O presente trabalho teve por objetivo caracterizar os compostos bioativos e o impacto de fatores climáticos no pólen apícola (PA) de Eucalyptus sp., o seu potencial antioxidante in vitro e a sua influência em parâmetros do estresse oxidativo e da inflamação in vivo. A caracterização quimica das amostras foi realizada pela quantificação de fenólicos e flavonóides totais e a avaliação da atividade antioxidante dos extratos por três metodologias (DPPH, ORAC e FRAP). Foram realizadas análises de perfil de ácidos graxos e fitoesteróis (CG). Os resultados de fenólicos e flavonóides totais mostraram uma variação entre 17 e 44 mg de equivalentes de ácido gálico e entre 1,3 e 4,4 mg de equivalentes de catequina/g. A atividade antioxidante mostrou uma variação de 267 a 961 µmol de equivalentes de Trolox/g pelo método ORAC, de 38 a 147 µmol de equivalentes de Trolox/g para o FRAP e um EC50 entre 0,41 e 1,61 mg/mL de extrato por DPPH. Apesar das amostras de PA apresentarem baixa quantidade de lipideos (3,3 %), em torno de 50 % do total destes são constituidos de ácidos graxos insaturados. Foram encontrados teores de fitoesteróis entre 1,2 a 1,8 mg/g (sitoesterol, estigmasterol e campesterol). Estes resultados confirmaram a presenca de bioativos com potencial antioxidante nas amostras. A fim de confirmar seu efeito biológico, foi selecionada uma amostra para a realização do ensaio in vivo, na qual foram identificados por CLAE três compostos fenólicos majoritários (rutina, 3n-tris-p-feruloil-espermidina e miricetina). O ensaio foi realizado por 10 semanas com 70 camundongos machos (C57BL/6), distribuídos em sete grupos de 10 animais cada: controle normolipídico (NL); controle hiperlipídico (HL); dieta NL com 5 % de PA; dieta HL com 2,5 % de PA; dieta HL com 5 % de PA; dieta HL com extrato de PA (EPA) a 2,5 %; e dieta HL com EPA a 5 %. Foi possível identificar que os grupos HL tiveram maior ganho de peso quando comparados aos grupos NL (p<0,05), porem os grupos com incorporação de PA não apresentaram diferencas em relação ao controle HL. Foram avaliados ainda parâmetros bioquímicos séricos, de estresse oxidativo (ORAC, TBARS, GSH e enzimas antioxidantes) e parâmetros inflamatórios (IL1-β, IL-6, IL-10, MCP-1 e TNF-α) no tecido hepático. Os resultados de parâmetros de estresse oxidativo não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. Quanto aos parâmetros inflamatórios os grupos HL+PA2,5 e HL+PA5 reduziram os níveis das citocinas IL1-β, IL-6 e MCP-1 (p<0,05) e TNF-α apenas o grupo HL+PA5 % apresentou uma redução significativa (p<0,05). Os resultados de citocinas inflamatórias mostraram um efeito positivo na administração de PA, visto que ocorreu uma diminuição nos níveis do tecido hepático dos animais. Estes resultados mostraram que o PA promoveu uma melhora do quadro inflamatório ocasionado com uma dieta hiperlipídica. / The present work aimed to characterize bioactive compounds and the impact of climatic factors on the bee pollen (BP) from Eucalyptus sp., its antioxidant potential in vitro and its influence on parameters of oxidative stress and inflammation in vivo. The chemical characterization of the samples was performed by the quantification of phenolics and flavonoids, and evaluation of the antioxidant activity of the extracts by three methodologies (DPPH, ORAC and FRAP). Profile of fatty acids and phytosterols were performed by gas chromatography (GC). The results of phenolics and flavonoids varied between 17 and 44 mg of gallic acid equivalents and between 1.3 and 4.4 mg of catechin equivalents/g. The antioxidant activity varied from 267 to 961 µmol of Trolox equivalents/g by the ORAC method, from 38 to 147 µmol of Trolox equivalents/g for FRAP and an EC50 between 0.41 and 1.61 mL of extract/mg by DPPH. Despite the low lipid content of PA samples (3.3%), around 50% of the total is composed of unsaturated fatty acids. Phytosterols levels were found between 1.2 and 1.8 mg/g (sitosterol, stigmasterol and campesterol). This result confirms the presence of bioactive compounds with antioxidant potential in the samples. In order to evaluate its biological effect, a sample was included in the in vivo assays, in which three phenolic compounds (rutin, 3n-tri-p-feruloyl-spermidine and myricetin) were identified. The assay was performed for 10 weeks with 70 male mice (C57BL/6), distributed in seven groups of 10 animals each: normolipid control (NL); hyperlipidemic control (HL); diet NL with 5% of BP; HL diet with 2.5% BP; HL diet with 5% BP; HL diet with 2.5% BP extract (BPE); and HL diet with 5% BPE. The HL groups gained more weight compared with the NL groups (p<0.05), but the groups supplemented with BP did not show lower weight compared to the HL groups. Serum biochemical parameters of oxidative stress in hepatic tissue (ORAC, TBARS, GSH and antioxidant enzymes) and inflammation (IL-β, IL-6, IL- 6, IL-10, MCP-1 and TNF-α) were evaluated. The levels of oxidative stress did not show differences between the groups. HL + PA2.5 and HL + PA5 reduced the cytokines IL1-β, IL-6 and MCP-1 (p<0.05) and TNF-α only the HL + PA5 group showed a significant reduction (p<0.05). The cytokine results showed a positive reduction with BP administration, with a decreasing rate in the hepatic animal tissues. This results showed that BP promotes an improvement in the inflammatory status, occurred by a hyperlipidic diet.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-04122018-115805 |
| Date | 18 October 2018 |
| Creators | Sattler, José Augusto Gasparotto |
| Contributors | Almeida-Muradian, Ligia Bicudo de, Mancini Filho, Jorge |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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