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Previous issue date: 2014-11-05 / The establishment of an efficient methodology for regeneration in Urochloa spp via somatic embryogenesis is an essential step for genetic engineering works and to support the breeding programs of the signal grass. The aim of this study was to evaluate different concentrations of growth regulators on callus induction, somatic embryogenesis and plant regeneration of Urochloa spp. using mature seeds as the initial explant. Firstly, eight treatments were tested containing different concentrations (1, 2, 4 and 8 mg L-1) of 2,4-D or picloram, using Marandu cultivar. After, the same concentrations of picloram were tested for others genotypes: cultivars Xaraés and Piata of U. brizantha, U. decumbens cv. Basilisk, U. humidicola. cv. Llanero and U. ruziziensis cv. Ruziziensis. The experiments were conducted in a completely randomized design with four replications per treatment, and each replicate consisted of a petri dish containing 10 seeds each. The experiments were repeated three times. Seeds were sterilized in 5% NaOCl containing three drops of Tween 20, washed five times in sterile distilled water and inoculated onto MS medium containing the treatments described above. The experiments were maintained in growth chamber at 25 ° C ± 2 ° C in the dark, and sub-cultured every 14 days until the emergence of embryogenic calluses. To induce plant regeneration, these calluses were transferred to hormone-free MS medium for 14 days in indirect light followed by transfer to MS/2 medium containing 2 mg/L-BA in direct light with a photoperiod of 16 hours. The number of seeds that produced primary calluses, the number of calluses with shoots and the number of regenerated plants were analyzed in each treatment. To demonstrate embryogenic competence, the different calluses types were cyto-chemically analyzed by double staining with acetic carmine and Evans blue. There was no significant difference between concentration of 2,4D or picloram for production of primary calluses of U. brizantha Marandu ranging from 58.5% to 69.2%. Calluses induced under picloram showed the highest percentage of shoot formation differing significantly from those induced under 2.4D. The genotypes U. decumbens cv. Basilisk, U. brizantha cv. Marandu and Xaraés showed the significant highest number of regenerated plants at 1 mg/L picloram. Green and morphologically normal plants were regenerated and acclimatized, opening the possibility of using this protocol to obtain transgenic plants in Urochloa spp. / O estabelecimento de uma metodologia eficiente para regeneração in vitro de Urochloa spp. via embriogênese somática é essencial para trabalhos de manipulação genética e, para dar suporte ao melhoramento do capim braquiária. O objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes concentrações de reguladores de crescimento na indução de calos, embriões somáticos e na regeneração de plantas de Urochloa spp., utilizando sementes maduras como explante inicial. Inicialmente, foram testados quatro tratamentos contendo 2,4-D ou picloram, nas concentrações de 1, 2, 4 e 8 mg/L usando a cultivar Marandu (1cultivar x 2 reguladores x 4 concentrações x 12 repetições). Posteriormente, as mesmas concentrações de picloram foram testadas para as cultivares Xaraés e Piatã de U. brizantha e para as espécies de U. decumbens cv. Basilisk, U. humidicola cv. Llanero e U. ruziziensis cv. Ruziziensis (6 cultivares x 1 regulador x 4 concentrações x 12 repetições). Os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições por tratamento, sendo que cada repetição foi composta por uma placa contendo 10 sementes cada. Os experimentos foram repetidos três vezes. As sementes foram desinfestadas em NaOCl a 5% contendo três gotas de Tween 20, lavadas cinco vezes em água destilada esterilizada e inoculadas em meio MS contendo as diferentes concentrações dos reguladores de crescimento. Os experimentos foram mantidos em câmara de crescimento a 25 ºC ± 2 ºC, na ausência de luz, sendo sub-cultivados a cada 14 dias até o surgimento de calos embriogênicos. Estes calos foram transferidos para o meio MS sem adição de fitorreguladores por 14 dias, em luz indireta e, em seguida, transferidos para o meio MS/2 contendo 2 mg/L de BA, sob luz direta, com fotoperíodo de 16 horas para regeneração de plantas. Foram analisados o número de sementes que produziram calos primários, número de calos que produziram brotos e número de plantas regeneradas. Os diferentes tipos de calos produzidos foram avaliados citoquimicamente por meio da dupla coloração com Carmim acético e azul de Evans para certificar a competência embriogênica. Para a U. brizantha cv Marandu não houve diferença significativa entre os tratamentos para o percentual médio de sementes que produziram calos primários variando de 58,5% a 69,2%. Calos embriogênicos induzidos com o regulador de crescimento picloram certificaram o maior percentual de formação de brotos diferindo significativamente daqueles induzidos sob 2,4-D. O maior número de plantas regeneradas foi observado na concentração de 1 mg/L de picloram para os genótipos U. decumbens cv. Basilisk, U. brizantha cv. Marandu e Xaraés e não apresentando diferença significativa entre eles. Plantas verdes e morfologicamente normais foram regeneradas e aclimatizadas, abrindo a possibilidade do uso deste protocolo para obtenção de plantas transgênicas em Urochloa spp.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:bdtd.unoeste.br:tede/441 |
| Date | 05 November 2014 |
| Creators | Takamori, Luciana Midori |
| Contributors | Ribas, Alessandra Ferreira, Borgo, Lúcelia, Arruda, Maricília Conceição Cardoso de |
| Publisher | Universidade do Oeste Paulista, Mestrado em Agronomia, UNOESTE, BR, Ciências Agrárias |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNOESTE, instname:Universidade do Oeste Paulista, instacron:UNOESTE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 308868666724573970, 500 |
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