O câncer é a segunda causa de morte no mundo sendo a quimioterapia parte fundamental no tratamento, constituindo-se muitas vezes na única opção de cura para os pacientes. Entretanto, progressão de doença e morte ainda são problemas resultantes de resistência intrínseca e adquirida às drogas. Com o intuito de melhorar a resposta aos tratamentos e a sobrevida dos indivíduos, sistemas de avaliação de resposta a drogas vêm sendo testados para determinar a potencial atividade das drogas antes da sua administração aos pacientes. O ChemoBiogram é o primeiro kit para avaliação de quimiorresistencia in vitro, buscando solucionar problemas de manipulação de quimioterápicos e degradação e extravio de amostras. Desta forma, o objetivo geral deste trabalho é avaliar a quimiorresistência em leucemias agudas, utilizando como ferramenta o kit. Para isso foi avaliada a integridade e ação biológica das drogas sobre células leucêmicas utilizando linhagens celulares de LLA e LMA, assim como em cultivos primários a partir de amostras de medula óssea. Os padrões dos fármacos de interesse foram padronizados por HPLC e tiveram seu IC50 determinado utilizando as linhagens HL60 e Jurkat. As drogas foram liofilizadas em diferentes doses na placa de 96 poços. A estabilidade do kit foi analisada ao longo dos meses, atingindo até seis meses de integridade para todas as drogas. Para a avaliação da ação biológica as linhagens HL60 e Jurkat foram cultivadas em meio RPMI 1640 e mantidas em condições padrões. A viabilidade celular foi avaliada pelo método de azul de Tripan, citometria de fluxo e agentes colorimétricos, sendo o cortante CellTiter 96 o mais eficiente para aplicação no modelo proposto. Os resultados demonstram confiabilidade quanto à estabilidade e reprodutibilidade dos efeitos citotóxicos das drogas testadas. A aplicação do teste in vitro em culturas primárias apresentaram importante correlação clínica quanto à resposta aos tratamentos administrados. / Cancer is the second death cause in the world. Despite chemotherapy is an essencial part of the treatment as well as in many times the only option of cure for the patients, disease progression and death are still resultants problems from the intrinsinc and acquired drug resistance. In order to improve the response to treatments and individuals survival, several studies have evaluated different response systems to the drugs to determine the potential drug activity before their administration to the patients. In an attempt to solve manipulation problems of chemotherapeutics and degradation of samples, we developed ChemoBiogram that is the first in vitro chemoresistance assay for evaluation in a kit format. Thus, the general aim of this work is to validate the test for chemoresistance evaluation in acute leukemias, by confirming the integrity and biological action of the drugs on cell lines of ALL and AML, as well as in primary cultures from bone marrow samples. The drugs standards of interest were standardized by HPLC and the IC50 was determined using HL60 and Jurkat cell lines. After standardization and determination of the doses the drugs were lyophilized in two different concentrations in the 96-well plate. The stability of the kit was analyzed over the months, reaching even nine month of integrity for all drugs. To assess biological action, the HL60 and Jurkat cell lines were cultured in RPMI 1640 and keep under standard conditions. The cell viability was evaluated by the trypan blue exclusion method, flow cytometry and colorimetric agent with the CellTiter 96 as an efficient standard for kit application. The results demonstrated reliability regarding stability and reproducibility of the cytotoxic effects of tested drugs. The application of the ChemoBiogram kit in primary cultures presented an important clinical correlation regarding the response of administered treatments.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:lume.ufrgs.br:10183/173176 |
| Date | January 2017 |
| Creators | Silva, Camila Alves da |
| Contributors | Roesler, Rafael |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Sul, instacron:UFRGS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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