrio a 4oC, antes do congelamento. Duas taxas de congelamento foram testadas em caixa de isopor contendo nitrogênio líquido através do posicionamento das palhetas a 5 e 10 cm da superfície do nitrogênio por 10 minutos. O descongelamento foi realizado através de imersão em água a 38oC por 1 minuto. O sêmen foi avaliado no momento da coleta, após a centrifugação e ao descongelamento quanto à movimentação dos espermatozóides através de vigor, motilidade e índice espermático e quanto à integridade e viabilidade da membrana plasmática pelos testes hiposmótico e de coloração supravital. A longevidade espermática foi estimada no sêmen descongelado através do teste de termorresistência (TTR). No presente trabalho as médias individuais de vigor e motilidade espermáticos no sêmen fresco variaram de 3,5 a 5,0 e de 63 a 90% respectivamente enquanto as médias raciais variaram de 4,4 a 4,9 e de 80 a 90% respectivamente. A centrifugação do sêmen resultou em queda de cerca de 13% no vigor espermático, 14% na motilidade e no índice espermático. A análise dos parâmetros de viabilidade e integridade de membrana plasmática no sêmen após centrifugação mostra diminuição de 38% e 14% nas células reativas ao teste hiposmótico e de coloração supravital respectivamente. Os resultados dos testes hiposmótico, de coloração supravital e de termorresistência no sêmen descongelado demonstram de maneira geral melhor desempenho dos protocolos de congelamento com a presença do tempo de equilíbrio. Não foi observada influência da taxa de congelamento de forma isolada sobre os parâmetros seminais avaliados. Variações significativas só foram observadas quando se associou à variação da taxa de congelamento, variações no tempo de equilíbrio e concentração de glicerol. Isoladamente, o aumento no percentual de glicerol de 1 para 6% na composição do meio diluidor, promove melhoria pontual na integridade da membrana citoplasmática e no índice espermático ao descongelamento. Porém, quando se associa os resultados observados dos maiores níveis de glicerol à presença do tempo de equilíbrio e à taxa lenta de congelamento, aumentos significativos são observados em todos os parâmetros estudados. Variação individual foi observada no índice espermático no sêmen descongelado, mas não no sêmen fresco. Já os parâmetros de integridade e viabilidade da membrana plasmática apresentaram variação individual em ambos. Quando se avalia a variável raça não se observa alterações significativas quanto aos parâmetros avaliados no sêmen fresco, porém no sêmen descongelado, observaram-se variações significativas na integridade e viabilidade da membrana plasmática. Os cães da raça Schnauzer apresentaram significativamente menor longevidade espermática após o descongelamento. As raças Doberman e Boxer apresentaram os melhores resultados de congelabilidade na avaliação in vitro. A exceção do teste de coloração supravital, os parâmetros estudados apresentaram correlações significativas entre os dados coletados no sêmen fresco com aqueles observados no sêmen descongelado.