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Previous issue date: 2013-07-26 / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is a disease caused by protozoa Leishmania. In Brazil, the most
prevalent species is L. (Viannia) braziliensis. Several cytokines and receptors are involved in immunopathogenesis of
ATL, however, the role of interleukin 32 (IL-32) was not investigated in this disease. Besides, toll-like receptors
(TLR) were poorly evaluated in Leishmania infection, especially when it is caused by L. (V.) braziliensis. The aim of
the present study was to evaluate IL-32, TNF and IL-10 expression in ATL lesions; the induction of IL-32 by L. (V.)
braziliensis amastigotes in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) cultures as well as the involvement of
TLR4 in monocyte/macrophage response to L. (V.) brazilienis amastigotes. Biopsies fragments from cutaneous and
mucosal lesion and healthy tissues were used to investigate the subgenus of the parasites by PCR-RFLP assay;
expression of IL-32, TNF and IL-10 was assayed by immunohistochemistry and expression of IL-32 isoforms
, TNF and IL-10 was analysed by qRT-PCR. The PBMC were cultured with L. (V.) braziliensis amastigotes
in the absence or presence of IFN and IL-32 induction was assayed by qRT-PCR; and TNF and IL-10, by ELISA.
TLR4 was neutralized by monoclonal antibodies and lipopolysaccharide (LPS) was used as TLR4 agonist. The
expression of TLR4 in monocyte/macrophages was evaluated by flow cytometry. Thirty five patients were evaluated,
23 with cutaneous leishmaniasis (CL) and 12 with mucosal leihsmaniasis (ML). All parasite positive samples
contained L. (Viannia) sp. The expression of IL-32 (protein and mRNA) was similar in CL and ML lesions but was
higher than in health tissues. Only IL-32 was detected. The proteins TNF and IL-10 were detected in similar levels in
CL and ML lesions, but TNF mRNA was present in higher levels in ML (4.069x) than in CL lesions (141 x, p < 0.05).
L. (V.) braziliensis amastigotes induced IL-32, TNF and IL-10 in IFN pre-treated PBMC. The production of TNF
and IL-10 was TLR4 dependent and treatment of PBMC with LPS further increased the production of TNF induced by
amastigotes (p < 0.05). However, LPS did not altere the IL-10 production. Treatment with IFN enhanced the
percentage of TLR4+ monocyte/macrophage (p < 0.05), which was decreased following incubation with amastigotes (p
= 0.06). The results showed that IL-32 is produced during L. (Viannia) infection and TLR4 mediates L. (V.)
braziliensis amastigote-induced TNF and IL-10 production in human PBMC. Moreover, the data suggest that
amastigotes can lead to TLR4 internalization what can allow parasite to evade of innate immune response. This study
indicates that IL-32 and TLR4 are important players in human infection caused by L. (Viannia), especially L. (V.)
braziliensis. Whether TLR4 is also important to IL-32 production by human monocytes/macrophages deserves further
investigation. / A leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária, causada, no Brasil, principalmente
pela espécie Leishmania (Viannia) braziliensis. Na imunopatogenia da LTA participam várias citocinas e receptores.
A interleucina 32 (IL-32) é uma citocina pro-inflamatória, cuja participação na LTA ainda não foi investigada. O papel
dos receptores similares a Toll (TLR) na LTA tem sido pouco investigado, especialmente considerando infecção por L.
(V.) braziliensis. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da IL-32, do TNF e da IL-10 nas lesões de pacientes
com LTA, a indução de IL-32 por formas amastigotas de L. (V.) braziliensis em células mononucleares (CMN)
humanas, bem como avaliar a participação do TLR4 na infecção de monócitos/macrófagos humanos com formas
amastigotas de L. (V.) brazilienis. Fragmentos de lesões cutâneas ou mucosas de pacientes com LTA e tecidos sadios
foram obtidos, sendo usados para a determinação do subgênero de Leishmania, usando a PCR-RFLP; para análise de
IL-32, TNF e IL-10 por imunoistoquímica; e para análise da expressão das isoformas da IL-32, do TNF e da
IL-10, por qRT-PCR. As CMN foram cultivadas com amastigotas de L. (V.) braziliensis, na ausência ou presença de
IFN e a indução de IL-32 foi avaliada por qRT-PCR e TNF e IL-10, por ELISA. Para neutralização de TLR4 foram
usados anticorpos monoclonais e lipopolissacarídeo (LPS), como agonista de TLR4. A expressão de TLR4 nos
monócitos/macrófagos presentes nas CMN foi avaliada por citometria de fluxo. Foram analisados 35 pacientes sendo
23 leishmaniose cutânea (LC) e 12 com leishmaniose mucosa (LM). Todas as amostras PCR positivas continham
parasitos pertencentes ao subgênero Viannia. Nas lesões de pacientes com LC e LM foi detectada uma maior
expressão tanto da proteína quanto do mRNA da IL-32 do que nos tecidos controles, porém níveis similares foram
encontrados nas duas formas clínicas. Somente a isoforma IL-32 foi detectada. As proteínas TNF e a IL-10 foram
detectadas nas lesões, em níveis similares na LC e na LM, porém, o mRNA do TNF estava em níveis mais elevados
nas lesões de LM (4.069 vezes) do que nas lesões de LC (141 vezes, p < 0,05). As formas amastigotas de L. (V.)
braziliensis indiziram a produção de IL-32 TNF e de IL-10 nas CMN pré-tratadas com IFN. A produção de TNF e
IL-10 foi dependente de TLR4 e o tratamento das CMN com LPS aumentou a produção do TNF induzido pelas
amastigotas (p < 0,05), mas não alterou a produção da IL-10. A incubação com IFN aumentou significantemente a
porcentagem de monócitos/macrófagos TLR4+ (p < 0,05), a qual foi diminuída pelas formas amastigotas (p = 0,06). Os
resultados mostram que a IL-32 é produzida durante a infecção humana causada por L. (Viannia) e evidenciam a
participação de TLR4 na indução de TNF e IL-10 em CMN humanas por formas amastigotas de L. (V.) braziliensis.
Ainda, os dados sugerem que as formas amastigotas causam a internalização dos TLR4, o que pode ser um mecanismo
de evasão da resposta imune. Portanto, a IL-32 e o TLR4 parecem importantes componentes na infecção humana
causada por L. (Viannia), especialmente L. (V.) braziliensis, podendo contribuir para a imunopatogenia ou para o
controle da infecção.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/5958 |
| Date | 26 July 2013 |
| Creators | Galdino Júnior, Hélio |
| Contributors | Dias, Fátima Ribeiro, Dias, Fátima Ribeiro, Junqueira, Maria Imaculada Muniz Barboza, Shio, Marina Tiemi, Marques, Mara Rubia, Lino Júnior, Ruy de Souza |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6085308344741430434, 600, 600, 600, -7769011444564556288, 5989919188376747614 |
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