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Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Grandes avanços no desenvolvimento de metodologias laboratoriais para a investigação de vírus respiratórios tem ocorrido nos últimos anos. No primeiro experimento, mostramos que as técnicas de RT-PCR, "shell vial" e isolamento viral em cultura de células obtiveram limites de detecção de Influenza A e B comparáveis, mas todos os testes rápidos comerciais avaliados tiveram baixo desempenho. Em segundo experimento, foram comparadas diferentes técnicas para a detecção de vírus respiratórios em 412 amostras de lavado nasal coletados de adultos com infecção respiratória aguda (2001-¬2003). As técnicas de RT-PCR e imunofluorescência direta (IFD) foram comparadas com 0 isolamento de Influenza A e B em cultura de células. A concordância geral entre os três ensaios foi de 96 por cento, sendo a sensibilidade obtida para a RT-PCR de 92,3 por cento e a especificidade de 98,5 por cento e para a IFD os valores de 93,6 por cento e 97,2 por cento, respectivamente. Para a detecção de Adenovírus foram comparados os testes de PCR, nested-PCR e IFD, sendo obtida positividade (4,1 por cento) somente na nested-PCR. Amostras negativas nos ensaios anteriores foram submetidas a detecção de Metapneumovirus humano por imunofluorescência indireta (IFI) em comparação com a RT-PCR e demonstrou sensibilidade de 45 por cento. Os ensaios de IFD e RT-PCR demonstraram boa ap1icação na rotina diagnóstica de Influenza, mas os testes rápidos devem ser aplicados com cautela. Para a detecção de Adenovírus e Metapneumovirus humano os ensaios de imunofluorescência obtiveram baixos desempenhos, devendo ser aplicado as metodologias moleculares para esse vírus / Laboratory tests performance for respiratory viruses has shown
substantial increase in the past years. A first step experiment for comparison of
influenza virus limit of detection resulted in similar values for RT-PCR, shell vial
and cell cultures methods, but worse values for all commercial rapid antigen
detections kits evaluated with same control strains. In a second step, 412 nasal
washes from adults presenting with acute respiratory symptoms (2001-2003)
were submitted to comparative studies for respiratory viruses detection. A
duplex RT-PCR and direct immunofluorescence (DFA) assays were compared
to Influenza A and B virus isolation (reference method) in MDCK cells. The
overall concordance between the three assays was 96%. RT-PCR reached
92.3% sensitivity and 98.5% specificity and for DFA the corresponding values
were 93.6% and 97.2%, respectively. A PCR, nested-PCR, and DFA assays
were evaluated for detection of Adenovirus and positivity (4.1%) were only
obtained on Nested-PCR. Selected negative samples were evaluated for
human Metapneumovirus by indirect fluorescence assay (IFA) in comparison
with RT-PCR and sensitivity was 45%. DFA and RT-PCR could be applied in
different routine sets for influenza diagnosis and rapid antigen detection kits
may be used with caution. For Adenovirus and Metapneumovirus fluorescence
assays detection were disappointed and molecular tests are recommended for
these viruses. / FAPESP: 01/125796 / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/23561 |
| Date | January 2007 |
| Creators | Carraro, Emerson [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Bellei, Nancy Cristina Junqueira [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 100 f. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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