Introdução: O Hormônio Concentrador de Melanina (MCH) apresenta a maior expressão de seu RNA mensageiro (RNAm) no período final da lactação (19º dia) em áreas inusitadas no sistema nervoso central (SNC) de roedor, como a área pré-óptica medial (MPOA). Após esse período não encontramos mais o RNAm e a proteína na MPOA, e há descrições de flutuações no nível sérico do MCH, o que sugere uma possível função do MCH no período final da lactação. Foi descrita a presença de MCH em diversos órgãos como: pulmão, tiróide, baço, trato gastrintestinal e em destaque no SNC que é responsável pela expressão de 98% do peptídeo. Foram descritos dois receptores: MCHR1 e MCHR2. No entanto, não há descrição da presença do MCHR1 em tecido mamário, embora evidências sustentem uma possível relação do MCH e o período de lactação. Objetivos: 1) investigar a presença do MCHR1 em tecido mamário de ratas lactantes e ratas em diestro; 2) seqüenciar o receptor encontrado em tecido mamário para compará-lo com o receptor expresso no SNC e, 3) estabelecer o tipo celular reativo ao MCHR1 em tecido mamário de ratas lactantes e ratas em diestro. Material e Métodos: tecido mamário e do SNC de ratas Long-Evans lactantes e não-lactantes foram submetidos às técnicas de hibridização in situ, RT-PCR e RT-qPCR (com tecidos controles periféricos). Cortes do SNC de ratas Long-Evans (19º dia de lactação) foram submetidos à técnica RNAscope. Sequenciamento gênico foi realizado em amostras de tecidos mamários e hipocampo de rata lactante. Tecidos mamários de ratas lactantes foram submetidos às técnicas de imuno-histoquímica (fosfatase alcalina e imunofluorescência indireta) e western blot. Resultados: 1) pela técnica de hibridização in situ pudemos descrever a presença do Mchr1 em tecido mamário e do SNC (12º, 19º dias de lactação e diestro); em tecido mamário de ratas lactantes o Mchr1 se encontra em células na epiderme, derme, estroma e parênquima, e em ratas não-lactantes apenas na epiderme e derme. A técnica RNAscope confirmou a presença do Mchr1 no SNC de rata lactante. Por RT-PCR e RT-qPCR confirmou-se a presença do Mchr1 em tecidos mamários e controles de ratas lactantes e não-lactantes, com aumento da expressão gênica no hipocampo de ratas no 19º dia lactação. Por western blot, o MCHR1 encontra-se aumentado em hipocampo de ratas lactantes (12º dia); 2) o sequenciamento gênico identificou 100% de identidade da sequência do Mchr1 do tecido mamário (com pele e sem pele) com a do SNC; 3) células MCHR1-ir foram identificadas na epiderme, derme, estroma e parênquima de glândulas mamárias (ratas lactantes). Conclusão: podemos inferir, de forma inédita, que o Mchr1 é expresso no tecido mamário de ratas lactantes e nãolactantes, apresenta 100% de identidade com a sequência do SNC, a expressão varia por setor mamário, e é mais expresso no hipocampo (19º dia lactação) indicando possível neurogênese hipocampal no final da lactação e, que o MCHR1 está mais presente no tecido mamário de ratas lactantes no 12º dia lactação. Todos esses resultados sugerem um possível envolvimento do MCH no controle da lactação / Introduction: The melanin-concentrating hormone (MCH) mRNA shows the higher expression during lactation final period (around 19th day) in novel sites of central nervous system (CNS) of rodents, such as the ventral part of medial preoptic area (MPOAv). Thereafter, mRNA and protein are not found in the MPOAv and, there are seric alterations of MCH suggesting a possible function in the lactation final period. MCH is present peripheral tissues: lung, thyroid, spleen, gastrointestinal tract and the CNS is responsible for 98% of expression. The MCH has two receptors: MCHR1 and MCHR2. However, there are no descriptions of MCHR1 expression in the mammary glands of non-lactating or lactating dams albeit evidence support a possible relationship between MCH and lactation. Objective: 1) investigate the presence of MCHR1 in mammary tissue, 2) sequencing the receptor present in the mammary tissue of female rats to verify the homology to compare with central Mchr1 and 3) identify the cellular type that express the mRNA of Mchr1 and, the protein MCHR1 and. Material and Methods: mammary gland and brain tissue of Long-Evans rats (lactating and no-lactating) were submitted to in situ hibridization, RT-PCR and qRT-PCR (with peripheral control tissues). Sample of CNS Long-Evans rats (19th day lactation) was submitted to RNAscope technique. Sequencing was performed in mammary gland tissue and hippocampus of lactating rat. Mammary gland tissue of lactating rats was submitted to immunohistochemistry (alcaline phosphatase and indirect immunofluorescence) and western blot. Results: 1) Mchr1 was detected by in situ hibridization in mammary gland and CNS tissue (12th, 19th days of lactation and diestrus phase). In mammary gland of lactating rats Mchr1 was found in cells of epidermis, dermis, stroma and parenchyma, and in no-lactating rats only in the epidermis and dermis. RNAscope confirmed the presence of Mchr1 in the CNS of lactating rats. By RT-PCR and qRT-PCR, Mchr1 was detected in mammary gland and controls tissues of lactating and no-lactating rats, with higher expression in hippocampus on the 19th day lactating rats. By western blot, MCHR1 is increased in hippocampus of lactating rats (12th day); 2) the gene sequencing confirmed 100% identity os Mchr1 sequence of mammary tissue (with and without skin) compared to CNS; 3) MCHR1-ir cells were detected in epidermis, dermis, stroma and parenchyma (lactating rats). Conclusion: we can infer, in an unprecedented manner, the Mchr1 is expressed in mammary tissue of lactating and non-lactating rats, presents 100% identity with the sequence of the CNS, expression varies by mammary sector, and is best expressed in the hippocampus (19th day lactation) indicating possible hippocampal neurogenesis at the end of lactation and the MCHR1 is more present in the breast tissue of lactating rats on the 12th day lactation. All these results suggest a possible involvement of MCH in the control of lactation
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-08082016-165136 |
| Date | 29 April 2016 |
| Creators | Batagello, Daniella Sabino |
| Contributors | Bittencourt, Jackson Cioni |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Reter o conteúdo por motivos de patente, publicação e/ou direitos autoriais. |
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