El Diagnòstic Genètic Preimplantacional (DGP) permet realitzar el diagnòstic d’alteracions
genètiques en embrions generats in vitro de parelles portadores o afectes de malalties
monogèniques, per tal de seleccionar-ne els no afectes per a la seva transferència a l’úter
matern. El cribratge d’aneuploïdies o PGS (preimplantation genetic screening), en canvi,
consisteix en l’anàlisi de la citogenètica dels embrions per així seleccionar embrions euploides
per a la seva transferència i així incrementar les taxes d’embaràs dels cicles de fecundació in
vitro. El PGS pot dur-se a terme mitjançant la tècnica de la hibridació genòmica comparada
sobre metafases (mCGH), que permet l’anàlisi de la dotació de cadascun dels 22 cromosomes
autosòmics i dels cromosomes sexuals. Aquesta tècnica també permet la detecció de
desequilibris estructurals, ja siguin deguts a translocacions Robertsonianes o recíproques
presents en els progenitors, així com de delecions o duplicacions de fragments cromosòmics,
sovint detectades en pronucli masculí. El PGS es duu a terme, majoritàriament, mitjançant
l’estudi citogenètic d’un sol blastòmer biopsiat de cada embrió que hagi assolit l’estadi de 6-8
cèl·lules.
En aquesta tesi doctoral s’ha determinat l’efecte de l’estadi de replicació de les cèl·lules en ser
analitzades mitjançant la mCGH de cèl·lula única. Aquest estudi s’ha dut a terme tant en un
model de línia cel·lular de fibroblasts com en blastòmers d’embrions humans crio-preservats.
Un segon objectiu d’aquesta tesi doctoral ha estat determinar la presència d’alteracions
cromosòmiques i estructurals en embrions de parelles amb factor masculí d’infertilitat, ja sigui
per reorganitzacions cromosòmiques equilibrades, un seminograma anòmal o una incidència
d’aneuploïdies incrementada als espermatozoides. A les famílies candidates al DGP, se’ls ha
realitzat un estudi complet del seminograma i la fragmentació del DNA espermàtic amb
l’objectiu de relacionar la citogenètica dels embrions i el pronòstic reproductiu de les parelles
amb el grau de fragmentació del DNA espermàtic. El coneixement d’aquests paràmetres
permetrà caracteritzar adequadament les parelles sotmeses a cicles de DGP i predir-ne l’èxit
reproductiu.
En aquesta tesi doctoral també s’ha validat una variant d’anàlisi citogenètica molt més potent
que la mateixa mCGH: els arrays de CGH d’oligonucleòtids d’Agilent. S’ha valorat la
correspondència entre el diagnòstic citogenètic obtingut mitjançant les metodologies de la
mCGH, els arrays de CGH d’oligonucleòtids i els arrays de CGH BACs, tecnologia
àmpliament utilitzada en el DGP durant els darrers anys. La validesa dels arrays de CGH
d’oligonucleòtids per a la seva aplicació a DGP s’ha demostrat en un cas de DGP per un
portador equilibrat d’una translocació Robertsoniana. / Preimplantation Genetic Diagnosis (PGD) allows the diagnosis of genetic disorders in IVF
embryos from affected couples or carriers of monogenic diseases, in order to select non-affected
embryos for transfer to the maternal uterus. Preimplantation genetic screening (PGS), however,
consists in the cytogenetic analysis of embryos in order to select only euploid ones for transfer
and thus increase pregnancy rates in IVF cycles. PGS can be carried out with the comparative
genome hybridization on metaphase spreads (mCGH) technique, which allows cytogenetic
analysis of the 22 autosomal chromosomes in addition to the sex chromosomes. This technique
also allows the detection of structural imbalances, either due to Robertsonian or reciprocal
translocations present in the parents, as well as deletions or duplications of chromosome
segments, often found in male pronucleus. PGS is mainly carried out by analysing one
blastomere biopsied from each embryo that has reached the 6-8-cell stage.
In this thesis, we have determined the effect of the cell stage in mCGH analysis from single
cells. This study has been carried out with a model cell-line of fibroblasts and also with
blastomeres from human cryopreserved embryos.
A second objective of this thesis was to determine the presence of structural abnormalities in
embryos from couples with male-factor infertility, either with balanced chromosomal
rearrangements, abnormal seminogram or increased incidence of sperm aneuploidies. A
complete seminogram and sperm DNA fragmentation analysis has been performed in all PGD
couples in order to study the relationship between embryo cytogenetics, reproductive prognosis
and sperm DNA fragmentation. This will allow a more accurate characterisation of couples
undergoing PGD cycles, so their reproductive success can be predicted.
A different methodology, much more powerful than mCGH, has also been validated in this
thesis for single-cell cytogenetic analysis: oligonucleotide CGH array from Agilent.
Correspondence between cytogenetic diagnoses obtained by mCGH, oligonucleotide CGH array
and BAC CGH array, a widely used technology in PGD in the last years, has been analysed.
The validity of oligonucleotide CGH array for its application to PGD has been demonstrated in
a PGD case for a balanced carrier of a Robertsonian translocation.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UAB/oai:www.tdx.cat:10803/131330 |
| Date | 16 December 2013 |
| Creators | Ramos Masdeu, Laia |
| Contributors | Navarro i Ferreté, Joaquima, Benet i Català, Jordi, Obradors Cherta, Albert, Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Biologia Cel·lular, de Fisiologia i d'Immunologia |
| Publisher | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Source Sets | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Language | Catalan |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 226 p., application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs., info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0026 seconds