Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Magíster en
Bioquímica área de Especialización en Toxicología y Diagnóstico Molecular / En los Errores Innatos del Metabolismo (EIM), los cultivos de fibroblastos (FB) a partir de
biopsia de piel, han sido desarrollados con el objetivo de obtener material para la determinación
enzimas deficientes en este tipo de patologías y establecer un diagnóstico definitivo. Este tipo de
diagnóstico es realizado en laboratorios especializados, debido a la complejidad en el manejo y
mantención de los cultivos de FB. El envío de muestras de FB a estos centros debe ser realizado en
condiciones que garanticen la viabilidad de las células durante el trayecto, con el objetivo de
evitar un retraso en el diagnóstico, lo que podría ocasionar daño neurológico irreversible o la
muerte de estos pacientes. Entre los EIM, el grupo de Enfermedades de Depósito Lisosomal (EDL)
han sido ampliamente diagnosticadas mediante análisis enzimático sobre muestras de FB. La
detección de enzimas lisosomales deficientes en muestras de FB permite confirmar el diagnóstico
en este tipo de patologías. El uso de gotas de sangre seca (GSS) en papel filtro ha permitido el
desarrollo de Programas de Pesquisa Neonatal para diversos EIM, ya que se ha demostrado
ampliamente la estabilidad de metabolitos y enzimas en GSS en papel filtro. Además, la toma de
muestra, el transporte y almacenamiento de muestras en este tipo de soporte se ven facilitados.
El objetivo de este estudio fue evaluar la estabilidad de la actividad específica de betagalactosidasa,
enzima lisosomal deficiente en la Gangliosidosis GM1, un tipo de EDL, en muestras
de lisados de FB obtenidos a partir de la línea celular 3T3-L1 y dispuestos en papel filtro. Las
muestras fueron sometidas a distintas condiciones de tiempo y temperatura de almacenaje para
la evaluación de la actividad enzimática.
Las muestras mantenidas a 4°C mostraron estabilidad de la actividad enzimática de betagalactosidasa
hasta al menos los 28 días de almacenaje. Las muestras re-almacenadas a 4°C y -
70°C presentaron una mayor estabilidad de la actividad de beta-galactosidasa, en comparación
con otras temperaturas de re-almacenaje estudiadas / In Inborn Errors of Metabolism (IEM), fibroblasts (FB) cultures from skin biopsy have been
developed in order to obtain material for the determination of deficient enzymes in this type of
pathologies and to establish a definitive diagnosis. This type of diagnosis is performed in
specialized laboratories, due to the complexity of sample handling and FB culture maintenance.
Shipment of FB samples to these centers must be carried out under conditions that guarantee the
viability of the cells during the journey, in order to avoid a delay in diagnosis, which may cause
irreversible neurological damage or death of these patients. Among the IEM, the Lysosomal
Storage Diseases (LSD) group, has been widely diagnosed by enzymatic analysis of FB samples. The
detection of deficient lysosomal enzymes in FB samples allows us to confirm the diagnosis in this
type of pathology. The use of dried blood spots (DBS) on filter paper has allowed the development
of Neonatal Screening Programs for various IEM, because the stability of metabolites and enzymes
in DBS on filter paper has been widely demonstrated. Furthermore, sample collection, transport
and storage of samples in this type of support are facilitated.
The aim of this study was to evaluate the stability of the beta-galactosidase, a lysosomal enzyme
that is deficient in GM1 gangliosidosis, a type of EDL, in fibroblasts lysates obtained from the 3T3-
L1 cell line and collected on filter paper. Samples were studied under different conditions of time
and temperature of storage for the enzymatic activity assessment.
Samples kept at 4°C maintained the stability of enzyme activity for at least 28 days of storage.
Samples stored at 4°C and -70°C showed increased stability when are re-stored in these
temperatures.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/149559 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Betta Morales, Katerina Angélica |
| Contributors | Arredondo Olguín, Miguel |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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