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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Nos últimos anos, as farmacopéias e principais agências regulatórias para
produtos farmacêuticos e biofarmacêuticos exigem cada vez mais em suas monografias
a aplicação do método para detecção de endotoxinas bacterianas pelo lisado de
amebócitos de Limulus(LAL) no controle de pirogênio de produtos terminados
parenterais. O objetivo do presente estudo foi padronizar e validar o ensaio de LAL para o biofármaco alfainterferona 2b humana recombinante, produzido em E. coli. Foram
empregados os métodos Gel-Clot e Cinético-Cromogênico (semiquantitativo e
quantitativo, respectivamente). Para o método Cinético-Cromogênico, a máxima diluição válida (MDV) foi calculada para cada apresentação com base na concentração do produto e a sensibilidade do teste (3 MUI, MDV: 1:3.888 e 10 MUI, MVD: 1:12.962).
Diluições seriadas abaixo da MDV foram avaliadas emtriplicata para a verificação dos interferentes, sendo eleitas as diluições de 1:80 e1:100 que exibiram a melhor recuperação no controle positivo do produto. Para oensaio Gel-Clot na apresentação de 3 MUI (MDV: 1:17) foi estipulada a diluição de 1:8para a validação dos testes de rotina.
Durante a validação dos ensaios, foi utilizada uma curva-padrão de endotoxina nas concentrações de 0,005 – 50 EU/ml e avaliados o seucoeficiente de correlação (R) e o desvio-padrão relativo. Os critérios de desempenho do método cinético (linearidade,
especificidade, exatidão, repetibilidade, reprodutibilidade) foram atendidos de acordo
com os parâmetros farmacopéicos e regulatórios (ANVISA e FDA), garantindo desta forma a robustez necessária para que o método de LAL possa ser incluído nos ensaios
de rotina do Laboratório de Controle de Qualidade. / In recent years, the Pharmacopean, technical reports and international guides for
pharmaceuticals products requires each time more intheir monographies the application
of Limulus Ambocytes Lysateendotoxins assay (LAL) for release and pyrogen control in
parenteral finished products. The objective of thisstudy was the standardization and
validation of the LAL test for the human recombinant biopharmaceutical interferon alpha 2b, produced in E. coli, were used Gel-Clot and Chromogenics Kinetic methods (semi-quantitative and quantitative). In the case of Chromogenics method test, the maximum valid dilution (MDV) was calculated for each presentation based on the concentration of product (3 MUI, MDV: 1:3,888 and 10 MUI, MVD: 1:12,962), serial dilutions under the MDV (1:80) were evaluated in triplicate to detect interferences. For the gel-clot test for the
3 MUI presentation (MDV: 1:17) 1:8 dilution was setfor interferences detection test. For
tests’ validation, several dilutions were performedusing standard endotoxin
concentrations in 0,005 to 50 EU / ml to confirm the criteria for the methods performance (linearity, specificity, accuracy, reply, reproducibility). The results of validation showed
that all pharmacopeia and regulatory parameters (ANVISA) studied, are compatible with the MDV used for each studied presentation of the human recombinant
biopharmaceuticals interferon alpha 2b and may be used in quality control.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5891 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Brum, Ricardo Cristiano de Souza |
| Contributors | Senna, José Procópio Moreno, Ávila, Akie Kawakami, Miranda, Ana Luisa, Lemes, Elezer Monte Blanco |
| Publisher | Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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