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santos_a_me_araiq.pdf: 1458862 bytes, checksum: f7fe58d688854cba187d0f1e30f22ce7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As proteínas de micronema TgMIC1 e TgMIC4 (TgMICs) da Toxoplasma gondii fazem parte de um complexo proteico localizado na superfície do parasita responsável pelo processo de adesão e invasão celular. Os objetivos desse trabalho foram estudar dispositivos piezelétricos contendo em cada um, uma das MICs recombinantes (rTgMIC1 ou rTgMIC4) e utilizá‐los na determinação das constantes de afinidade entre elas com a fetuína e asialofetuína, empregando o modelo da Isoterma de Langmuir. Os dispositivos foram desenvolvidos por meio a abordagem de monocamadas automontadas (SAM) mista de tióis, utilizando solução etanólica contendo 2,5 mM de ácido 11‐mercaptoundecanóico (11‐MUA) e 7,5 mM de 6‐mercapto‐1‐hexanol (C6OH). A formação da SAM, realizada em temperatura ambiente por 12 h, foi monitorada pela técnica de Microbalança a Cristal de Quartzo com Fator Dissipativo (QCM‐D) e voltametria cíclica utilizando o par redox [FeII(CN)6]4‐/ FeIII(CN)6]3‐. Os resultados obtidos por ambas as técnicas evidenciaram a formação de SAM rígida e de elevado grau de cobertura superficial após cinética lenta em que processos de adsorção e organização dos tióis ocorreram simultaneamente. Para a imobilização das rTgMICs, solução aquosa contendo 10 mM de EDC (N‐etil‐N‐(dimetilaminopropil) carbodiimida) e 20 mM de NHS (N‐hidroxisuccinimida) foi utilizada para a ativação dos grupos carboxílicos presentes na SAM por 2 h, e o processo acompanhado por QCM‐D apresentou resultados compatíveis com aqueles encontrados na literatura. Pela mesma técnica, foi possível verificar que ambas as rTgMICs se imobilizam sobre o cristal de quartzo após sua incubação com solução 0,15 mg/mL de cada rTgMIC em tampão Tris‐HCl contendo 200 mM de NaCl... / The Toxoplasma gondii micronemal proteins TgMIC1 and TgMIC4 (TgMICs) are part of a protein complex located on the surface of the parasite responsible for the process of cellular adhesion and invasion. The goal of the present work was to study a piezoelectric device containing the recombinant MICs (rTgMIC1 or rTgMIC4) and use it in determining the affinity constants between the MICs with fetuin and asialofetuin, employing the Langmuir isotherm model. The devices were developed using the approach of self‐assembled monolayer (SAM) in ethanolic solution containing 2.5 mM of 11‐mercaptoundecanoic acid (11‐MUA) and 7.5 mM of 6‐mercaptohexanol (C6OH). The SAM formation, held at room temperature for 12 h, was monitored by the Quartz Crystal Microbalance technique with Dissipative Factor (QCM‐D) and cyclic voltammetry using the redox couple [FeII(CN)6]4‐/FeIII(CN) 6]3‐. The results obtained from both techniques showed the formation of a rigid and high surface degree coverage SAM after a slow kinetic process in which adsorption and organization of the thiols occur simultaneously. For the immobilization of rTgMICs, aqueous solution containing 10 mM EDC N‐ethyl‐N‐(dimethylaminopropyl) carbodiimide and 20 mM NHS (N‐hydroxysuccinimide) was used for 2 h, and the process followed by QCM‐D was consistent with those found in the literature. By the same technique it was found that both rTgMICs are immobilized on the quartz crystal after incubation whit solution 0.15 mg/mL of each rTgMIC in Tris‐HCl containing 200 mM NaCl (pH 8.0) for 2 h. Unlike the functionalization of the quartz crystal rTgMIC4, remaining adsorption sites were observed in the process using the rTgMIC1, wherein the blocking step using 0.1% gelatin solution for 2 h was required. Throughout the QCM‐D technique it was possible... (Complete abstract click electronic access below)
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unesp.br:11449/92055 |
| Date | 08 May 2012 |
| Creators | Santos, Adriano dos [UNESP] |
| Contributors | Universidade Estadual Paulista (UNESP), Bueno, Paulo Roberto [UNESP] |
| Publisher | Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 114 f. : il. - |
| Source | Aleph, reponame:Repositório Institucional da UNESP, instname:Universidade Estadual Paulista, instacron:UNESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -1, -1 |
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