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Previous issue date: 2018-09-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Chemical delipidation has been used as an alternative to improve the cryotolerance of in
vitro produced embryos (IVP). The aim of this study was evaluate the effect of L-carnitine (LC) on
the development and survival of vitrified IVP bovine embryos by the Cryotop method in the first
assay, and in the second trial the effect of LC and Forskolin on Cryotop cryopreserved embryos
Experiment 1), or by modified slow freezing (Experiment 2), so mitochondrial activity,
intracytoplasmic lipid (LI) content, cellular apoptosis (NCA) and hatching after heating were
evaluated. In the first essay LC was used at the concentration of 0,6 mg/mL in maturation culture
medium (IVM), embryo culture (IVC) and / or post-thawing (REC), in four treatments: without LC
(Control), LC added to CIV (LCiv), LC to CIV + LC to REC (LCivR), and LC to MIV / CIV + LC
to REC (LMivCR). The addition of LC increased the production of blastocysts in D7 by 28.6%
(LCiv) and the amount of embryos grade I by 36.9% (LCivR), the re-expansion rate in 22,7% and
hatching in 20.1% (LCiv), and mitochondrial activity was 1.9 times higher (P <0.001) (LCivR)
than Control. The LI quantity was 29% lower in LCiv and LCivR and 50.2% in LMivCR compared
Control (P <0.001). In the second experiment the embryos were cultured without addition of
delipidators (Control), in the presence of 10μM of Forskolin added to the IVC in D5 (FORSK) or
L-carnitine (0.6 mg / mL) added to the IVC and in post-thawing (LC). LC supplementation
increased the production of blastocysts in D7 by 22.0% and grade I embryos by 30.1% (P <0.05),
in relation to Control and FORSK. In Experiment 1, the re-expansion rate in LC increased (P
<0.05) 28.9% in relation to FORSK. In Experiment 2, two Control treatments were used for slow
freezing (Classic and Modified). Hatching after 48 hours was greater (P <0.05) in LC compared to
FORSK and Classical and Modified Controls (77.5%, 41.9%, 40.5%, 40.8% respectively). In the
LC treatment, there was a decrease (P <0.05) of 64.7% in the degenerate embryo rate in relation to
the Classical Control. Treatment with delipidators reduced LI content (P <0.001) by 2.2 fold in
FORSK and four times in the LC compared to Control. The addition of 0.6 mg / mL of L-carnitine
to the culture medium and the post-thawing increased the rate of in vitro production of bovine
embryos acting positively on mitochondrial potential, reducing the amount of intracellular lipids
and cellular apoptosis and increasing cryotolerance of embryos submitted to the modified slow
freezing protocol. / A delipidação química tem sido utilizada como alternativa para a melhoria da criotolerância em
embriões produzidos in vitro (PIV). Este estudo foi realizado objetivando avaliar o efeito da Lcarnitina
(LC) sobre o desenvolvimento e a sobrevivência de embriões bovinos PIV vitrificados
pelo método Cryotop no primeiro ensaio, e no segundo ensaio o efeito comparado da LC e
Forskolin em embriões criopreservados por Cryotop (Experimento 1), ou por congelamento lento
modificado (Experimento 2). Para isto foram avaliadas a atividade mitocondrial, o conteúdo de
lipídeos intracitoplasmático (LI), a apoptose celular e a eclosão após o aquecimento. No primeiro
ensaio a LC foi utilizada na concentração de 0,6 mg/mL no meio para maturação (MIV), cultivo
(CIV) e/ou recultivo embrionário (REC), em quatro tratamentos: sem LC (Controle), LC
adicionado ao CIV (LCiv), LC ao CIV+LC ao REC (LCivR), e LC ao MIV/CIV+ LC ao REC
(LMivCR). A adição de LC aumentou (P <0,05) a produção de blastocistos em D7 em 28,6%
(LCiv), a quantidade de embriões grau I em 36,9% (LCivR), a taxa de re-expansão em 22,7%, a
eclosão em 20,1% (LCiv) e a atividade mitocondrial foi 1,9 vezes maior (P <0,001) (LCivR) em
relação ao Controle. A quantidade LI foi 29% menor em LCiv e LCivR e 50,2% em LMivCR
comparado Controle (P <0,001). No segundo ensaio os embriões foram cultivados sem adição de
delipidadores (Controle), na presença de 10µM de Forskolin adicionado ao CIV no D5 (FORSK)
ou L-carnitina (0,6 mg/mL) adicionada ao CIV e ao recultivo (LC). A suplementação com LC
aumentou a produção de blastocistos em D7 em 22,0% e de embriões grau I em 30,1% (P <0,05),
em relação ao Controle e ao FORSK. No Experimento 1 a taxa de re-expansão no LC aumentou (P
<0,05) 28,9% em relação ao FORSK. No Experimento 2 foram utilizados dois tratamentos
Controle para congelamento lento (Clássico e Modificado). A eclosão após 48 horas foi maior (P <
0,05) no LC em comparação ao FORSK e aos Controles Clássico e Modificado (77,5%, 41,9%,
40,5%, 40,8% respectivamente). No tratamento LC foi observada diminuição (P < 0,05) de 64,7%
na taxa de embriões degenerados em relação ao Controle Clássico. O tratamento com delipidadores
reduziu o conteúdo de LI (P < 0,001) em 2,2 vezes em FORSK e quatro vezes no LC comparados
ao Controle. A adição de 0,6 mg/mL de L-carnitina aos meios de cultivo e recultivo aumentou a
taxa de produção in vitro de embriões bovinos atuando positivamente sobre a atividade
mitocondrial, reduzindo a quantidade de lipídeos intracelulares e a apoptose e aumentando a
criotolerância dos embriões submetidos ao protocolo de congelamento lento modificado.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/8970 |
| Date | 13 September 2018 |
| Creators | Diesel, Tiago Omar |
| Contributors | Gambarini, Maria Lúcia, Porto, Regiani Nascimento Gagno, Arnhold, Emmanuel, Meirinhos, Maria Lúcia Gambarini, Biancardi, Manoel Francisco, Oliveira Filho, Benedito Dias de, Matos, Moema Pacheco Chediak, Mascioli, Arthur dos Santos |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Zootecnia (EVZ), UFG, Brasil, Escola de Veterinária e Zootecnia - EVZ (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -8695879823182088786, 600, 600, 600, 600, -6217552114249094582, 1346858981270845602, -961409807440757778 |
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