Made available in DSpace on 2016-04-15T12:59:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 melissa_pereira_ioc_dout_2009.pdf: 8311387 bytes, checksum: fc500887f8ee4dfdef6441b8f9d7d150 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A tuberculose (TB) ocupa o segundo lugar em causa de morte por doença infecciosa de notificação compulsória. Uma das estratégias para seu controle é a vacinação, e a única vacina disponível é o BCG (Bacilo de Calmette-Guèrin). Embora utilizada mundialmente, a vacina BCG apresenta diversas limitações. O Brasil utiliza a cepa Moreau para produção da vacina, sendo o único país do mundo autilizar, desde os anos 1930, esta cepa para vacinação. Como observado para outros patógenos intracelulares, a imunidade celular desempenha papel importante na proteção do hospedeiro contra a TB. O IFNy, secretado por células T, é descrito como uma citocina particularmente importante participando na resposta imune protetora, e é empregado como correlato de proteção, embora sua utilidade seja ainda questionável, sobretudo em populações adultas. Isto evidencia a necessidade de buscar biomarcadores adicionais que permitam uma correlação de proteção mais confiável. As proteínas extracelulares micobacterianas estão entre as primeiras moléculas a interagirem com o sistema imune do hospedeiro, e uma melhor compreensão de seu papel imunomodulatório poderá contribuir para o desenvolvimento de novos alvos para o controle e erradicação da TB. Uma estratégia para a identificação de proteínas imunologicamente relevantes é a análise do imunoproteoma, que combina a abordagem proteômica com uma apresentação imunológica dos dados. A caracterização de soros, provenientes de indivíduos vacinados, muitas vezes revela diferentes padrões de reconhecimento que podem ser indicativos dos diferentes graus de proteção conferidos pela vacina em uma população heterogênea Empregamos assim esta tecnologia, combinando a separação por eletroforese bi-dimensional (2DE) de antígenos protéicos extracelulares da cepa vacinal brasileira seguida de western-blot, para avaliar o perfil imunoproteômico da resposta humoral de indivíduos saudáveis, PPD negativos, revacinados com BVG Moreau e classificados como alto e baixo produtores de IFNy. Nossos resultados revelam um padrão de reconhecimento claramente distinto entre os grupos avaliados, correlacionado com o perfil de produção de IFNy. Dentre as proteínas imunoreativas identificadas, um grupo (antígenos do complexo 85) foi reconhecido por todos os soros incluídos no estudo, inclusive controles. Alguns antígenos foram reconhecidos exclusivamente pelos indivíduos classificados como alto produtores de IFNy e outros somente pelos indivíduos enquadrados no grupo de baixo produtores. Algumas proteínas foram selecionadas e produzidas sob a forma recombinante em Escherichia coli possibilitando sua avaliação mais detalhada frente aos soros individualizados. Entre os antígenos diferencialmente reconhecidos, as proteínas Mpb70 e Mpb83 se destacaram como potenciais correlatos da proteção oferecida pela vacinação com BCG Moreau, tendo sido reconhecidos somente pelos indivíduos produtores de elevados níveis de IFNy. Estudos adicionais são necessários para determinar a aplicabilidade efetiva de tais antígenos como potenciais correlatos da proteção conferida pela vacinação com BCG Moreau. Este é o primeiro relato que detalha o perfil de reconhecimento sorológico por indivíduos revacinados com BCG Moreau frente a antígenos extracelulares da cepa homóloga, e contribui para uma melhor compreensão da cepa vacinal brasileira contra a TB / Tuberculosis (TB) holds the second place as cause o f death by an infectious disease of obligatory notification. One of the stra tegies for its control is vaccination, and the only vaccine available is BCG (Bacillus Cal mette-Guerin). Although used worldwide, BCG shows various limitations. Brazil us es the Moreau strain for vaccine production, being the only country in the world to use, since the 1930s, this strain for vaccination. As observed for other intracellular pa thogens, cellular immunity plays an important role in host protection against TB. IFN γ secreted by T cells is described as a particularly important cytokine participating in protective immune responses, being used as a correlate of protection, although its uti lity remains questionable, especially in adult populations. This highlights the need to s eek additional biomarkers yielding better surrogates of protection. Mycobacterial extr acellular proteins are among the first molecules to interact with the host immune sy stem and a better understanding of their immunomodulatory role may contribute to the d evelopment of new targets for the control and eradication of TB. A strategy for t he identification of immunologically relevant proteins is the analysis of the immunoprot eome, combining a proteomic approach with an immunological presentation of the data. The characterization of sera from vaccinated individuals often reveals diff erent patterns of recognition that may be indicative of the different degrees of prote ction conferred by the vaccine in a heterogeneous population. We have thus employed thi s technology, combining the separation by two-dimensional electrophoresis (2DE) of extracellular proteins from the Brazilian vaccine strain, followed by Western b lot to assess the immunoproteomic profile of the humoral response in healthy, PPD negative subjects, re-vaccinated with BCG Moreau and classified as hig h or low producers of IFN γ . Our results reveal a clearly distinct recognition patte rn between the evaluated groups, correlating with the profile of IFN γ production. Among the immunoreactive proteins identified, one group (85 complex antigens) was rec ognized by all sera included in the study, including controls. Some antigens were r ecognized only by individuals classified as high producers of IFN γ and others only by the individuals included in the group of low producers. Some proteins were selected and produced in recombinant form in Escherichia coli allowing for their further evaluation against the individual sera. Among the antigens differentially recognized, Mpb70 and Mpb83 proteins stood out as potential correlates of protection offered b y vaccination with BCG Moreau, and vi were only recognized by individuals producing high levels of IFN γ . Additional studies are needed to determine the effective applicability of these antigens as potential correlates of protection provided by vaccination wi th BCG Moreau. This is the first report detailing the serologic recognition profile of individuals re-vaccinated with BCG Moreau against extracellular antigens of the homolo gous strain, and contributes to a better understanding of the Brazilian vaccine strai n against TB.

Nosso estudo tem como objetivo verificar a presença e distribuição das fibras do sistema elástico na mucosa do bulbo duodenal humano normal. Para isso, foram realizadas biópsias endoscópicas do bulbo duodenal de nove homens adultos voluntários, as quais foram histologicamente processadas e coradas seletivamente para as fibras do sistema elástico, e observadas através de microscopia óptica. As técnicas de coloração seletiva utilizadas para fibras do sistema elástico foram: orcinol-neofucsina, para fibras elásticas; resorcina-fucsina de Weigert sem oxidação prévia, para fibras elaunínicas e elásticas; e resorcina-fucsina de Weigert com oxidação prévia, para fibras oxitalánicas, elaunínicas e elásticas. Através destas técnicas, nosso estudo revelou a presença de: a) descontínuas e curtas fibras elásticas localizadas somente na muscular da mucosa, exibindo características que sugerem tratar-se de estruturas fibrosas da parede dos vasos sangüíneos presentes nesta camada; b) fibras elaunínicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa; c) fibras oxitalânicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa. Esta distribuição pode sugerir a participação das fibras oxitalânicas e elaunínicas nas importantes e necessárias funções de suporte mecânico e mobilidade da mucosa bulbar. Estes resultados nos permitiram a realização de um desenho esquemático da distribuição das fibras oxitalânicas, elaunínicas e elásticas na mucosa do bulbo duodenal humano normal. / Our objective by means of this study is checking up on the presence and distribution of the elastic system fibers in the normal human duodenal bulta mucosa. For this purpose, were performed endoscopic biopsies on duodenal bulb of nine voluntary adult men, being such biopsies histologically processed and selective coloring for the fibers of the elastic system, and observed through optical microscopy. The techniques of selective coloration used for elastic system fibers were as follows: orcinol-new fuchsin, to elastic fibers; Weigerfs resorcin-fuchsin without oxidation, to elaunin and elastic fibers; and Weigerfs resorcin-fuchsin with previous oxidation, to oxytalan, elaunin and elastic fibers. Through these techniques, our investigations revealed the presence of: a) short and discontinuous elastic fibers localized only on the muscularis mucosae, exhibiting characteristics which suggest to be fibrous structures frora the walls of blood vessels present in this stratum; b) elaunin fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn•s and Brunner,s glands, and in the muscularis mucosae; c) oxytalan fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn's and Brunner's glands, and in the muscularis mucosae. This distribution may suggest the participation of the oxytalan and elaunin fibers in the important and necessary functions of mechanical support and mobility of the bulbar mucosa. These results gave us the possibility of realizing a schematic drawing of the distribution of oxytalan, elaunin and elastic fibers on the normal human duodenal bulb mucosa.

Nosso estudo tem como objetivo verificar a presença e distribuição das fibras do sistema elástico na mucosa do bulbo duodenal humano normal. Para isso, foram realizadas biópsias endoscópicas do bulbo duodenal de nove homens adultos voluntários, as quais foram histologicamente processadas e coradas seletivamente para as fibras do sistema elástico, e observadas através de microscopia óptica. As técnicas de coloração seletiva utilizadas para fibras do sistema elástico foram: orcinol-neofucsina, para fibras elásticas; resorcina-fucsina de Weigert sem oxidação prévia, para fibras elaunínicas e elásticas; e resorcina-fucsina de Weigert com oxidação prévia, para fibras oxitalánicas, elaunínicas e elásticas. Através destas técnicas, nosso estudo revelou a presença de: a) descontínuas e curtas fibras elásticas localizadas somente na muscular da mucosa, exibindo características que sugerem tratar-se de estruturas fibrosas da parede dos vasos sangüíneos presentes nesta camada; b) fibras elaunínicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa; c) fibras oxitalânicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa. Esta distribuição pode sugerir a participação das fibras oxitalânicas e elaunínicas nas importantes e necessárias funções de suporte mecânico e mobilidade da mucosa bulbar. Estes resultados nos permitiram a realização de um desenho esquemático da distribuição das fibras oxitalânicas, elaunínicas e elásticas na mucosa do bulbo duodenal humano normal. / Our objective by means of this study is checking up on the presence and distribution of the elastic system fibers in the normal human duodenal bulta mucosa. For this purpose, were performed endoscopic biopsies on duodenal bulb of nine voluntary adult men, being such biopsies histologically processed and selective coloring for the fibers of the elastic system, and observed through optical microscopy. The techniques of selective coloration used for elastic system fibers were as follows: orcinol-new fuchsin, to elastic fibers; Weigerfs resorcin-fuchsin without oxidation, to elaunin and elastic fibers; and Weigerfs resorcin-fuchsin with previous oxidation, to oxytalan, elaunin and elastic fibers. Through these techniques, our investigations revealed the presence of: a) short and discontinuous elastic fibers localized only on the muscularis mucosae, exhibiting characteristics which suggest to be fibrous structures frora the walls of blood vessels present in this stratum; b) elaunin fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn•s and Brunner,s glands, and in the muscularis mucosae; c) oxytalan fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn's and Brunner's glands, and in the muscularis mucosae. This distribution may suggest the participation of the oxytalan and elaunin fibers in the important and necessary functions of mechanical support and mobility of the bulbar mucosa. These results gave us the possibility of realizing a schematic drawing of the distribution of oxytalan, elaunin and elastic fibers on the normal human duodenal bulb mucosa.

Nosso estudo tem como objetivo verificar a presença e distribuição das fibras do sistema elástico na mucosa do bulbo duodenal humano normal. Para isso, foram realizadas biópsias endoscópicas do bulbo duodenal de nove homens adultos voluntários, as quais foram histologicamente processadas e coradas seletivamente para as fibras do sistema elástico, e observadas através de microscopia óptica. As técnicas de coloração seletiva utilizadas para fibras do sistema elástico foram: orcinol-neofucsina, para fibras elásticas; resorcina-fucsina de Weigert sem oxidação prévia, para fibras elaunínicas e elásticas; e resorcina-fucsina de Weigert com oxidação prévia, para fibras oxitalánicas, elaunínicas e elásticas. Através destas técnicas, nosso estudo revelou a presença de: a) descontínuas e curtas fibras elásticas localizadas somente na muscular da mucosa, exibindo características que sugerem tratar-se de estruturas fibrosas da parede dos vasos sangüíneos presentes nesta camada; b) fibras elaunínicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa; c) fibras oxitalânicas dispostas em uma linha subepitelial ao nível das vilosidades, ao redor das glândulas de Lieberkühn e de Brunner, e na muscular da mucosa. Esta distribuição pode sugerir a participação das fibras oxitalânicas e elaunínicas nas importantes e necessárias funções de suporte mecânico e mobilidade da mucosa bulbar. Estes resultados nos permitiram a realização de um desenho esquemático da distribuição das fibras oxitalânicas, elaunínicas e elásticas na mucosa do bulbo duodenal humano normal. / Our objective by means of this study is checking up on the presence and distribution of the elastic system fibers in the normal human duodenal bulta mucosa. For this purpose, were performed endoscopic biopsies on duodenal bulb of nine voluntary adult men, being such biopsies histologically processed and selective coloring for the fibers of the elastic system, and observed through optical microscopy. The techniques of selective coloration used for elastic system fibers were as follows: orcinol-new fuchsin, to elastic fibers; Weigerfs resorcin-fuchsin without oxidation, to elaunin and elastic fibers; and Weigerfs resorcin-fuchsin with previous oxidation, to oxytalan, elaunin and elastic fibers. Through these techniques, our investigations revealed the presence of: a) short and discontinuous elastic fibers localized only on the muscularis mucosae, exhibiting characteristics which suggest to be fibrous structures frora the walls of blood vessels present in this stratum; b) elaunin fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn•s and Brunner,s glands, and in the muscularis mucosae; c) oxytalan fibers disposed in a subepitelial line at the levei of the villosities, around Lieberkühn's and Brunner's glands, and in the muscularis mucosae. This distribution may suggest the participation of the oxytalan and elaunin fibers in the important and necessary functions of mechanical support and mobility of the bulbar mucosa. These results gave us the possibility of realizing a schematic drawing of the distribution of oxytalan, elaunin and elastic fibers on the normal human duodenal bulb mucosa.

O presente estudo teve como objetivo caracterizar a expressão da família SIBLING (Small Integrin-Binding Ligand, N-linked Glycoproteins) após tratamento regenerativo de furca com enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários. Para isto, os 2os e 3os pré-molares superiores foram extraídos em quatro cães s.r.d. Cinco dias após as extrações, defeitos padronizados de furca classe II foram criados nos 2os, 3os e 4os pré-molares inferiores, bilateralmente. Estes defeitos foram tratados imediatamente com raspagem, alisamento e polimento corono-radicular (RAPCR) e retalho deslocado coronariamente (RDC) (Grupo Controle) ou com RAPCR + RDC + enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários (Grupo Teste) em um experimento de boca-dividida. Após um período de 6 semanas de reparação, os animais foram sacrificados e foi realizada análise imuno-histoquímica para avaliar a localização dos membros da família de proteínas SIBLING, composta pelas seguintes proteínas nãocolágenas da matriz extracelular: osteopontina (OPN), sialoproteína óssea (BSP), proteína da matriz dentinária 1 (DMP1), sialofosfoproteína da dentina (DSPP) e fosfoglicoproteína da matriz extracelular (MEPE). Não foram encontradas diferenças na expressão da família SIBLING entre os grupos teste e controle. Todas as proteínas foram expressas no novo osso, novo cemento e novo ligamento periodontal, em ambos os grupos. Os osteoclastos demonstraram imunolocalização intracelular intensa somente para a OPN. Cementócitos e o novo ligamento periodontal demonstraram, particularmente, marcação intensa para a MEPE. Houve uma diferença evidente entre o padrão de marcação entre o lado tratado (vestibular) e o não-tratado (lingual) de todos os espécimes, com presença de maior marcação do lado vestibular, para todos os anticorpos testados. Podemos concluir que não houve diferenças no padrão de expressão da família SIBLING após o uso do enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários. A família de proteínas SIBLING é expressa durante o processo de reparação de defeitos de furca, indicando possíveis papéis e funções para as proteínas OPN, BSP, DMP1, DSP e MEPE como moléculas alvo em terapias de regeneração periodontal. / The present study aimed in characterizing the expression of the SIBLING (Small Integrin- Binding Ligand, N-linked Glycoproteins) family in a regenerative treatment of furcation defects with a reparative tissue graft obtained from extraction sockets. The second and third upper premolars were extracted in four mixed breed dogs. Five days later, standardized class II furcation defects were created in the second, third and fourth mandibular premolars, bilaterally. The defects were immediately treated with either debridement and root planning (DRP) combined with a coronally positioned flap (CPF) (Control Group), or with DRP+CPF + a reparative tissue graft derived from the second and third premolar extraction sockets (Experimental Group) in a split-mouth design. After 6 weeks period of healing, the animals were sacrificed and immunohistochemistry was carried out to assess the localization of members of the SIBLING family of noncollagenous extracellular matrix proteins, namely osteopontin (OPN), bone sialoprotein (BSP), dentin matrix protein 1 (DMP1), dentin sialophosphoprotein (DSPP) and matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE). No differences in the SIBLING family of proteins expression were noted between the control and experimental group. All proteins were expressed in new bone, new cementum and new periodontal ligament in both groups. Osteoclasts exhibited intense intracellular localization only for OPN. Cementocytes and the newly formed periodontal ligament demonstrated particularly intense staining for MEPE. There was an evident difference between the staining pattern between the treated (buccal side) and non-treated (lingual) side of the specimens, with a more intense staining pattern in the buccal side, for all the tested antibodies. In conclusion, there were no differences in the pattern of SIBLING expression following the use of a reparative tissue graft obtained from extraction sockets. The SIBLING family of proteins is expressed during the healing process of furcation defects indicating possible roles and functions of OPN, BSP, DMP1, DSPP and MEPE as target molecules in periodontal regeneration therapies.

O presente estudo teve como objetivo caracterizar a expressão da família SIBLING (Small Integrin-Binding Ligand, N-linked Glycoproteins) após tratamento regenerativo de furca com enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários. Para isto, os 2os e 3os pré-molares superiores foram extraídos em quatro cães s.r.d. Cinco dias após as extrações, defeitos padronizados de furca classe II foram criados nos 2os, 3os e 4os pré-molares inferiores, bilateralmente. Estes defeitos foram tratados imediatamente com raspagem, alisamento e polimento corono-radicular (RAPCR) e retalho deslocado coronariamente (RDC) (Grupo Controle) ou com RAPCR + RDC + enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários (Grupo Teste) em um experimento de boca-dividida. Após um período de 6 semanas de reparação, os animais foram sacrificados e foi realizada análise imuno-histoquímica para avaliar a localização dos membros da família de proteínas SIBLING, composta pelas seguintes proteínas nãocolágenas da matriz extracelular: osteopontina (OPN), sialoproteína óssea (BSP), proteína da matriz dentinária 1 (DMP1), sialofosfoproteína da dentina (DSPP) e fosfoglicoproteína da matriz extracelular (MEPE). Não foram encontradas diferenças na expressão da família SIBLING entre os grupos teste e controle. Todas as proteínas foram expressas no novo osso, novo cemento e novo ligamento periodontal, em ambos os grupos. Os osteoclastos demonstraram imunolocalização intracelular intensa somente para a OPN. Cementócitos e o novo ligamento periodontal demonstraram, particularmente, marcação intensa para a MEPE. Houve uma diferença evidente entre o padrão de marcação entre o lado tratado (vestibular) e o não-tratado (lingual) de todos os espécimes, com presença de maior marcação do lado vestibular, para todos os anticorpos testados. Podemos concluir que não houve diferenças no padrão de expressão da família SIBLING após o uso do enxerto de tecido reparativo de alvéolos dentários. A família de proteínas SIBLING é expressa durante o processo de reparação de defeitos de furca, indicando possíveis papéis e funções para as proteínas OPN, BSP, DMP1, DSP e MEPE como moléculas alvo em terapias de regeneração periodontal. / The present study aimed in characterizing the expression of the SIBLING (Small Integrin- Binding Ligand, N-linked Glycoproteins) family in a regenerative treatment of furcation defects with a reparative tissue graft obtained from extraction sockets. The second and third upper premolars were extracted in four mixed breed dogs. Five days later, standardized class II furcation defects were created in the second, third and fourth mandibular premolars, bilaterally. The defects were immediately treated with either debridement and root planning (DRP) combined with a coronally positioned flap (CPF) (Control Group), or with DRP+CPF + a reparative tissue graft derived from the second and third premolar extraction sockets (Experimental Group) in a split-mouth design. After 6 weeks period of healing, the animals were sacrificed and immunohistochemistry was carried out to assess the localization of members of the SIBLING family of noncollagenous extracellular matrix proteins, namely osteopontin (OPN), bone sialoprotein (BSP), dentin matrix protein 1 (DMP1), dentin sialophosphoprotein (DSPP) and matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE). No differences in the SIBLING family of proteins expression were noted between the control and experimental group. All proteins were expressed in new bone, new cementum and new periodontal ligament in both groups. Osteoclasts exhibited intense intracellular localization only for OPN. Cementocytes and the newly formed periodontal ligament demonstrated particularly intense staining for MEPE. There was an evident difference between the staining pattern between the treated (buccal side) and non-treated (lingual) side of the specimens, with a more intense staining pattern in the buccal side, for all the tested antibodies. In conclusion, there were no differences in the pattern of SIBLING expression following the use of a reparative tissue graft obtained from extraction sockets. The SIBLING family of proteins is expressed during the healing process of furcation defects indicating possible roles and functions of OPN, BSP, DMP1, DSPP and MEPE as target molecules in periodontal regeneration therapies.

Introdução: O remodelamento da matriz extracelular no líquen escleroso (LS) caracteriza-se histologicamente por uma faixa hialinizada situada predominantemente na derme superficial, semelhante ao que ocorre na lipoidoproteinose (LPE), uma genodermatose rara, na qual ocorre deficiência na produção da proteína 1 da matriz extracelular (ECM-1). Recentemente, em casos de LS foram descobertos auto-anticorpos contra a ECM-1 e um novo caminho foi proposto para desvendar a sua etiopatologia. O LS também é freqüentemente comparado com a Esclerodermia, visto que alguns autores consideram que são espectros de uma mesma doença. Na Esclerodermia e na LPE há aumento do colágeno tipo V (COL V), mas pouco se sabe sobre este tipo de colágeno no LS. Assim, o objetivo do presente trabalho foi demonstrar a localização e a quantidade de COL V e ECM-1 nas vulvas de pacientes com LS. Materiais e métodos: foram estudadas 21 biópsias de pacientes com LS vulvar e 21 biópsias de vulvas normais. A morfometria foi realizada nas imagens geradas através da imunofluorescência marcada com anticorpos contra os colágenos I (COL I), III (COL III) e V, e também nas de imunoistoquímica para ECM-1. Ademais, utilizou-se microscopia confocal a laser para visualizar o COL V e a ECM-1 na mesma lâmina. Resultados: Peles do grupo controle mostraram fraca e homogênea distribuição das fibras de COL I, III e V na imunofluorescência. Em contraste, peles com LS exibiram desarranjo da arquitetura da derme superficial e difuso aumento da fluorescência das fibras de COL I, III e V na faixa hialina. A fração de área das fibras de COL I, III, e V foram significativamente maiores nas peles de pacientes com LS em relação ao controle (p<0,05). Peles controles mostraram co-localização da ECM-1 e do COL V na parede de pequenos vasos e ao longo da membrana basal. Entretanto, no LS houve perda de expressão da ECM-1 na parede dos vasos sanguíneos (p<0,001) e difuso aumento da fluorescência verde do COL V (p<0,001). Conclusão: Houve inversa relação entre o COL V e a proteína ECe constatado pela histomorfometria, imunofluorescência, imunoistoquímica e reconstrução tridimensional, sugerindo que estratégias terapêuticas para prevenir o aumento da síntese de COL V e a diminuição da ECM-1 poderão ser promissoras no prognóstico e tratamento do LS / Background: The extracellular matrix remodeling in lichen sclerosus (LS) is characterized in routine light microscopy by a hyalinized band predominantly located in the superficial dermis. The same pattern occurs in the lipoid proteinosis (LPE), a rare genodermatosis, in which the production deficiency of extracellular matrix protein 1 (ECM-1) is responsible for triggering the disease. Recently, in cases of LS, autoantibodies were discovered against ECM-1 and a new way to unravel their aetiopathology was proposed. LS is also frequently compared with Scleroderma, since some authors consider that they are spectra of a similar disease. In Scleroderma and LPE there is an increase of type V collagen (COL V), but little is known about this type of collagen in LS. Thus, the objective of the current study was to demonstrate the location and quantity of COL V and ECM-1 on the vulvas of patients with LS. Materials and methods: Twenty one biopsies from patients with vulvar LS matched with 21 biopsies from normal vulvas were included in this study. Immunofluorescence against type I (COL I), (COL III) and V collagen and immunohistochemistry for ECM-1 was performed and the slides were analysed by morphometry. Furthermore, laser confocal microscopy was used to visualize the COL V fibers and the ECM-1 protein on the same slide. Results: Skins of the control group showed low and homogeneous distribution of fibers COL I, III and V in immunofluorescence. In contrast, skins with LS exhibited disruption of the architecture of the superficial dermis and diffuse increase in fluorescence fibers COL I, III and V in the range hyaline. The area fraction of fibers COL I, III, and V were significantly higher in the skin of patients with LS compared to control (p <0.05). Skins controls showed colocalization of ECM-1 and COL V the wall of small vessels and along the basement membrane. However, the LS had loss of expression of ECM-1 the wall of blood vessels (p <0.001) increase the fluorescence and diffuse green COL V (p <0.001). Conclusion: There was an inverse relationship between COL V and ECM-1 protein in LS as demonstrated by histomorphometry, immunofluorescence, immunohistochemistry and three-dimensional reconstruction, suggesting that therapeutic strategies to prevent the increased synthesis COL V and ECM-1 protein in LS as demonstrated by histomorphometry, immunofluorescence, immunohistochemistry and three-dimensional reconstruction, suggesting that therapeutic strategies to prevent the increased synthesis COL V and decreased ECM-1 may be promising in the prognosis and treatment of the LS

O microrganismo gram-negativo Aggregatibacter actinomycetemcomitans, fortemente associado a quadros de periodontite agressiva, coloniza a cavidade oral, aderindo e invadindo as células epiteliais e participando da formação de biofilme nas superfícies do hospedeiro. A. actinomycetemcomitans expressa Aae, uma proteína de superfície, relacionada com a adesão às células epiteliais. Este estudo avaliou o papel de Aae na adesão a outros substratos tais como proteínas extracelulares colagenosas e não-colagenosas, hidroxiapatita recoberta por saliva (SHA) e na formação de biofilme. Um mutante nulo em aae foi construído e o fenótipo comparado com o da linhagem selvagem (VT1169). O mutante nulo exibiu significativa redução na adesão às células epiteliais e a SHA, na formação de biofilme, além de apresentar-se menos hidrofóbico que a linhagem parental. A capacidade de adesão ao colágeno V e a fibronectina foi fracamente afetada pela interrupção do gene aae. Entretanto, o mutante nulo em aae exibiu uma capacidade diminuída na adesão à laminina e colágenos I, III e IV. Estes dados sugerem que Aae desempenha um importante papel na colonização da cavidade oral, não somente promovendo sua adesão às células epiteliais, mas também a outros substratos. / The gram-negative organism Aggregatibacter actinomycetemcomitans, associated with aggressive periodontitis, colonizes the oral cavity by binding to and invading epithelial cells and by participating in biofilms formed in host surfaces. A. actinomycetemcomitans express Aae, a surface protein, implicated in the adhesion to epithelial cells. This study evaluated the role of Aae in adhesion to other substrates such as collagen and non-collagen extracellular matrix proteins and saliva coated hydroxyapatite (SHA) and in biofilm formation. A null mutant in aae was constructed and its behavior was compared with the wild type strain VT1169. The null mutant exhibited a decreased ability to bind to epithelial cells and to SHA, formed less biofilm and was less hydrophobic than the parental strain. The abilities to bind to collagen V and fibronectin were very poorly affected by aae interruption. However, the null aae mutant exhibited a decreased ability to adhere to laminin, collagen I, III and IV. These data suggest that Aae may play an important role in the colonization of the oral cavity by A. actinomycetemcomitans, not only by promoting its adhesion to epithelial cells, but by mediating adhesion to other substrates.

Introdução: O remodelamento da matriz extracelular no líquen escleroso (LS) caracteriza-se histologicamente por uma faixa hialinizada situada predominantemente na derme superficial, semelhante ao que ocorre na lipoidoproteinose (LPE), uma genodermatose rara, na qual ocorre deficiência na produção da proteína 1 da matriz extracelular (ECM-1). Recentemente, em casos de LS foram descobertos auto-anticorpos contra a ECM-1 e um novo caminho foi proposto para desvendar a sua etiopatologia. O LS também é freqüentemente comparado com a Esclerodermia, visto que alguns autores consideram que são espectros de uma mesma doença. Na Esclerodermia e na LPE há aumento do colágeno tipo V (COL V), mas pouco se sabe sobre este tipo de colágeno no LS. Assim, o objetivo do presente trabalho foi demonstrar a localização e a quantidade de COL V e ECM-1 nas vulvas de pacientes com LS. Materiais e métodos: foram estudadas 21 biópsias de pacientes com LS vulvar e 21 biópsias de vulvas normais. A morfometria foi realizada nas imagens geradas através da imunofluorescência marcada com anticorpos contra os colágenos I (COL I), III (COL III) e V, e também nas de imunoistoquímica para ECM-1. Ademais, utilizou-se microscopia confocal a laser para visualizar o COL V e a ECM-1 na mesma lâmina. Resultados: Peles do grupo controle mostraram fraca e homogênea distribuição das fibras de COL I, III e V na imunofluorescência. Em contraste, peles com LS exibiram desarranjo da arquitetura da derme superficial e difuso aumento da fluorescência das fibras de COL I, III e V na faixa hialina. A fração de área das fibras de COL I, III, e V foram significativamente maiores nas peles de pacientes com LS em relação ao controle (p<0,05). Peles controles mostraram co-localização da ECM-1 e do COL V na parede de pequenos vasos e ao longo da membrana basal. Entretanto, no LS houve perda de expressão da ECM-1 na parede dos vasos sanguíneos (p<0,001) e difuso aumento da fluorescência verde do COL V (p<0,001). Conclusão: Houve inversa relação entre o COL V e a proteína ECe constatado pela histomorfometria, imunofluorescência, imunoistoquímica e reconstrução tridimensional, sugerindo que estratégias terapêuticas para prevenir o aumento da síntese de COL V e a diminuição da ECM-1 poderão ser promissoras no prognóstico e tratamento do LS / Background: The extracellular matrix remodeling in lichen sclerosus (LS) is characterized in routine light microscopy by a hyalinized band predominantly located in the superficial dermis. The same pattern occurs in the lipoid proteinosis (LPE), a rare genodermatosis, in which the production deficiency of extracellular matrix protein 1 (ECM-1) is responsible for triggering the disease. Recently, in cases of LS, autoantibodies were discovered against ECM-1 and a new way to unravel their aetiopathology was proposed. LS is also frequently compared with Scleroderma, since some authors consider that they are spectra of a similar disease. In Scleroderma and LPE there is an increase of type V collagen (COL V), but little is known about this type of collagen in LS. Thus, the objective of the current study was to demonstrate the location and quantity of COL V and ECM-1 on the vulvas of patients with LS. Materials and methods: Twenty one biopsies from patients with vulvar LS matched with 21 biopsies from normal vulvas were included in this study. Immunofluorescence against type I (COL I), (COL III) and V collagen and immunohistochemistry for ECM-1 was performed and the slides were analysed by morphometry. Furthermore, laser confocal microscopy was used to visualize the COL V fibers and the ECM-1 protein on the same slide. Results: Skins of the control group showed low and homogeneous distribution of fibers COL I, III and V in immunofluorescence. In contrast, skins with LS exhibited disruption of the architecture of the superficial dermis and diffuse increase in fluorescence fibers COL I, III and V in the range hyaline. The area fraction of fibers COL I, III, and V were significantly higher in the skin of patients with LS compared to control (p <0.05). Skins controls showed colocalization of ECM-1 and COL V the wall of small vessels and along the basement membrane. However, the LS had loss of expression of ECM-1 the wall of blood vessels (p <0.001) increase the fluorescence and diffuse green COL V (p <0.001). Conclusion: There was an inverse relationship between COL V and ECM-1 protein in LS as demonstrated by histomorphometry, immunofluorescence, immunohistochemistry and three-dimensional reconstruction, suggesting that therapeutic strategies to prevent the increased synthesis COL V and ECM-1 protein in LS as demonstrated by histomorphometry, immunofluorescence, immunohistochemistry and three-dimensional reconstruction, suggesting that therapeutic strategies to prevent the increased synthesis COL V and decreased ECM-1 may be promising in the prognosis and treatment of the LS

O microrganismo gram-negativo Aggregatibacter actinomycetemcomitans, fortemente associado a quadros de periodontite agressiva, coloniza a cavidade oral, aderindo e invadindo as células epiteliais e participando da formação de biofilme nas superfícies do hospedeiro. A. actinomycetemcomitans expressa Aae, uma proteína de superfície, relacionada com a adesão às células epiteliais. Este estudo avaliou o papel de Aae na adesão a outros substratos tais como proteínas extracelulares colagenosas e não-colagenosas, hidroxiapatita recoberta por saliva (SHA) e na formação de biofilme. Um mutante nulo em aae foi construído e o fenótipo comparado com o da linhagem selvagem (VT1169). O mutante nulo exibiu significativa redução na adesão às células epiteliais e a SHA, na formação de biofilme, além de apresentar-se menos hidrofóbico que a linhagem parental. A capacidade de adesão ao colágeno V e a fibronectina foi fracamente afetada pela interrupção do gene aae. Entretanto, o mutante nulo em aae exibiu uma capacidade diminuída na adesão à laminina e colágenos I, III e IV. Estes dados sugerem que Aae desempenha um importante papel na colonização da cavidade oral, não somente promovendo sua adesão às células epiteliais, mas também a outros substratos. / The gram-negative organism Aggregatibacter actinomycetemcomitans, associated with aggressive periodontitis, colonizes the oral cavity by binding to and invading epithelial cells and by participating in biofilms formed in host surfaces. A. actinomycetemcomitans express Aae, a surface protein, implicated in the adhesion to epithelial cells. This study evaluated the role of Aae in adhesion to other substrates such as collagen and non-collagen extracellular matrix proteins and saliva coated hydroxyapatite (SHA) and in biofilm formation. A null mutant in aae was constructed and its behavior was compared with the wild type strain VT1169. The null mutant exhibited a decreased ability to bind to epithelial cells and to SHA, formed less biofilm and was less hydrophobic than the parental strain. The abilities to bind to collagen V and fibronectin were very poorly affected by aae interruption. However, the null aae mutant exhibited a decreased ability to adhere to laminin, collagen I, III and IV. These data suggest that Aae may play an important role in the colonization of the oral cavity by A. actinomycetemcomitans, not only by promoting its adhesion to epithelial cells, but by mediating adhesion to other substrates.