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Dissertação_Med_Viviane Magalhães.pdf: 3760330 bytes, checksum: 352f3d7caf0d3827d385de4db6afdba1 (MD5) / NIH - National Institute of Health (Grant P50AI30639-16 e R03AI067663-02);
TMRC- Tropical Medicine Research Centers / National Institute of Health;
CAPES- Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. / Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal causa da leishmaniose
tegumentar americana (LTA) no Brasil. L. (V.) braziliensis causa três formas de
leishmaniose na Bahia: cutânea localizada (LC), leishmaniose mucosa (LM) e
leishmaniose disseminada (LD). Como passo inicial para a melhor
compreensão dos eventos parasita-hospedeiro que podem ajudar a determinar
o desfecho da infecção, avaliamos o padrão de expressão gênica global em
macrófagos derivados de monócitos (MDM) de voluntários saudáveis
infectados com parasitas isolados das três formas clinicas de LTA. Uma
multiplicidade de infecção de 2 parasitas por MDM foi usada na análise de
microarranjo de DNA proveniente dos MDM no ponto de 4h de infecção. Nesse
ponto de tempo, aproximadamente 80% dos MDM em cultura foram infectados,
com uma média de cinco parasitas por célula hospedeira. Mais de 500 genes
do hospedeiro, pertencentes a diferentes grupos funcionais, apresentou
mudanças significativas em seu comportamento, onde a grande maioria se
mostrou reprimido nos MDM infectados. Para validar os achados gerais e
estender as análises a pontos de tempo posteriores, realizamos uma avaliação
cinética (30 min, 4, 24 e 48 horas pós-infecção), utilizando duas cepas do
parasita. Avaliou-se a expressão por PCR em tempo real de 21 transcritos,
representando as diversas classes de genes afetados no estudo inicial. Os
níveis de infecção dos MDM permaneceram estáveis ao longo da avaliação
cinética. Aproximadamente 80% dos MDM foram infectados nas culturas, no
entanto, o número de parasitas por MDM aumentou constantemente desde
cerca de 5 no ponto de tempo de 4 horas a cerca de 20 parasitas por célula.
Em relação a expressão gênica, a 4h os níveis dos 21 transcritos avaliados na
validação foram semelhantes aos do estudo original. Ao comparar os pontos de
4h contra 24h, oito do total de genes afetados (IL-10RB, MyD88H, PARK7,
TRERF1, UBC, NDUFA11, NUP214, NUP62) mostraram uma mudança
significativa nos seus níveis de expressão. Na avaliação cinética estendida até
48h pós-infecção encontrou mudanças significativas em algum ponto em oito
dos 21 genes. Entre estes, seis genes são semelhantes aos pontos de
comparação entre 4 e 24 horas (IL-10RB, MyD88H, PARK7, UBC, NDUFA11,
NUP214), enquanto dois mostraram alterações significativas após o ponto 24h
(MT1M foi induzida e NUB1 foi reprimida) correspondendo a funções
importantes relacionadas com a resposta celular a alterações ambientais. Nos
ensaios de transwell houve uma supressão dos genes nas duas condições, 2:1
e 10:1, demonstrando que a passagem de partículas solúveis na membrana da
câmara implicou na interação das moléculas das células resultando em
modificações na sua expressão gênica. No seu conjunto, os dados indicam
que, durante a interação inicial entre L. (V.) braziliensis e o macrófago
hospedeiro há uma supressão geral dos principais processos na célula, o que
pode ser importante para o parasita estabelecer a infecção. No entanto a
compreensão precisa da relação hospedeiro-parasita requer uma avaliação
completa, incluindo vários pontos de tempo ao longo do processo infeccioso. / Salvador
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:192.168.11:11:ri/13380 |
| Date | 20 February 2013 |
| Creators | Andrade, Viviane Magalhães |
| Contributors | Schriefer, Nicolaus Albert Borges |
| Publisher | Faculdade de Medicina da Bahia, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, UFBA, brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFBA, instname:Universidade Federal da Bahia, instacron:UFBA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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