Lungcancer är en heterogen sjukdom som kräver många histopatologiska analyser för att diagnostisera och behandla effektivt. Dessa analyser utförs för närvarande med singelplex immunohistokemi (IHC) vilket kräver mycket vävnadsprovmaterial om flera markörer behöver färgas för. I den här studien testades två tillvägagångssätt för multiplex immunfluorescens (IF) (indirekt sekventiell IF och multiplex tyramide signal amplification med spektral avblandning) för att se om en panel av 7 markörer, som rutinmässigt används kliniskt, kunde färgas i ett enda experiment på samma vävnadsprov. För att göra detta användes COMET- och LabSat-instrumenten från Lunaphore och de utvärderades utifrån kvalité och användarvänlighet. På COMETen kunde alla sju markörer inkluderas i panelen medan tillvägagångssättet med TSA på LabSat var begränsat till sex markörer på grund av protokollet för spektral separation. Panelen optimerades på COMET och sedan gjordes multiplexa färgningar med båda instrumenten. Färgningarna från LabSat avbildades med mikroskopet på PhenoImager Fusion-instrumentet. Alla färgningar på COMET var av god kvalité medan LabSat hade behövt vidare optimering för att prestera på samma nivå. COMETen fanns också vara det mer användarvänliga instrumentet pga det integrerade mikroskopet och mindre behov av användarintervention. Denna studie visade att det är möjligt att översätta singelplexa IHC-analyser till multiplex IF med vissa optimeringar och byte av några antikroppskloner. / Lung cancer is a heterogeneous group of malignancies that requires many histopathological analyses to diagnose and treat efficiently. These analyses are currently performed with singleplex immunohistochemistry (IHC) which needs a lot of tissue sample material if multiple markers have to be stained for. In this study, two different multiplexed immunofluorescence (IF) approaches (indirect sequential IF and multiplexed tyramide signal amplification with spectral unmixing) were tested to see if a panel of 7 markers routinely used in clinic to could be stained in a single experiment on the same tissue sample. To do this, the COMET and LabSat instruments from Lunaphore were used and evaluated in regards to quality and ease of use. With the COMET all seven markers could be included in the panel while the TSA approach on LabSat was limited to six markers due to the spectral unmixing protocol. The panel was optimized on COMET and then multiplexed stainings were performed on both instruments. The LabSat staining was imaged on the PhenoImager Fusion microscope. All the stainings were of good quality on the COMET while the LabSat would have needed further optimization to perform at the same level. The COMET was also found to be the more user-friendly instrument due to its integrated microscope and lesser need for user intervention. This study showed that it is possible to translate singleplex IHC analyses into multiplexed IF with some optimizations and change of a few antibody clones.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-321572 |
| Date | January 2022 |
| Creators | Åstrand, Katarina |
| Publisher | KTH, Proteinvetenskap |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | Swedish |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | TRITA-CBH-GRU ; 2022:307 |
Page generated in 0.0025 seconds