Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The interferon is a cytokine with antiviral, antiproliferative, and immunomodulatory
properties. It is a protein synthesized by cells in response to viral infection, producing successive
biochemistry alterations. The chromatographic methods for evaluation of recombinant interferon-alfa
2a (rhIFN-α2a) in pharmaceutical products were validated in the present work. The reversed-phase
liquid chromatography method (RP-LC) was developed and validated using a Jupiter C4 column (250
mm x 4.6 mm), maintained at ambient temperature (25°C). The mobile phase A consisted of 0.1%
trifluoroacetic acid (TFA) and mobile phase B consisted of 0.1% TFA in acetonitrile, run in gradient:
0.01 1 min, 38% of B; 1 5 min, 38 43% of B; 5.01 20 min, 43 45% of B; 20.01 30 min, 45
48% of B; 30.01 40 min linear back to 38% of B and 40 42 min, 38% of B. The flow rate used
was 1 mL/min with detection at 214 nm. The chromatographic separation was obtained within 42 min
and it was linear in the concentration range of 0.5 50 MIU/mL (r2=0.9999). The size exclusion
method was developed and validated using a BioSep-SEC-S 2000 (300 mm x 7.8 mm), maintained at
ambient temperature (25°C). The mobile phase consisted of 1mM potassium phosphate monobasic,
8mM sodium phosphate dibasic and 200mM sodium chloride buffer, pH 7.4, run at a gradient flow
rate: 0.01 20 min, 0.5 mL/min; 20 25 min, 0.5 1.7 mL/min; 25 35 min, 1.7 mL/min; 35 38
min, 1.7 0.5 mL/min; 38 40 min, 0.5 mL/min. The method was linear in the concentration range of
0.5 - 50 MIU/mL (r2=0.9996). The procedures were validated by the parameters of specificity,
linearity, precision, accuracy, robustness, limit of quantitation and limit of detection. The methods
were applied for the evaluation of the rhIFN-α2a in pharmaceutical products, contributing for the
establishment of alternatives which improve the quality control, assuring the safety and therapeutic
efficacy of the biological product. / O interferon é uma citocina que possui ação antiviral, imunomoduladora e antiproliferativa. É uma proteína sintetizada pelas células em resposta a infecção viral, gerando sucessivas alterações bioquímicas. No presente trabalho foram validados métodos cromatográficos para a avaliação de interferon-alfa 2a (rhIFN-α2a) em produtos farmacêuticos. O método por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) foi desenvolvido e validado empregando coluna Júpiter C4 (250 mm x 4,6 mm),
mantida a temperatura ambiente (25°C). A fase móvel A foi composta de ácido trifluoracético 0,1% e a fase móvel B de ácido trifluoracético 0,1% em acetonitrila, eluídas no gradiente: 0,01 1 min, 38% de B; 1 5 min, 38 43% de B; 5,01 20 min, 43 45% de B; 20,01 30 min, 45 48% de B; 30,01
40 min, 48 38% de B, mantendo-se nesta proporção até 42 min. Utilizou-se vazão de 1 mL/min e
detecção no ultravioleta a 214 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 42 min, sendo
linear na faixa de concentração de 0,5 - 50 MUI/mL (r2=0,9999). Paralelamente, desenvolveu-se e
validou-se método cromatográfico por exclusão molecular (CL-EM) empregando coluna BioSep-SECS
2000 (300 mm x 7,8 mm), mantida a temperatura ambiente (25°C). A fase móvel foi composta de
tampão fosfato de potássio monobásico 1mM, fosfato de sódio dibásico 8mM e cloreto de sódio
200mM, pH 7,4, eluída no gradiente de fluxo: 0,01 20 min, 0,5 mL/min; 20 25 min, 0,5 1,7
mL/min; 25 35 min, 1,7 mL/min; 35 38 min, 1,7 0,5 mL/min; 38 40 min, 0,5 mL/min. O
método foi linear na faixa de concentração de 0,5 - 50 MUI/mL (r2=0,9996). Ambos os procedimentos
foram validados com base nos parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez,
limite de quantificação e detecção. Os métodos foram aplicados para avaliação de rhIFN-α2a em
produtos farmacêuticos, contribuindo para o estabelecimento de alternativas que aprimoram o controle
da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica do produto biológico.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/5904 |
| Date | 17 March 2009 |
| Creators | Silva, Lucélia Magalhães da |
| Contributors | Dalmora, Sergio Luiz, Bartolini, Paolo, Ribela, Maria Teresa de Carvalho Pinto |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, UFSM, BR, Farmacologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 201000000000, 400, 500, 300, 300, 300, c5c3d2e7-af0f-4f36-b006-046daf37340a, f07b02a2-5c4c-4edb-943e-62eca0566096, 536b7362-a8b4-4af0-857c-db23a544c792, 60583f58-0d34-42cd-a325-daf15e117a52 |
Page generated in 0.0142 seconds