Klorat som avfallsprodukt från pappersindustrin har lett till miljöproblem på grund av klorats toxiska verkan på växter och alger, och har även lett till bekymmer för människohälsan där klorat avfallet har kommit i kontakt med dricksvatten. För att åtgärda detta så har mycket forskning gjorts på bakterier med förmågan att reducera klorat till syrgas och kloridjoner, en anaerob process som vissa naturligt förekommande bakterier kan utföra. Med ökad kunskap om regleringen av denna kloratreducerande process, kan dessa bakterier utgöra en effektiv reningsprocess av pappersbrukens avloppsvatten. Ideonella dechloratans är en sådan bakterie, den har ett genkluster som kodar för de kloratreducerande enzymerna. Nedströms för dessa finns en arsR-sekvens som tros att koda för en transkriptionsfaktor; och ytterligare information om denna transkriptionsfaktor kan möjligen bidra till förståelse av genuttrycket hos den kloratreducerande funktionen. Syftet med detta arbete är att transformera expressionsceller med förmågan att uttrycka arsR, så framtida försök kan göras för att identifiera potentiella bindningssäten för ArsR-proteinet. arsR-sekvensen amplifierades med primrar specifika för ändarna hos arsR, sekvensen ligerades i en pET-21a(+) vektor från Novagen och transformerades med BL21 (DE3) expressionsceller. Med en IPTG inducering kunde ett stort uttryck av olösligt ArsR observeras. Komplikationer med resultatet och framtida tillvägagångsätt diskuteras. / Chlorate as a waste product from the paper industry has caused environmental problems due its toxic effect on plants and algae and is also a concern for human health where chlorate has contaminated the tap water supplies. To address this issue, a great deal of research has been carried out on naturally occurring bacteria that can anaerobically reduce chlorate to oxygen and chloride ions. With additional knowledge of how this chlorate-reducing process is regulated, these bacteria may one day provide an effective purification process of wastewater from paper mills. Ideonella dechloratans is such a bacterium that has a gene cluster which encodes the chlorate-reducing enzymes. Downstream of this cluster is an arsR-sequence believed to encode a transcription factor, which could aid in the understanding of the gene expression for the chlorate-reducing operon. The goal of this research is to transform expression cells with the ability to express the arsR-sequence so that future trials can be made to identify any potential binding sites for the ArsR-protein. The arsR-sequence was amplified with primers specific to the ends of the arsR-sequence. The sequence was then ligated into a pET-21a(+) vector from Novagen and transformed with BL21 (DE3) expression cells. By IPTG inducing these transformants it was possible to observe a significant expression of insoluble ArsR. Complications with the outcome and future approaches are discussed.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kau-65364 |
| Date | January 2017 |
| Creators | Mikladal, Bartal |
| Publisher | Karlstads universitet, Fakulteten för hälsa, natur- och teknikvetenskap (from 2013) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | Swedish |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0599 seconds