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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A tuberculose (TB) ocupa o segundo lugar em causa de morte por doença infecciosa de notificação compulsória. Uma das estratégias para seu controle é a vacinação, e a única vacina disponível é o BCG (Bacilo de Calmette-Guèrin). Embora utilizada mundialmente, a vacina BCG apresenta diversas limitações. O Brasil utiliza a cepa Moreau para produção da vacina, sendo o único país do mundo autilizar, desde os anos 1930, esta cepa para vacinação. Como observado para outros patógenos intracelulares, a imunidade celular desempenha papel importante na proteção do hospedeiro contra a TB. O IFNy, secretado por células T, é descrito como uma citocina particularmente importante participando na resposta imune protetora, e é empregado como correlato de proteção, embora sua utilidade seja ainda questionável, sobretudo em populações adultas. Isto evidencia a necessidade de buscar biomarcadores adicionais que permitam uma correlação de proteção mais confiável. As proteínas extracelulares micobacterianas estão entre as primeiras moléculas a interagirem com o sistema imune do hospedeiro, e uma melhor compreensão de seu papel imunomodulatório poderá contribuir para o desenvolvimento de novos alvos para o controle e erradicação da TB. Uma estratégia para a identificação de proteínas imunologicamente relevantes é a análise do imunoproteoma, que combina a abordagem proteômica com uma apresentação imunológica dos dados. A caracterização de soros, provenientes de indivíduos vacinados, muitas vezes revela diferentes padrões de reconhecimento que podem ser indicativos dos diferentes graus de proteção conferidos pela vacina em uma população heterogênea
Empregamos assim esta tecnologia, combinando a separação por eletroforese bi-dimensional (2DE) de antígenos protéicos extracelulares da cepa vacinal brasileira seguida de western-blot, para avaliar o perfil imunoproteômico da resposta humoral de indivíduos saudáveis, PPD negativos, revacinados com BVG Moreau e classificados como alto e baixo produtores de IFNy. Nossos resultados revelam um padrão de reconhecimento claramente distinto entre os grupos avaliados, correlacionado com o perfil de produção de IFNy. Dentre as proteínas imunoreativas identificadas, um grupo (antígenos do complexo 85) foi reconhecido por todos os soros incluídos no estudo, inclusive controles. Alguns antígenos foram reconhecidos exclusivamente pelos indivíduos classificados como alto produtores de IFNy e outros somente pelos indivíduos enquadrados no grupo de baixo produtores. Algumas proteínas foram selecionadas e produzidas sob a forma recombinante em Escherichia coli possibilitando sua avaliação mais detalhada frente aos soros individualizados. Entre os antígenos diferencialmente reconhecidos, as proteínas Mpb70 e Mpb83 se destacaram como potenciais correlatos da proteção oferecida pela vacinação com BCG Moreau, tendo sido reconhecidos somente pelos indivíduos produtores de elevados níveis de IFNy. Estudos adicionais são necessários para determinar a aplicabilidade efetiva de tais antígenos como potenciais correlatos da proteção conferida pela vacinação com BCG Moreau. Este é o primeiro relato que detalha o perfil de reconhecimento sorológico por indivíduos revacinados com BCG Moreau frente a antígenos extracelulares da cepa homóloga, e contribui para uma melhor compreensão da cepa vacinal brasileira contra a TB / Tuberculosis (TB) holds the second place as cause o
f death by an infectious
disease of obligatory notification. One of the stra
tegies for its control is vaccination,
and the only vaccine available is BCG (Bacillus Cal
mette-Guerin). Although used
worldwide, BCG shows various limitations. Brazil us
es the Moreau strain for vaccine
production, being the only country in the world to
use, since the 1930s, this strain for
vaccination. As observed for other intracellular pa
thogens, cellular immunity plays an
important role in host protection against TB. IFN
γ
secreted by T cells is described as
a particularly important cytokine participating in
protective immune responses, being
used as a correlate of protection, although its uti
lity remains questionable, especially
in adult populations. This highlights the need to s
eek additional biomarkers yielding
better surrogates of protection. Mycobacterial extr
acellular proteins are among the
first molecules to interact with the host immune sy
stem and a better understanding of
their immunomodulatory role may contribute to the d
evelopment of new targets for
the control and eradication of TB. A strategy for t
he identification of immunologically
relevant proteins is the analysis of the immunoprot
eome, combining a proteomic
approach with an immunological presentation of the
data. The characterization of
sera from vaccinated individuals often reveals diff
erent patterns of recognition that
may be indicative of the different degrees of prote
ction conferred by the vaccine in a
heterogeneous population. We have thus employed thi
s technology, combining the
separation by two-dimensional electrophoresis (2DE)
of extracellular proteins from
the Brazilian vaccine strain, followed by Western b
lot to assess the
immunoproteomic profile of the humoral response in
healthy, PPD negative subjects,
re-vaccinated with BCG Moreau and classified as hig
h or low producers of IFN
γ
. Our
results reveal a clearly distinct recognition patte
rn between the evaluated groups,
correlating with the profile of IFN
γ
production. Among the immunoreactive proteins
identified, one group (85 complex antigens) was rec
ognized by all sera included in
the study, including controls. Some antigens were r
ecognized only by individuals
classified as high producers of IFN
γ
and others only by the individuals included in the
group of low producers. Some proteins were selected
and produced in recombinant
form in
Escherichia coli
allowing for their further evaluation against the
individual
sera. Among the antigens differentially recognized,
Mpb70 and Mpb83 proteins stood
out as potential correlates of protection offered b
y vaccination with BCG Moreau, and vi
were only recognized by individuals producing high
levels of IFN
γ
. Additional studies
are needed to determine the effective applicability
of these antigens as potential
correlates of protection provided by vaccination wi
th BCG Moreau. This is the first
report detailing the serologic recognition profile
of individuals re-vaccinated with BCG
Moreau against extracellular antigens of the homolo
gous strain, and contributes to a
better understanding of the Brazilian vaccine strai
n against TB.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13815 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Pereira, Melissa Pontes |
| Contributors | Pessolani, Maria Cristina Vidal, Horn, Cynthia Silveira, Kritski, Afrânio Lineu, Kalume, Dário Eluan, Moraes, Milton, Lima, Leila de Mendonça |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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