Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-12T15:56:43Z
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Previous issue date: 2016-03-04 / CNPQ / A infecção pelo Papilomavírus Humano, além de representar uma doença
sexualmente transmissível altamente disseminada, é responsável por 5% dos
cânceres em humanos, destacando o câncer cervical com altos índices de incidência
e mortalidade. Embora comprovadamente eficazes, as vacinas vigentes não
combatem infecções já estabelecidas e apresentam um elevado custo de produção.
Esse cenário revela a necessidade de estratégias vacinais alternativas. O presente
trabalho propõe a expressão de diferentes genes recombinantes em Escherichia coli,
uma plataforma biotecnológica econômica, de fácil manipulação e de alto
rendimento. Os genes recombinantes utilizados foram: L1 de HPV16 e construções
quiméricas basedas na substituição de epítopos da oncoproteína E5 na alça h4 e na
região C-terminal de L1, com potencial para geração de antígenos profiláticoterapêuticos
e na substituição de epítopos da proteína L2 na região da alça h4 para
avaliação de possível neutralização cruzada. Após subclonagem em pGEM-T, esses
genes foram clonados em vetor de expressão pAE e linhagens de Escherichia coli
BL21 e Rosetta foram transformadas com os vetores de expressão gerados. A
confirmação da produção das proteínas se deu por Western blot, a partir de extratos
de culturas induzidas com IPTG. Otimizações nos protocolos de indução, lise e
preparo das amostras foram realizadas ao longo dos experimentos. Os resultados
obtidos demonstraram a produção dos antígenos recombinantes, e deverão ser
validados em futuros ensaios imunológicos quanto à capacidade de induzir
respostas imunes em animais desafiados. / Human papillomavirus infection, besides to represent a widespread sexually
transmitted disease, is responsible for 5% of cancers in humans, highlighting cervical
cancer with high rates of incidence and mortality. Although proven effective, the
existing vaccines do not eliminate infections already established and have a high
cost of production. This scenario shows the need for alternative vaccine strategies.
This study proposes the expression of different recombinant genes in Escherichia
coli, an economic, easy handling and high performance biotechnology platform.
Recombinant genes used were: L1 of HPV16 and chimeric basedas constructions in
replacement E5 oncoprotein epitopes on h4 loop and L1 C-terminal region, with the
potential to generate prophylactic-therapeutic antigens and replacing L2 protein
epitopes in loop region h4 for evaluation of possible cross-neutralization. After
subcloning in pGEM-T, these genes were cloned into vector pAE expression and
Escherichia coli BL21 and Rosetta were transformed with the expression vectors
generated. Confirmation of protein production was performed by Western blot from
extracts of cultures induced with IPTG. Optimizations in the induction protocols, lysis
and preparation of the samples were carried out throughout the experiments. The
results demonstrated the production of recombinant antigens and should be validated
in future immunological assays for the ability to induce immune responses in
challenged animals.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/19540 |
| Date | 04 March 2016 |
| Creators | SILVA, Anna Jéssica Duarte |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/3473903684822728, FREITAS, Antonio Carlos de, REIS, Christian Robson de Souza |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Genetica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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