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Previous issue date: 2017-02-14 / CAPES / CNPq / FACEPE / Moléculas com propriedades biológicas são extraídas de diversos organismos, a exemplo de plantas, como a Crataeva tapia, que pertence à família Caparidaceae, e da qual foi purificada uma lectina denominada CrataBL, com diversas propriedades, entre elas, antitumoral e anti-inflamatória. Mas apesar de suas propriedades promissoras, a aplicação dessa lectina encontra problemas como a degradação por fluidos biológicos e a rápida eliminação da corrente sanguínea. No propósito de obter uma nova formulação para superar esses problemas e de obter dados preliminares sobre a toxicidade da formulação e da lectina, a mesma foi encapsulada em lipossomas e foram avaliadas a toxicidade do nanossistema e da CrataBL frente a eritrócitos, além da avaliação da toxicidade da lectina em diferentes ensaios biológicos. A lectina foi purificada por cromatografia clássica de troca catiônica e os lipossomas preparados pelo método de congelamento/descongelamento. Os lipossomas exibiram tamanho médio de partícula de 168 ± 0,56 nm com uma distribuição de tamanho estreita e monodispersa (PDI = 0,407) e potencial zeta de 31,55 ± 0,77. A eficiência de encapsulação foi de 73 ± 5,72 %. No ensaio hemolítico a lectina, a fração e o extrato apresentaram os seguintes graus de hemólise (0,55; 0,68; 0,72 e 0,88 %), (1,38; 1,47; 1,67 e 1,87 %), (1,02; 1,08; 1,12 e 1,15 %), para as seguintes concentrações (50; 300; 600 e 1000 μg / mL). A lectina encapsulada apresentou (0,34; 0,91; 0,93; 1,25 e 5,37 %), para (62,5; 125; 250; 500 e 1000 μg / mL). A lectina apresentou atividade citotóxica e genotóxica significativa apenas em 1000 μg / mL, porém muito baixa em relação ao controle positivo, e não apresentou atividade mutagênica nas concentrações testadas. No ensaio embriotoxida a lectina apresentou mortalidade de 94% dos embriões, apenas em 500 μg / mL. No cercaricida, a lectina em 300 e 400 μg / mL, apresentou 100% das cercárias vivas e móveis, e em 500 μg / mL, menos de 50% das cercárias mortas, a fração e extrato apresentaram em 300 e 400 μg / mL, toxicidade média: 50-90 % de cercárias mortas, e 500 μg / mL, 90 % ou mais das cercárias mortas. Portanto, a CrataBL foi encapsulada com alta eficiência e tamanho de partícula de 168 nm, ideal para atividade antitumoral. A formulação lipossomal não apresentou atividade hemolítica, assim como a lectina livre, que também não apresentou ação mutagênica. Sendo esses dados importantes para futuras aplicações antitumorais in vivo. No ensaio com embriões e cercárias, a lectina apresentou toxicidade para os diferentes organismos apenas em 500 μg / mL. / Molecules with biological properties are extracted from some organisms, an example of plants, such as a Crataeva tapia, which belongs to the family Caparidaceae, and the quality of a recipe called CrataBL, with several properties, including antitumor and anti-inflammatory. But despite its promising properties, the application of this lectin encounters problems such as degradation by biological fluids and rapid elimination of the bloodstream. The purpose of obtaining a novel formulation to overcome the problems and to obtain preliminary data on the toxicity of the formulation and the lectin, a fiction encapsulated in liposomes and evaluated forces, a nanosystem and CrataBL toxicity to erythrocytes, besides the evaluation of lectin toxicity in different biological assays. The lectin was completed by classical cation exchange chromatography and the liposomes prepared by the freeze / thaw method. Liposomes exhibited a 168 ± 0.56 nm portion average size with a narrow and monodispersed size distribution (PDI = 0.407) and zeta potential of 31.55 ± 0.77. An encapsulation efficiency of 73 ± 5.72%. (0.55, 0.68, 0.72 and 0.88%), (1.38, 1.47, 1.67 and 1.16, 1.67, 1.67, 1.67, 1, 87%), (1.02, 1.08, 1.12 and 1.15%) for the following concentrations (50, 300, 600 and 1000 μg / ml). An encapsulated lectin presented (0.34, 0.91, 0.93, 1.25 and 5.37%), to (62.5, 125, 250, 500 and 1000 μg / mL). The lectin presented significant cytotoxic and genotoxic activity only at 1000 μg / mL, but very low in relation to the positive control, and did not present the mutagenic activity at the tested concentrations. In the embryotoxid assay the lectin presented mortality of 94% of the embryos, only in 500 μg / mL. Without cercaricide, a lectin at 300 and 400 μg / mL presented 100% of the live and mobile cercariae at 500 μg / mL, less than 50% of the dead cercariae, a fraction and extract showed at 300 and 400 μg / mL, toxicity mean: 50-90% of dead cercariae, and 500 μg / mL, 90% or more of the cercariae deaths. Thus, a CrataBL was encapsulated with high efficiency and part size of 168 nm, ideal for antitumor activity. A liposomal formulation showed no hemolytic activity, as well as a free lectin, and also did not present mutagenic action. These data are important for future in vivo antitumor applications. In the test with embryos and cercariae, one lectin showed toxicity to the different organisms only in 500 μg / mL.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/27702 |
| Date | 14 February 2017 |
| Creators | CINTRA, Alcides Jairon Lacerda |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/1063790618901917, MAGALHÃES, Nereide Stela Santos, CORREIA, Maria Tereza dos Santos |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
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