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Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Introdução e objetivos: A insuficiência hepática aguda (IHA), apesar de rara, permanece
como uma condição rapidamente progressiva e frequentemente fatal. A intoxicação por
acetaminofen (APAP) induz necrose hepática maciça e frequentemente leva à morte por
edema cerebral. Terapias celulares são de grande interesse como potenciais tratamentos para
IHA. Neste projeto foi avaliado o potencial terapêutico das células mononucleares da medula
óssea (CMMO) em um modelo experimental de IHA induzida por APAP em camundongos.
Métodos: A IHA foi induzida em camundongos C57Bl/6, previamente submetidos à dieta
alcoólica por três semanas, através da administração de APAP na dose de 300 mg/kg por via
intraperitoneal. Após a indução da IHA, os camundongos foram transplantados, por via
endovenosa, com 107 CMMO obtidas de doadores transgênicos para a proteína verde
fluorescente (GFP) ou injetados com salina. As curvas de sobrevivência, os níveis plasmáticos
de aminotransferases, amônia, uréia e creatinina, a extensão da necrose hepática, o infiltrado
inflamatório e a expressão de citocinas e metaloproteinases foram avaliados. A microscopia
confocal foi utilizada para estudar a migração das células transplantadas para o fígado. A
permeabilidade da barreira hemato-encefálica foi avaliada pela injeção do corante azul de
Evans (AE) por via endovenosa. Resultados: Observou-se que os camundongos tratados com
CMMO apresentaram uma redução significativa da mortalidade, com uma taxa de 60% de
sobrevivência quando comparados a 20% de sobrevivência do grupo controle. As células
transplantadas migraram para o fígado, mas não foi observada a diferenciação destas em
células hepáticas ou fusão celular. Não foram encontradas diferenças estatisticamente
significativas na extensão de necrose hepática no fígado, nos níveis plasmáticos de
transaminases e amônia, na intensidade do infiltrado inflamatório no fígado entre os dois
grupos com IHA, bem como nos níveis hepáticos das citocinas TNF-a e IL-10 e de transcritos
para adrenomedula e endotelina 1 no cérebro, assim como na atividade da metaloproteinase 9
no soro. No entanto, observou-se uma redução dos níveis séricos de TNF-a no grupo tratado
com CMMO quando comparado ao grupo injetado com salina. Esta redução está
correlacionada ao aumento do mRNA para IL-10 na medula óssea e no baço dos animais
tratados com CMMO. A avaliação do extravasamento do corante azul de Evans para o cérebro
demonstrou que o grupo tratado com células mononucleares da medula óssea apresentou uma
redução da permeabilidade da barreira hemato-encefálica quando comparado ao grupo
injetado com salina. Conclusão: As CMMO exercem um efeito protetor em camundongos
com IHA induzida por APAP, sem alterar o dano hepático, provavelmente através da
modulação da resposta inflamatória sistêmica e da diminuição da permeabilidade da barreira
hemato-encefálica. / Introduction and objectives: Acute liver failure (IHA), although rare, remains a rapidly
progressive and often fatal condition. Poisoning by acetaminophen (APAP) induces a massive
hepatic necrosis and often leads to death by cerebral edema. Cell therapies are of great interest
as potential treatments for IHA. In this project we evaluated the therapeutic potential of bone
marrow mononuclear cells (BMC) in an experimental model of IHA induced by APAP in
mice. Methods: The IHA was induced in C57BL/6 mice previously submitted to the alcohol
diet for three weeks by the administration of APAP at a dose of 300 mg / kg, intraperitoneally.
After induction of IHA, the mice were transplanted intravenously with 107 BMC obtained
from donors transgenic for green fluorescent protein (GFP) or injected with saline. The
survival curves, plasma levels of aminotransferases, ammonia, urea and creatinine, the extent
of hepatic necrosis, inflammatory infiltrate and the expression of cytokines and
metalloproteinases were evaluated. Confocal microscopy was used to study the migration of
transplanted cells to the liver. The permeability of the blood-brain barrier was assessed by
injection of Evans blue dye (AE) intravenously. Results: We found that mice treated with
BMC showed a significant reduction in mortality, with a rate of 60% survival compared to
20% survival in the control group. The transplanted cells migrated to the liver, but we did not
observe the differentiation of these cells or fusion with liver cells. There were no statistically
significant differences in the extent of hepatic necrosis in the liver, plasma levels of
transaminases and ammonia, and in the intensity of the inflammatory infiltrate in the liver
between the two groups with IHA, as well as in hepatic levels of TNF-α and IL-10, transcripts
for endothelin 1 and adrenomedullin in the brain and serum metalloproteinase 9 activity.
However, there was a reduction of serum TNF-α in BMC-treated group compared to the
group injected with saline. This decrease correlated with the increase in IL-10 mRNA
expression in the bone marrow and spleen of BMC-treated mice. The assessment of Evans
blue extravasation into the brain showed that the group treated with BMC had a reduced
permeability of the blood-brain barrier compared to the group injected with saline.
Conclusion: Bone marrow mononuclear cells exert a protective effect in mice with APAPinduced
IHA, without changing the liver injury, probably through modulation of systemic
inflammatory response and decrease the permeability of the blood-brain barrier.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/7642 |
| Date | January 2012 |
| Creators | Souza, Bruno Solano de Freitas |
| Contributors | Soares, Milena Botelho Pereira, Lyra, André Castro, Santos, Washington Luis Conrado dos, Villarreal, Cristiane Flora, Santos, Ricardo Ribeiro dos |
| Publisher | Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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