Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Sea anemones contain a variety of biological active compounds including some
potent toxins. For this reason, many investigators have focused their studies in these
proteins, isolated from sea anemones, such as Bunodosoma caissarum. The aim of
this work was to study the mechanism of functional alterations produced by the crude
extract and the PLA2 fraction of B. caissarum in the isolated rat kidney and arteriolar
mesenteric bed. Isolated kidneys from Wistar rats, weighing 250-300g, were perfused
with Krebs-Henseileit solution containing 6% of bovine serum albumin for 120 min. B.
caissarum crude extract (BcE) and PLA2 were added to the system 30 min after the
beginning of each experiment (internal control) and Tezosentan (TZN) and
Indomethacin (IND) were administered in the initial period of each experiment
(T=0min). The mesenteric bed, kept warmed at 37ÂC, was perfused with Krebs
solution at a constant flow, (4mL/min) but with a variable perfusion pressure,
measured for 80 min. mRNA expression of TNF-α, IL-1β, rennin and adenosine
receptors (A1, A2a, A2b and A3) was evaluated by PCR using 18S mRNA as
reference gene. The data were analyzed by Studentâs t-test (p<0.05). BcE altered
kidney function increasing perfusion pressure (PP), renal vascular resistance (RVR),
urinary flow (UF), glomerular filtration rate (GFR) and sodium, potassium and chloride
excretion, especially with the intermediary concentraÃÃo. Tezosentan inhibited these
effects only partially. However, indomethacin presented a blockage more expressive
that TZN. The PLA2 of B. caissarum showed a higher increase of PP at 60 minutes
(Control= 104,17Â3,72; PLA2(0,1) = 130,9Â5,6*; PLA2(0,3) = 165,1Â12,6*; PLA2(1,0)
= 142,3Â9,6*, *p<0,5) and increased RVR, UF, GFR, sodium, potassium and chloride
excretion and urinary osmolarity, with descrease of Na+, K+ and Cl- distal transports..
The blockage of IND was more expressive on the smallest PLA2 concentraÃÃo and
TZN showed a modest effect, blocking more efficiently the intermediary
concentraÃÃo. Neither BcE, nor PLA2 altered the basal perfusion pressure of the
isolated arteriolar mesenteric bed. PLA2 increased the gene expression of TNF-α
(Control = 1,00 Â 0,00 vs. PLA2 = 1,116 Â 0,033*, com p<0,0001)and upnregulated
the expression of adenosine receptors A2a (Control = 1,0 Â 0,01 vs. PLA2 = 1,238 Â
0,043*, com p<0,0001). These results suggest that BcE and PLA2 exert significative
actions in the isolated perfusion kidney, without vascular effects in the arteriolar
mesenteric bed. COX-2 and endothelin appear to be important mediators of the
effects of BcE and PLA2. In addition, adenosine is also involved in the mechanism of
action of B. caissarum / AnÃmonas marinhas contÃm uma variedade de compostos biologicamente ativos
incluindo potentes toxinas. Por esta razÃo, muitos investigadores tÃm centrado seus
estudos nestas proteÃnas, isoladas de anÃmonas marinhas, como Bunodosoma
caissarum. O objetivo deste trabalho foi estudar o mecanismo das alteraÃÃes
funcionais produzidas pelo extrato bruto e da fraÃÃo PLA2 de B. caissarum em rim
isolado de rato e leito vascular mesentÃrico. Rins isolados de ratos Wistar, pesando
250-300g, foram perfundidos durante 120 min com soluÃÃo de Krebs-Henseileit
contendo 6% de albumina bovina. O extrato bruto de B. caissarum (BcE) e PLA2
foram adicionados ao sistema, em diferentes concentraÃÃes, 30 minutos apÃs o
inÃcio de cada experimento (controle interno) e Tezosentan (TZN) e Indometacina
(IND) foram administrados no perÃodo inicial de cada experimento (T = 0 min). O leito
vascular mesentÃrico, mantido aquecido a 37 Â C, foi perfundido com soluÃÃo de
Krebs em um fluxo constante (4mL/min) e a pressÃo medida por 80 min. A expressÃo
de mRNA TNF-α, IL-1 β, renina e receptores de adenosina (A1, A2a, A2b e A3) foi
avaliada por PCR utilizando como referÃncia o mRNA do gene 18S. Os dados foram
analisados por teste t de Student (p <0,05). BcE alterou a funÃÃo renal elevando a
pressÃo de perfusÃo (PP), a resistÃncia vascular renal (RVR), fluxo urinÃrio (UF),
taxa de filtraÃÃo glomerular (TFG) e excreÃÃo de sÃdio, de potÃssio e cloreto,
especialmente com a concentraÃÃo intermediÃria. Tezosentan inibiu estes efeitos
apenas parcialmente. No entanto, indometacina apresentou um bloqueio mais
expressivo que TZN. A PLA2 de B. caissarum elevou a pressÃo de perfusÃo (PP) jÃ
aos 60 minutos (controle = 104,17 Â 3,72; PLA2 (0,1) = 130,9 Â 5,6 *; PLA2 (0,3) =
165,1 Â 12,6 *; PLA2 (1,0) = 142,3 Â 9,6 *, *p <0,5), revelando tambÃm elevaÃÃes de
RVR , UF, TFG, excreÃÃo de eletrÃlitos e osmolaridade urinÃria, com diminuiÃÃo dos
transportes distais de Na+, K+ e Cl-. O bloqueio com IND foi mais expressivo sobre a
menor concentraÃÃo de PLA2, enquanto TZN mostrou um efeito discreto. BcE e PLA2
nÃo alteraram a pressÃo de perfusÃo basal do leito vascular mesentÃrico. PLA2
aumentou a expressÃo relativa de TNFα (C = 1,00 Â 0,00 vs. PLA2 = 1,116 Â 0,033*,
com p<0,0001) e do receptor de adenosina A2a (C = 1,0 Â 0,01 vs. PLA2 = 1,238 Â
0,043*, com p<0,0001).Estes resultados sugerem que BcE e PLA2 exercem aÃÃes
significativas na perfusÃo de rim isolado, sem efeitos vasculares diretos no leito
mesentÃrico. COX-2 e endotelina parecem ser importantes mediadores dos efeitos
da BcE e PLA2. AlÃm disso, adenosina tambÃm parece estar envolvida no
mecanismo de aÃÃo da PLA2 de Bunodosoma caissarum.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:951 |
| Date | 11 January 2008 |
| Creators | Renà Duarte Martins |
| Contributors | Helena Serra Azul Monteiro, Maria Goretti Rodrigues de Queiroz, Marcos Hikari Toyama, ManassÃs Claudino Fonteles, Pedro Jorge Caldas MagalhÃes |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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