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Previous issue date: 2017-03-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is caused by protozoa of the
genus Leishmania. The parasite is hosted by macrophages in cutaneous or mucosal
lesions. Monocytes are precursors of macrophages, but there is little information
about monocyte activation during ATL. The present study aimed to evaluate cytokine
profile of monocytes from patients with localized cutaneous leishmaniasis (LCL) in
whole blood cultures stimulated with toll-like receptor (TLRs) and NOD2 receptor
agonists. Peripheral blood from patients with active lesions and no treatment, and
from healthy blood donors paired by sex and age, was diluted into culture medium
and incubated with lipopolysaccharide (LPS), TLR4 agonist; lipopeptide Pam3Cys
(Pam), TLR2 agonist; muramyldipeptide (MDP), NOD2 agonist or Leishmania (V.)
braziliensis antigen (Ag). After incubation, supernatants were collected to measure
IL-6 and TNF (6 h) and IL-10 (24 h) by ELISA. There was production of IL-6, TNF
and IL-10 in cultures from patients and controls after stimulation with all agonists and
Ag (p < 0.05, medium vs stimulus, n = 29). No differences were detected between
concentrations of TNF and IL-10, but IL-6 was higher produced in non-stimulated
cultures from patients than controls (p < 0.05, n = 29) or when the stimulus was MDP
(p < 0.05, n = 19). The combination Pam/MDP increased the production of IL-6,
TNF and IL-10 in cultures from patients and controls when compared with each
stimulus isolated (p < 0.05, n = 13 - 14); similarly, Ag and MDP together induced
higher concentrations of IL-6, TNF and IL-10 (IL-6 and IL-10, especially in cultures
from patients) in comparison with each stimulus (p < 0.05, n = 11 - 14). There was no
correlation between the number, size or time of lesions and levels of IL-6, TNF or
IL-10. Patients with more than one cycle of treatment to obtain clinical cure showed
higher levels of MDP-induced IL-6 than those cured with one cycle of treatment (p <
0.05, n = 17 cured with one cycle vs 8 cured with more than one cycle). Data suggest
that LCL patient monocytes can be activated via TLR2, TLR4 or NOD2 to produce
pro-inflammatory (IL-6, TNF) and anti-inflammatory (IL-10) cytokines and IL-6 can
be associated with tissue lesion and delay of lesion healing indicating an
immunopathogenic role in LCL. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é causada por
protozoários do gênero Leishmania, que acomete a pele e/ou mucosas. Os
monócitos são precursores de macrófagos, células hospedeiras do parasito, e pouco
se sabe sobre seu nível de ativação durante a LTA. O presente estudo teve como
objetivo avaliar o perfil de resposta de citocinas produzidas por monócitos de
pacientes com leishmaniose cutânea localizada (LCL) em hemoculturas, após
ativação com agonistas de receptores similares a toll (TLRs) e de receptor NOD2. O
sangue periférico de pacientes com LCL, com lesões ativas e sem tratamento, e de
indivíduos controles, pareados por sexo e idade, foi diluído em meio de cultura e
incubado com lipopolissacarídeo (LPS), agonista de TLR4; lipopeptídeo Pam3Cys
(Pam), agonista de TLR2; muramildipeptídeo (MDP), agonista de NOD2 ou
antígenos de Leishmania (V.) braziliensis (Ag). Após incubação, os sobrenadantes
foram colhidos para dosagem de IL6 e TNF (6 h) e IL-10 (24 h), por ELISA. Nas
hemoculturas dos pacientes e dos controles, houve produção de IL-6, TNF e IL-10,
após incubação com todos os estímulos (p < 0,05, Meio vs estímulos, n = 29). Ao
comparar pacientes e controles, não houve diferença quanto à produção de TNF e
IL-10, mas a produção de IL-6 foi maior nas hemoculturas não estimuladas dos
pacientes (p < 0,05, n = 29) e na presença do MDP (p < 0,05, n = 19). A combinação
Pam/MDP aumentou a produção de IL-6, TNF e IL-10 nas hemoculturas dos
pacientes e controles, em relação a cada estímulo sozinho (p < 0,05, n = 13 - 14); de
maneira similar, Ag e MDP juntos aumentaram a concentração de IL-6, TNF e IL-10
(IL-6 e IL-10, especialmente nas hemoculturas dos pacientes) (p < 0,05, n = 11 - 14).
Não houve correlação significante entre o número, o tamanho e o tempo das lesões
dos pacientes com LCL e as concentrações de IL-6, TNF e IL-10 nas hemoculturas
dos mesmos. Quando comparados os pacientes clinicamente curados após um ciclo
de medicamento e aqueles clinicamente curados após mais de um ciclo de
medicamento em relação às concentrações de TNF e IL-10 não foram detectadas
diferenças significantes entre os grupos, porém, em relação à produção de IL-6, foi
observado que esta foi mais elevada nos pacientes curados com mais de um ciclo
de medicamento, após o estímulo MDP (p < 0,05, n = 17 curados com 1 ciclo vs 8
xv
curados com mais de 1 ciclo). Os dados sugerem que os monócitos de pacientes
com LCL podem ser ativados via TLR2, TLR4 e NOD2, induzindo a produção de
citocinas pró-inflamatórias (IL-6, TNF) e anti-inflamatória (IL-10) e a IL-6 pode estar
associada ao dano tecidual e a demora na cura dos pacientes, possuindo um papel
imunopatogênico na LCL humana.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/7243 |
| Date | 10 March 2017 |
| Creators | Costa, Ana Carolina Vieira da |
| Contributors | Dias, Fátima Ribeiro, Dias, Fátima Ribeiro, Cardoso, Ludimila Paula Vaz, Pereira, Ledice Inacia de Araujo |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Biologia da Relação Parasito-Hospedeiro (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -5087190859350688984, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, 5989919188376747614, -961409807440757778 |
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