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Previous issue date: 2009 / Fagócitos mononucleares são células alvo para micobactérias patogênicas
como M. tuberculosise M. leprae. Essas micobactérias têm a capacidade de
modular os mecanismos microbicidas dos macrófagos, sobreviver e replicar
nessas células. Contudo o mecanismo molecular envolvido nesta desativação não
é totalmente compreendido. Dados do nosso laboratório têm demonstrado que o
M. lepraeé capaz de induzir a expressão do fator de crescimento semelhante a
insulina I um hormônio com efeito anti-apoptotico ecom atividade de proliferação –
em Células de Schwann humanas. Recentemente, foi relatado que IGF-I é capaz
de inibir a expressão da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e
conseqüentemente a produção de óxido nítrico em macrófagos induzido por
Leshimania amazonensis. Baseado nestes dados, nós temos investigado o
envolvimento do IGF-I na desativação dos macrófagosobservada na infecção
micobacteriana. Com este propósito, macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7
foram estimulados ou não com M. lepraee a expressão de IGF-I foi monitorada
através de RT-PCR quantitativo e ensaio imunoenzimático específico, ELISA.
Duas outras espécies de micobactérias, M. bovisBCG e M. smegmatis,
respectivamente, uma cepa atenuada de M. bovise uma micobactéria não-patogênica, foram testadas para comparação. O estímulo com M. lepraeou BCG,
em contraste com M. smegmatis, regulou positivamente a expressão de RNAm
para IGF-I e aumento significantemente os níveis daproteína quando comparado
com a cultura controle. Além disso, nós também investigamos o efeito do IGF-I na
produção de NO e na expressão de iNOS induzida por micobactérias em
macrófagos RAW 264.7. A produção de NO foi monitorada pela determinação da
concentração de nitrito no sobrenadante em meio de cultura, utilizando reagente
de Griess e a expressão de iNOS monitorada por Western Blot. M. lepraefoi um
fraco estimulo para indução de iNOS. Em contraste, BCG e M. smegmatis
induziram a expressão e, como conseqüência, uma significantiva produção de NO
em macrófagos RAW. Interessantemente, células pré-tratadas com IGF-I
mostraram uma significantiva redução na produção denitrito após a estímulo com
micobactérias, o que correlacionou com uma regulação negativa da expressão de
iNOS. Além disso, IGF-I foi capaz de reduzir parcialmente a produção de NO
induzida por IFN-γrecombinante. Esses resultados sugerem que o IGF-Ipode
contribuir para a persistência micobacteriana no hospedeiro, modulando
negativamente a resposta imune inata durante a infecção. / Mononuclear phagocytes are target cells for pathogenic mycobacteria such as
Mycobacterium tuberculosisand Mycobacterium leprae. These bacteria are able to
subvert macrophage microbicidal mechanisms and survive and replicate within
these cells. However, the molecular mechanisms involved in this deactivation
remain incompletely understood. We have previously described that M. leprae
induces the expression of insulin-like growth factor I (IGF-I) – an hormone with
anti- apoptotic and proliferation activities– in human Schwann cells. Recently it has
been reported that IGF-I can inhibit inducible nitric oxide synthase (iNOS)
expression and consequently nitric oxide (NO) production in macrophages infected
with Leishmania amazonensis. Based on these data, we have investigated the
potential involvement of IGF-I on macrophage deactivation observed during
mycobacterial infection. For this purpose, RAW 264.7 murine macrophages were
treated or not with M. lepraeand the expression of IGF-I was monitored by
quantitative RT-PCR and specific sandwich ELISA. Two other species of
mycobacteria, M. bovisBCG and M. smegmatis, respectively, an attenuated strain
of M. bovisand a nonpathogenic mycobacterium, were tested forcomparison. M.
lepraeor BCG treatment, in contrast to M. smegmatis, positively regulated the
expression of IGF-I by RAW cells when compared withcontrol cultures.
Furthermore, we also investigated the effect of IGF-I on mycobacterium-induced
iNOS expression and NO production in RAW 264.7 macrophages. NO production
was evaluated by determination of nitrite concentration in the culture media using
the Griess reagent and iNOS expression was monitored by Western Blot. M. leprae
was a weak stimulus for iNOS induction. In contrast, BCG and M. smegmatis
induced iNOS expression and, as a consequence, significan levels of NO
production in RAW macrophages. Interestingly, IGF-Ipre-treated cells showed a
significant reduction in nitrite production after infection with mycobacteria that
correlated with the down regulation of iNOS expression. Moreover, IGF-I was able
to partially reduce NO production induced by recombinant interferon-gamma.
Taken together, these results suggest that IGF-I may contribute to mycobacterium
persistent in the host by down modulating host innate response during infection.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/6070 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Silva, Leonardo Ribeiro Batista |
| Contributors | Pessolani, Maria Cristina Vidal |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Leonardo Ribeiro Batista Silva, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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