Orientador: Márcia Regina Brochetto Braga / Banca: Patricia Ucelli Simioni / Banca: Patricia Pasquali Parise Maltempi / Resumo: A vespa social Polybia paulista é muito agressiva e abundante nos Estados de São Paulo e Sul de Minas Gerais e, responsável por muitos acidentes de importância médica. Os principais alérgenos (Fosfolipase, Hialuronidase e Antígeno 5) de seu veneno já foram caracterizados por estudos proteômicos porém, os estudos em nível molecular estão em andamento pelo nosso grupo. O Antígeno 5 (Ag 5) (~23 kDa) tem sido relatado, em alguns venenos de vespas, como um dos mais abundantes e importantes alérgenos, com elevada prevalência de ligação a IgE (em Vespula vulgaris e em Polistes versicolor) enquanto que em outros, como uma molécula hipoalergênica (em Polybia scutellaris). No Brasil, ainda não existem extratos alergênicos ou componentes padronizados para o tratamento e diagnóstico de alergia ao veneno de Hymenoptera. Neste trabalho, o Ag 5 de P. paulista foi clonado, sequenciado, expresso utilizando a levedura Pichia pastoris X-33, purificado e analisado mediante a imunodetecção por IgE. Os maiores níveis de expressão da proteína recombinante rPoly p 5 foram obtidos em meio BMMY, a 28ºC após 120 horas de indução com metanol. O alérgeno recombinante (rPoly p 5), obtido no meio extracelular, foi purificado por cromatografia de afinidade em resina de Ni+2 e posteriormente por exclusão molecular em coluna de Sephadex-G 100 acoplada a um sistema AKTA-FPLC, com um rendimento de 158 μg/mL. Em paralelo, o Ag 5 nativo (nPoly p 5) foi extraído de glândulas de veneno de P. paulista e purificado a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The social wasp Polybia paulista is very aggressive and abundant in the states of São Paulo and South of Minas Gerais, responsible for many accidents of medical importance. The major allergens (Phospholipase, Hyaluronidase and Antigen 5) of its venom have already been characterized by proteomic studies. However, studies at the molecular level are in progress by our group. Antigen 5 (Ag 5) (~ 23 kDa) has been reported in some wasp venoms as one of the most abundant and important allergens with a high prevalence of IgE binding (in Vespula vulgaris and in Polistes versicolor), while in others as a hypoallergenic molecule (in Polybia scutellaris). In Brazil, there are no standardized allergenic extracts or components for treatment and diagnosis of allergy to Hymenoptera venoms. In this work, Ag 5 from P. paulista was cloned, sequenced, expressed using the Pichia pastoris X-33 yeast, purified and analyzed by immunodetection by IgE. The highest levels of expression of the rPoly p 5 recombinant protein were obtained in BMMY medium at 28 ° C after 120 hours of methanol induction. The recombinant allergen (rPoly p 5) obtained in the extracellular medium was purified by Ni+2 resin affinity chromatography and subsequently by column exclusion of Sephadex-G 100 coupled to an AKTA-FPLC system with an yield of 158 μg/mL. In parallel, the native Ag 5 (nPoly p 5) from P. paulista venom glands was purified by cation exchange chromatography. Western Blotting analysis was used to evaluate the Ig... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UNESP/oai:www.athena.biblioteca.unesp.br:UEP01-000882254 |
| Date | January 2017 |
| Creators | Bazon, Murilo Luiz. |
| Contributors | Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Instituto de Biociências (Campus de Rio Claro). |
| Publisher | Rio Claro, |
| Source Sets | Universidade Estadual Paulista |
| Language | Portuguese, Portuguese, Texto em português; resumos em português e inglês |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | text |
| Format | 82 f. : |
| Relation | Sistema requerido: Adobe Acrobat Reader |
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