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Previous issue date: 2011-12-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Escherichia coli has been one of the most widely used hosts in recombinant protein production, in both laboratory and industrial scale since the advent of recombinant DNA technology. Despite the substantial progress of studies on the molecular biology and immunology of infections, there is currently no medication-based prophylaxis capable of preventing leishmaniasis. As such, there is a great need to identify specific antigens for the development of vaccines and diagnostic kits against visceral leishmaniasis. Thus, the primary goal of the present study is to assess the influence of cultivation conditions on the production of Leishmania chagasi antigens, carried out in a rotating incubator and bioreactor. To that end, several assays were conducted to evaluate the kinetic behavior of antigens (648, 503) of Leishmania. i. chagasi in two different compositions of media (2xTY, TB), with and without an inducer. In order to improve expression, assays were performed in a benchtop bioreactor using the best conditions obtained in a rotating incubator, in addition to assessing the influence of stirring speed. Results show that high complexity of the cultivation medium favored kinetic growth of clones (648, 503). However, in assays submitted to induction by IPTG, this elevated complexity did not promote the expression of recombinant proteins. Expression of antigens 648 and 503 exhibited behavior associated with growth and, in terms of location, proteins 648 and 503 are intracellularly stored. Lactose may be the most adequate inducer in protein expression, when considering factors, cost, toxicity and stability. Elevated stirring may increase cell growth in clone 53, although it may not result in high concentrations for the protein of interest. On the other hand, positive results were obtained for all recombinant clones (648, 503) tested, confirmed by the electrophoretic profile / A Escherichia coli ? um dos hospedeiros mais utilizados para produ??o de prote?nas recombinantes tanto em escala de laborat?rio como em escala industrial desde o advento da tecnologia do DNA recombinante. Apesar do avan?o expressivo dos estudos da biologia molecular e da imunologia das infec??es, n?o existe, atualmente, nenhuma droga profil?tica capaz de prevenir o calazar. Desta forma, existe uma grande necessidade de identifica??o de ant?genos espec?ficos para o desenvolvimento de vacinas e kits para diagn?sticos contra a Leishmaniose visceral. Com base no exposto, o presente trabalho tem como foco principal avaliar a influ?ncia das condi??es de cultivo na produ??o dos ant?genos de Leishmania i. chagasi em cultivos realizados em incubador rotativo e biorreator. Para atingir o objetivo proposto, v?rios ensaios foram realizados a fim de se avaliar o comportamento cin?tico dos clones (648, 503) de Leishmania i. chagasi em duas diferentes composi??es de meio (2xTY, TB), com e sem adi??o de indutor em incubador rotativo. Para melhorar a express?o, ensaios foram conduzidos em biorreator de bancada com as melhores condi??es obtidas em incubador rotativo, al?m da avalia??o da influ?ncia da velocidade de agita??o. Com base nos resultados obtidos, pode-se observar que a elevada complexidade do meio de cultivo favoreceu a cin?tica de crescimento dos clones (648, 503), no entanto, ao se tratar dos ensaios submetidos ao procedimento de indu??o por IPTG, a elevada complexidade do meio de cultivo n?o favoreceu a express?o das prote?nas recombinantes. Pode-se observar que a express?o dos ant?genos 648 e 503 apresentam um comportamento associado ao crescimento e que em termos de localiza??o, as prote?nas 648 e 503, s?o armazenadas intracelularmente. A lactose pode ser o indutor mais adequado na express?o das prote?nas tendo em vista os fatores, custo, toxicidade e estabilidade. A elevada agita??o pode aumentar o crescimento celular do clone 503, entretanto, pode n?o acarretar em altas concentra??es da prote?na de interesse. Por outro lado, foram obtidos resultados positivos para todos os clones recombinantes (648, 503) testados, confirmada atrav?s do perfil eletrofor?tico
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/15912 |
| Date | 29 December 2011 |
| Creators | Vaz, Michelle Rossana Ferreira |
| Contributors | CPF:10847022404, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788057U7, Porto, Ana L?cia Figueiredo, CPF:25514776468, http://lattes.cnpq.br/4989617783837981, Santos, Everaldo Silvino dos, CPF:87510383404, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799564Y2, Rocha, Maria Valderez Ponte, CPF:64669335391, http://lattes.cnpq.br/0639546287060338, Salha, Daniella Regina Arantes Martins, Macedo, Gorete Ribeiro de |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Programa de P?s-Gradua??o em Engenharia Qu?mica, UFRN, BR, Pesquisa e Desenvolvimento de Tecnologias Regionais |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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