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Tese Guilherme Ferreira Silveira.pdf: 9523097 bytes, checksum: 1944bdd5853c5e3e3e1fe8bda7c59f5b (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas, Fiocruz-PR. Curitiba, PR, Brasil. / A dengue representa na atualidade a mais prevalente arbovirose, caracterizando-se como
um grave problema de saúde pública, tanto no Brasil como em todo o mundo. No entanto, o
paciente que desenvolve a febre da dengue e/ou dengue com complicações recebe apenas
tratamento de suporte, uma vez que não existem medicamentos ou vacinas específicas
contra o vírus. Adicionalmente, pouco se sabe sobre os mecanismos imunopatológicos que
desencadeiam os sintomas graves. Um dos aspectos que parece ser chave na patogenia é
a resposta funcional dos linfócitos ao vírus da dengue (DV). Embora, a susceptibilidade
destas células à infecção pelo DV ainda não fora bem caracterizada. Deste modo, os alvos
principais deste trabalho foram à determinação da susceptibilidade e a caracterização da
resposta funcional de linfócitos humanos de doadores saudáveis, analisadas na infecção por
cepas dos quatro sorotipos do DV. Foi demonstrado que três diferentes populações de
linfócitos (LT CD4+, LT CD8+ e LB CD19+) são susceptíveis ao DV, especialmente o LT
CD8+, sendo o heparam sulfato um receptor de entrada para a infecção destas células pelo
DV. Esta infecção foi produtiva, com replicação ativa e liberação de partículas virais viáveis
no sobrenadante das culturas, além da produção da proteína não-estrutural 1 (NS1).
Contudo, foram observados apenas níveis discretos de ativação celular e produção de
citocinas. Adicionalmente, não foram observadas respostas funcionais como: apoptose de
linfócitos, degranulação de LT CD8+, infecção diferencial de LT CD8+ “naïve” ou LT CD8+ de
memória, resposta de polarização Th1/Th17 de LT CD4+ ou produção de IgM anti-DENV por
LB CD19+. Ademais, a infecção dos linfócitos não foi capaz de reduzir a proliferação celular
observada em ensaios de Ensaio Misto de Leucócitos e Ensaio de “Prime” de Linfócitos,
sendo observada uma discreta elevação na proliferação quando as células foram infectadas
com o DV4 360. Do mesmo modo, as infecções de culturas de células mononucleares do
sangue periférico (PBMC) pelas cepas DV3 98 e DV4 360 foram capazes de induzir uma
polarização de perfil Th2. Portanto, estes achados demonstram que, apesar das infecções
produtivas, os linfócitos são pouco responsivos aos DV, sendo que importantes funções
destas células não foram reguladas pela infecção. Desta forma, é possível sugerir que os
linfócitos seriam uma fonte importante para a manutenção da viremia observada nos casos
de dengue. / Dengue fever is the most prevalent arboviral disease, characterized as a serious public
health problem, both in Brazil and worldwide. The patient who develops dengue fever, which
could culminate in severe complications, receives only live-support therapy, since there are
no specific drugs or vaccines against the virus. Furthermore, little is known about the
immunopathogenic mechanisms that trigger the severe symptoms in dengue. One aspect
that seems to be key in the pathogenesis is the functional response of lymphocytes to the
dengue (DV) infection. The susceptibility of these cells to DV infection is not well
characterized. Therefore, the main targets of this study were the determination of ex vivo
susceptibility by DV infection and the characterization of functional response of human
lymphocytes. Cells from healthy donors were analyzed against four DV serotypes. It has
been shown that three populations of lymphocytes (LT CD4+, LT CD8+ and LB CD19+) are
susceptible to DV, especially LT CD8+, infection by DV which occurs through the participation
of heparan sulfate as the receptor. Infection was productive, with active replication and
release of viable viral particles and NS1 protein in the culture supernatants. Only discrete
levels of cellular activation and cytokine production were observed. In addition, lymphocyte
apoptosis, LT CD8+ degranulation, differential infection of naïve or memory LT CD8+, LT
CD4+ polarization (Th1/Th17) or production of IgM anti-DENV by LB CD19+ were not
modulated. Furthermore, the infection of the lymphocytes was not able to reduce cell
proliferation induced in Mixed Leukocyte Reaction and Lymphocytes Prime Assay, showing a
slight increase in proliferation when the cells were infected with DV4 360. PBMC infection
with DV3 98 and DV4 360 strains was able to induce a Th2 polarized response. These
findings suggest that, despite the productive infection, lymphocytes are poor responders to
DV, and important functions of these cells were not modulated by DV infection. However, it is
possible that lymphocytes would be an important source for maintenance of viremia
observed in dengue fever.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/8990 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Silveira, Guilherme Ferreira |
| Contributors | Santos, Claudia Nunes Duarte dos, Stimamiglio, Marco Augusto, Boscardin, Silvia Beatriz, Nunes, Anderson de Sá, Bordignon, Juliano |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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