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Dissertaçao de Mestrado - 2012- Gardenia.pdf: 2025272 bytes, checksum: ca5929869bedc687cfad91dfbe21a726 (MD5) / A esquistossomose continua sendo uma das infecções parasitárias mais prevalentes no mundo. Para o controle e monitoramento efetivo dessa doença é essencial que se disponha de métodos diagnósticos cada vez mais acurados. O exame parasitológico de fezes, utilizando-se a técnica de Kato-Katz, é a principal forma de diagnosticar a esquistossomose mansoni, embora esse método de diagnóstico não seja satisfatório quando a carga parasitária dos indivíduos infectados é baixa. Outras técnicas sorológicas para o diagnóstico estão disponíveis, entretanto estas apresentam limitações. Neste trabalho foram realizadas análises in silico utilizando o banco de dados genômico para o parasito Schistosoma mansoni - SchistoDB e várias ferramentas de bioinformática para selecionar antígenos candidatos a serem utilizados no imunodiagnóstico da doença. Seis antígenos foram selecionados baseados na evidência de expressão gênica em diferentes fases do ciclo de vida do parasito no hospedeiro definitivo, presença de peptídeo sinal, localização celular, semelhança com proteínas humanas e de outros helmintos e presença de epitopos preditos de célula B. Através da técnica de Western blot utilizando antígenos de extrato de verme adulto e de esquistossômulos foi demonstrado que antígenos com peso molecular semelhante aos selecionados in silico foram reconhecidos apenas por soro de camundongos infectados com S. mansoni. Dos seis antígenos, um corresponde à proteína Sm200. Uma parte desta proteína, correspondente aos aminoácidos 1069 a 1520, foi expressa em sistema de expressão em procariotos e avaliada por Western blot e ELISA frente a soros de camundongos infectados e não infectados. Nossos resultados demonstram que apesar da proteína recombinate Sm200(1069-1520) ser reconhecida por soro de camundongos infectados pela técnica de Western blot, nos ensaios de ELISA o uso desta proteína como antígeno resultou 97,5% de especificidade e 75% de sensibilidade no diagnóstico de infecções crônicas. / Schistosomiasis remains one of the most prevalent parasitic infections worldwide. In order to achieve disease control the availability of a more accurate diagnosis method is necessary.The stool examination using the Kato-Katz method is the major diagnostic test to Schistosomiasis mansoni, however this method is not satisfactory when the worm burden of infected individuals is low. Other serological techniques for the diagnosis of schistosomiasis are available, but these techniques present some limitations. In the present work, in silico analyses were performed using the genomic database for the parasite Schistosoma mansoni - SchistoDB and different bioinformatics tools for selecting antigens candidates to be used in the immunodiagnosis of the disease. Six antigens were selected based on the evidence of gene expression at different phases of the parasite life cycle in the definitive host, presence of signal peptide, cellular location, similarity with human and other helminthic proteins and presence of predict B cell epitopes. Antigens with molecular weight similar to those selected in silico were recognized by sera from S. mansoni infected mice in a western blot using antigens derived from adult worm and schistosomula extracts. Among the six antigens selected, one corresponded to the protein Sm200. A part of this protein – containing the amino acids 1069 to 1520 – was expressed in bacteria, and its recognition by sera from infected mice was evaluated in Western blot and ELISA. Our results demonstrated that although the recombinant protein Sm200(1069-1520) is recognized by sera from infected mice in Western blot, the use of this antigen in ELISA resulted in 97.5% specificity and 75% sensitivity for the diagnosis of chronic infections.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/6084 |
| Date | January 2012 |
| Creators | Carvalho, Gardênia Braz Figueiredo de |
| Contributors | Pacífico, Lucila Grossi Gonçalves, Fonseca, Cristina Toscano, Lucila Grossi Gonçalves, Pacífico, Ruiz, Jerônimo Conceição, Oliveira, Sergio Costa, Mourão, Marina de Moraes, Fonseca, Cristina Toscano |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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