O monitoramento terapêutico da concentração de vancomicina é uma forma de melhorar a segurança e a eficiência no tratamento com este antibiótico. A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) é considerada padrão ouro para a quantificação desta droga. No entanto a análise exige que sejam realizados vários procedimentos de purificação e análise da amostra, o que reduz sua aplicabilidade ao uso clínico. Atualmente, não há consenso quanto aos níveis séricos adequados ao tratamento do neonato ou de como as doses devem ser ajustadas. Este trabalho propõe um protocolo de monitorização terapêutica da vancomicina e desenvolve e valida um método simplificado, de baixo custo e menor volume de amostra necessário para quantificação da concentração sérica da vancomicina através de CLAE com detecção por arranjo de diodos. As amostras foram extraídas por precipitação de proteínas com ácido trifluoroacético (ATF), o sobrenadante foi injetado diretamente no sistema cromatográfico. A fase móvel consistiu de ATF à concentração de 0,014% (pH 2.800) em água ultrapura e acetonitrila (92:8, v/v), sob fluxo de 2 mL/min por eluição em método isocrático e temperatura de 40 oC. As respostas foram monitoradas no comprimento de onda de 230,9 nm. A validação foi conduzida de acordo com a resolução da RDC n.o 27, de 17 de maio de 2012 da ANVISA. O analito e o padrão interno (7-hidroxicumarina) foram eluídos em torno de 5.1 min e 10.3 min respectivamente. A linearidade do método foi determinada entre 2 e 70 mg/L com correlação linear de superior a 0.999. O método mostrou-se adequado a aplicação proposta, com vantagens volume de amostra exigido, o processo de extração simplificado e resultados satisfatórios com relação às precisão, exatidão, estabilidade e seletividade. O método de análise testado em 17 amostras reais de 10 pacientes com resultados satisfatórios. O protocolo de monitorização terapêutica foi adequadamente desenvolvido. / Therapeutic monitoring of vancomycin concentration can improve the safety and efficiency of the treatment with this antibiotic. High-performance liquid chromatography (HPLC) is considered gold standard for quantification for this drug. However the analysis requires multiple procedures for purification and analysis of the sample, which reduces their applicability for clinical use. There`s currently no consensus on vancomycin serum target levels and dose adjustment among newborns. This paper proposes a vancomycin therapeutic monitoring protocol and develops and validates a low cost, simplified method, with smaller sample volume requirement for serum concentration of vancomycin determination by using HPLC with diode array. Samples were extracted by protein precipitation with trifluoroacetic acid (TFA), supernatant was injected directly into the chromatographic system. Mobile phase consisted of TFA 0.014% (pH 2.800) in ultrapure water and acetonitrile (92:8, v /v) under flow rate of 2 mL / min eluting in isocratic method in 40oC. Response were monitored at a wavelength of 230.9 nm. Validation was conducted in accordance with the resolution of the RDC No. 27 of May 17, 2012 ANVISA. Vancomycin and internal standard (7-hydroxycoumarin) were eluted at approximately 5.1 min. and 10.3 min respectively. Linearity was assessed between 2 and 70 mg /L with linear correlation greater than 0.999. The method proved to be suitable for the proposed application, with the advantages of less sample volume required, simplified extraction and achieved satisfactory results of precision, accuracy, stability and selectivity. This method was tested in 17 real samples from 10 patients with satisfactory results. The drug monitoring protocol was successfully developed.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.utfpr.edu.br:1/1839 |
| Date | 31 March 2016 |
| Creators | Vilas Boas, Rogério Rodrigues |
| Contributors | Schneider Júnior, Bertoldo, Cardoso, Marco André, Schneider Júnior, Bertoldo, Zibetti, Rosiane Guetter Mello, Pontes, Flávia Lada Degaut |
| Publisher | Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Curitiba, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, UTFPR, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UTFPR, instname:Universidade Tecnológica Federal do Paraná, instacron:UTFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0113 seconds