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Purificação e caracterização de uma tripsina sensível a metal pesado do peixe Caranx hippos

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Previous issue date: 2007 / A tripsina-símile extraída do ceco pilórico de xaréu (Caranx hippos) foi purificada por um
procedimento de três etapas: tratamento térmico, precipitação com sulfato de amônio e
cromatografia de gel-filtração em Sephadex G-75. Os efeitos de vários íons metálicos e
inibidores de proteases na atividade digestiva da enzima in vitro foram determinados. As
propriedades físico-químicas e cinéticas da tripsina foram estabelecidas. O pH e
temperatura ótima de reação encontrada foram 8,0 e 50°C, respectivamente. Após 30
minutos de incubação a 50ºC, foi detectada uma perda de 20% da atividade tríptica. A
constante de Michaelis Menten foi 1,21  0,38 mM usando benzoil-DL-arginina-pnitroanilida
(BApNA) como substrato. Uma única banda (35,2 kDa) foi observada quando a
amostra da enzima purificada foi aplicada em gel de eletroforese utilizando sulfato sódico
de dodecila (SDS-PAGE, 12,5%). Atividade com substrato específico e inativação por
inibidores de protease forneceram evidências adicionais que uma tripsina é responsável por
esta atividade proteolítica. A tripsina de C. hippos apresentou sensibilidade a metais
pesados. Utilizando soluções de íons na concentração de 1 mM, a tripsina foi inibida na
ordem decrescente: Cd2+=Al3+>Zn2+>Cu2+>Pb2+>Hg2+. Menor efeito foi detectado com
Co2+, K+, Li+, Ba2+, Mn2+, Mg2+e Ca2+. Contudo, a concentração tão baixa quanto 0,01 ppm
(10 μg/mL) dos íons Zn2+, Cu2+, Hg2+, Pb2+, Cd2+ e Al3+ foram suficientes para inibir 34%,
33%, 33%, 32%, 29% e 28%, da atividade proteolítica, respectivamente

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1762
Date January 2007
CreatorsMaria Silva da Costa, Helane
Contributorsde Souza Bezerra, Ranilson
PublisherUniversidade Federal de Pernambuco
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguagePortuguese
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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