Zoonosis causada por bacterias del género Borrelia. por la transmisiónaccidental por garrapatas infectadas. El género Borrelia. pertenece a la familiaSpirochateaceae, y son 4 las causales de la borreliosis de Lyme, asociadas en elcomplejo Borrelia burgdorferi sensu lato ( B. burgdorferi sensu stricto,B. afzelii, B.garinii y B. Valaisiana) La adherencia de 48 horas es el mínimo exigido, para lainoculación de Borrelia burgdorferi sensu latoDiagnóstico de borreliosis de Lyme: Diagnóstico directo a partir dediferentes muestras clínicas al observarse fácilmente empleando colorantesconvencionales, Cultivo enmedio de BSK, técnicas de amplificación y la detecciónmediante sondas de ADN específico.En el diagnóstico indirecto se emplean como métodos de referencia, elenzimoinmunoanálisis como prueba de cribado y la inmunotransferencia para laconfirmación.Objetivos:1.- Obtener y caracterizar ixódidos procedentes de distintas áreas de laprovincia de Valencia.2.- Determinar la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato en los ixódidosobtenidos.3.- Seleccionar muestras clínicas con resultado en la prueba de cribado EIApositivo.4.- Analizar dichas muestras mediante otras pruebas específicas yconfirmatorias así como evaluar la presencia de reactividad cruzada con otros procesosnosológicos.5.- Estudiar las características clínicas y evolución de los pacientes conmarcadores serológicos sugestivos de borreliosis de Lyme así como evaluar susignificación.Materiales y métodos. Obtención y caracterización de ixódidos, se procedió ala detección de Borrelia burgdorferi mediante estudio microscopico, cultivo y PCR. Laselección de muestras clínicas, se realizó mediante el método de cribado EIA, y elestudio de reactividad cruzada y su confirmación mediante pruebas específicas. Y porúltimo, se realizó el análisis de signos y síntomas clínicos y su relación con lasresultados serológicos. Se realizaron macerados y disecciones a los que se practicó unestudio microscópico y cultivo en BSK II.Ya en el 2º periodo, se procedió a la detección de B. Burgdorferi mediantetécnicas de PCR. anidado, utilizando 2 parejas de iniciadores del gen de Osp A, segúnel método de Guttman y colaboradores, que permiten obtener en la 2ª amplificación,un fragmento de 345 pares de bases. Para el gen de la flagelina, utilizamos igualmene2 parejas de iniciadores del gen de la flagelina, según el método de Lebech ycolaboradores. que permiten obtener en la 2ª amplificación, un fragmento de 275pares de bases. Para el estudio serológico, se utilizó en primer lugar un método decribado EIA IgM-IgG Sistema VIDAS LYT (de bioMèrieux) y un métodocomplementario IFI Lyme Spot (también de bioMèrieux) que determina anticuerpos declase IgM e IgG por separado. Como método confirmatorio, se utilizó lainmunotransferencia B. burgdorferi cepa B31 (de MarDx Diagnostic) y · B. gariniigenogrupo 2 (de Gull Laboratories). La reactividad serológica cruzada, se llevó a cabofrente a Treponema pallidum, Coxiella burnetii, Rickettsia conori y Brucella mellitensis,virus de Epstein-Barr, Citomegalovirus y virus de la inmunodeficiencia humana. Lapoblación de pacientes se correspondió con los atendidos en el área del HGUVConclusiones:1.-La colección e identificación de garrapatas ixódidas procedentes dediferentes áreas de la provincia de Valencia, ha revelado la existencia de cincogéneros, con siete especies distintas. Ninguno de ellos, clasificado como Ixodes ricinus,reconocido principal vector de la borreliosis de Lyme.2.-En ninguna de las garrapatas estudiadas se ha identificado una espiroquetacompatible con Borrelia burdorferi sl. u otra especie de Borrelia asociada a un cuadrode borreliosis de Lyme.3.-Consideramos que el método más adecuado para el estudio microbiológicoen los ixódidos, es la disección de las garrapatas con extracción de sus estructurasglandulares e intestinos medios. El uso de ejemplares macerados para detección pormétodos moleculares es desaconsejado por la probable inhibición de la amplificacióndel ADN específico.4.-El método de enzimoinmunoanálisis como prueba de cribado, selecciona unapoblación de pacientes con características clínicas muy variables, pero también ungrupo de pacientes con manifestaciones características y con una concreta evoluciónclínica, que sustentan la existencia de casos probables de borreliosis de Lyme.5.-La titulación de los anticuerpos específicos de clase IgM e IgG medianteinmunofluorescencia y los criterios establecidos para la interpretación de las pruebasconfirmatorias de inmunotransferencia con antígenos de B. burgdorferi y B. garinii, semuestran escasamente rentables en nuestro medio, ya que no permiten confirmar nidescartar la existencia de la enfermedad en el grupo de pacientes estudiados.Todo lo cual nos permite considerar la necesidad de un mejor estudioepidemiológico y clínico de los casos sospechosos de borreliosis de Lyme, yparticularmente el desarrollo de criterios de diagnóstico microbiológico que se adecuenal perfil de la enfermedad en nuestra área. / Zoonosis caused by bacteria of the genre Borrelia. by the accidentaltransmission by infected ticks. The genre Borrelia. concerns to the familySpirochateaceae, and they are 4 the grounds of Lyme's borreliosis, associated in thecomplex broad Borrelia burgdorferi sensu (B. burgdorferi sensu stricto, B. afzelii, B.garinii and B. Valaisiana) The adherence of 48 hours is the demanded minimum, forthe inoculation of Borrelia burgdorferi sensu lato.Diagnostic of the Lyme borreliosis: Direcly diasnostic by detection of spirochaetawith the uses of the clinical specimens (skin biopsies, CSF semple, peripheral blood,etc.) of patients whith conventional laboratory tintions is relative easy to reconized.Culture of the organism in BSK medium, molecular characterization of Borrelia isolatesby gene sequences from DNAs amplified (flagellin (flaB), and outer surface protein A(ospA)) from ticks or patiens confirmed the presence of several Borrelia species.In the indirect diagnosis use as methods of reference, theenzimoinmunoanálisis as test of screening and the inmunotransferencia for theconfirmationObjetivos:1.- Recolection and caracterization of ixodid ticks from diferent areas ofValencia countri.2.- Investigated la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato in these ixodeticks recolected.,3.-To select clinical samples with result in the test of screening positive EIA.4.-To analyze the above mentioned samples by means of other specific andconfirmatory tests(proofs) as well as to evaluate the presence of cross-reactivity withother processes nosológicos.5.-To study the clinical characteristics and evolution of the patients withserologic results suggestive of borreliosis of Lyme as well as to evaluate hissignificance.Materials and methods: Obtaining and characterization of ixodids, one proceeded tothe detection of Borrelia burgdorferi by means of microscopic study, culture and PCR.The selection of clinical samples, it was realized by means of the method EIA, and thestudy of crossed reactivity and his confirmation by means of specific tests. And finally,there was realized the analysis of signs and clinical symptoms and his relation withresults serológicos. There were realized softened and dissections those who amicroscopic study was practised and culture in BSK II.In the 2º periode, we made a molecular characterization of B. Burgdorferi fromticks by gene sequences DNAs amplified (nexteed PCR using 2 primers of gen of outersurface protein A (OspA), by el Guttman' metode et all that permeted the obtention inthe 2ª amplification, a fragment of 345 pairs of bases. By the flagelina, gene, weusing too 2 pairs of primers of the flagelin gene, by the Lebech metode et al. Thatallow to obtain in 2 ª amplification, a fragment of 275 bases pair. For the serologicstudy, there was in use first a method of sifted EIA IgM-IgG System VIDAS LYT (ofbioMèrieux) and a complementary method IFI Lyme Spot (also of bioMèrieux) thatdetermines antibodies of class IgM and IgG separately. As confirmatory method, therewas in use the inmunotransferencia B. burgdorferi B31 (of MarDx Diagnostic) and B.garinii genogrupo 2 (of Gull Laboratories).The serologic cross reactivity, whith Treponema pallidum, Coxiella burnetii,Rickettsia conori and Brucella mellitensis, Epstein-Barr virus, Citomegalovirus virus andAIDS virus. The population of patients corresponded(fitted) with the attended ones inthe area of the HGUV.Conclusiones:1.-The collection and identification of ixodid ticks proceeding from differentareas of the province of Valencia, it has revealed the existence of five genres, withseven different species. None of them, classified as Ixodes ricinus, recognized principalvector of Lyme's borreliosis.32.-En none of the studied ticks has been identified an espiroqueta compatiblewith Borrelia burdorferi sl. or another Borrelia's species associated with borreliosis ofLyme disease.3.-We considered that the method most adapted for the microbiological study inthe ixodid, is the ticks dissection with extraction of its glandular structures and mediumintestines. The use of specimens softened for detection for molecular methods isdissuaded by the probable inhibition of the amplification of the specific ADN4.-The enzimoinmunoanálisis method of as screening test, a population ofpatients selects with clinical very changeable characteristics, but also a group ofpatients with typical manifestations and with a concrete clinical evolution, which theysustain the existence of probable cases of borreliosis of Lyme.5.-La qualifications of the specific antibodies of class IgM and IgG by means ofinmunofluorescencia and the criteria established for the interpretation of theconfirmatory tests of inmunotransferencia with B. burgdorferi antigens and B. garinii,prove to be scantily profitable in our way, since they allow neither confirm nor todiscard the existence of the disease in the group of studied patients.Allows to consider the need of a better epidemiological and clinical study of thesuspicious cases of borreliosis of Lyme, and particularly the development of criteria ofmicrobiological diagnosis us that they serve to the profile of the disease in our area.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UV/oai:www.tdx.cat:10803/10103 |
| Date | 07 May 2004 |
| Creators | Navarro García, Amanda Estrella |
| Contributors | Muñoz Collado, Carlos, Fraile Fariñas, Teresa, Universitat de València. Departament de Microbiologia i Ecologia |
| Publisher | Universitat de València |
| Source Sets | Universitat de València |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
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