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Previous issue date: 2004 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Em eucariotos, a iniciação da tradução é um processo essencial de regulação pós-transcricional
da expressão gênica. Neste processo, atuam proteínas designadas eIFs (fatores de iniciação da
tradução). Destas destaca-se o complexo eIF4F eIF4E, eIF4A e eIF4G que permite associar o
mRNA ao ribossomo. Identificamos no genoma de Leishmania major seqüências que
apresentam homologia aos componentes do eIF4F. Este trabalho contempla a caracterização de
um homólogo do eIF4A (LmeIF4A2) e três homólogos eIF4G (LmeIF4G1-3). O gene
LmeIF4A2 foi clonado, expresso e utilizado na produção de anticorpos. Ensaios de Western-blot
sugeriram não haver expressão do LmeIF4A2 na fase promastigota de Leishmania major. Em
seguida realizamos construções com os LmeIF4G1-3, fusionando-os a GST, permitindo a
realização de ensaios de pull down visando investigar sua associação com as proteínas
LmeIF4A1-2. O LmeIF4A2 não interage com nenhum dos LmeIF4G1-3 e o LmeIF4A1 interage
especificamente com o LmeIF4G3. Em outra etapa produzimos anticorpos contra as proteínas
LmeIF4G1-3 para avaliar sua expressão na forma promastigota do parasita. A expressão do
LmeIF4G3 foi confirmada, todavia não detectamos a expressão dos LmeIF4G1-2. A interação
eIF4G/eIF4E foi investigada em ensaios onde homólogos LmeIF4G1-3 foram incubados a
homólogos LmeIF4E1-3, para tentar reconstituir parcialmente o complexo eIF4F in vitro, e
testados quanto a sua afinidade pelo cap sintético. Estes resultados se mostraram inconclusivos.
A utilização de novas abordagens e a caracterização dos demais fatores será importante na
elucidação da tradução nestes protozoários
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/6700 |
| Date | January 2004 |
| Creators | Robson de Souza Reis, Christian |
| Contributors | Pompílio de Melo Neto, Osvaldo |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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