Orientador: Andrei Moroz / Resumo: As membranas de hemácias e leucócitos são compostas por centenas de antígenos que desempenham diversas funções relacionadas a homeostase, metabolismo celular e podem estar envolvidos em processos de rejeição de transplantes, doenças hemolíticas e reações transfusionais. Para a detecção desses antígenos são utilizados anticorpos monoclonais e a obtenção destes anticorpos envolve diversas etapas que culminam na caracterização dos produtos obtidos. Esta etapa é crítica e envolve diferentes técnicas, incluindo a Proteômica na descrição da proteína-alvo de cada anticorpo monoclonal. O objetivo deste estudo foi caracterizar anticorpos monoclonais de especificidade anti-eritrocitária e anti-leucocitária produzidos pelo Laboratório de Engenharia Celular (LEC) do Hemocentro de Botucatu. Foram selecionados um clone e um hibridoma produtores de anticorpos anti-eritrocitários, e um clone produtor de anticorpos anti-leucocitários, pertencentes ao banco de células do LEC. As células foram expandidas em cultura, foi realizado Western Blotting (WB) e cada banda proteica reconhecida pelos anticorpos (antígenos) foi analisada por Espectrometria de Massas, segundo técnicas proteômicas. Outros testes adicionais foram realizados, como técnicas imuno-hematológicas, citometria de fluxo e imuno-histoquímica. Após expansão, retestagem e verificação de reatividade contra hemácias humanas, e a seleção dos dados de outros estudos até então não explorados, na técnica de WB os anticorpos reconheceram dive... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Red blood cell and leukocyte membranes are composed of hundreds of antigens that perform various functions related to homeostasis, cell metabolism and may be involved in transplant rejection, hemolytic disease and transfusion reactions. Monoclonal antibodies are used to detect these antigens and the obtaining of these antibodies involves several steps that culminate in the characterization of the obtained products. This step is critical and involves different techniques, including Proteomics to descript the target protein of each monoclonal antibody. The aim of this study was to characterize anti-erythrocyte and anti-leukocyte monoclonal antibodies produced by the Laboratory of Cellular Engineering (LEC) of the Blood Center of Botucatu. Anti-erythrocytes clone and hybridoma antibody producers and a clone that produces anti-leukocyte antibodies, belonging to the LEC cell bank were selected. Cells were expanded in culture, it was realyzed Western Blotting (WB) technique and each protein band recognized by the antibodies (antigens) was analyzed by Mass Spectrometry according to proteomic techniques. Others tests were realized, such as immunohematology techniques, flow cytometry and immunohistochemistry. After expansion, retesting and verification of reactivity against human red blood cells, and selection of data from other studies not exploited, in the WB technique, the antibodies recognized several spots. After analysis by Mass Spectrometry, it was identified, with good reliabi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UNESP/oai:www.athena.biblioteca.unesp.br:UEP01-000907000 |
| Date | January 2018 |
| Creators | Santis, Laís Priscila de |
| Contributors | Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Medicina. |
| Publisher | Botucatu, |
| Source Sets | Universidade Estadual Paulista |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | computer file |
| Relation | Sistema requerido: Adobe Acrobat Reader |
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