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DISSERTAÇÃO Caio César de Andrade Rodrigues Silva.pdf: 4603467 bytes, checksum: 1a86c631228990f41725c8d4908495db (MD5)
Previous issue date: 2015-03-02 / FACEPE / Há alguns anos, tem-se crescente interesse pela obtenção de agentes terapêuticos com potencial imunoestimulante e antioxidante, capazes de ser utilizados no tratamento de doenças, como a espécie T. occidentalis. Dessa forma, este trabalho teve como propósito obter e avaliar a atividade farmacológica do extrato seco padronizado de Thuja occidentalis Linn. Para este fim, procedeu-se com a validação do método para doseamento de polissacarídeos, em seguida, realizou-se a otimização da extração. A partir do método validado e otimizado, obteve-se a solução extrativa rica em polissacarídeos, como também o extrato seco e fração polissacarídica. Além disso, avaliou-se a composição de monossacarídeos presentes no extrato seco e fração de polissacarídeos. Adicionalmente, foi avaliada a atividade imunoestimulante do extrato e fração, através da determinação da expressão de Interferon-gama (INF-γ) e Interleucinas (ILs) 6, 10, 17 e 22 em esplenócitos de camundongos e de INFγ e ILs 2, 4, 6 e 1β em PBMCs humanas. Do mesmo modo, avaliou-se a atividade antioxidante do extrato e fração de polissacarídeos através de testes in vitro pelo sequestro dos radicais 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH•), 2,2'-azino-bis (ácido 3-etilbenztiazoline-6-sulfonico) (ABTS•+), hidroxila (OH•) e óxido nítrico (NO). Para o doseamento, foi aplicado o método de antrona. Pelos testes de fator-único, foram selecionadas as melhores condições de temperatura (85-95°C), tempo (4,0-5,0 h) de extração e proporção de droga vegetal:água (4 g: 30 mL). Os efeitos da temperatura e tempo sobre o teor de polissacarídeos foram estudados pelo planejamento fatorial. Os resultados demonstraram que o aumento simultâneo desses parâmetros ocasionou redução do teor dos polissacarídeos, de modo que as condições ótimas para obtenção da solução extrativa foram: temperatura de 95°C e tempo de 4 h. O extrato seco obtido mostrou-se como pó fino, higroscópico e com baixa capacidade de fluxo, demonstrando a necessidade da adição de excipientes que viabilizem sua utilização farmacêutica. A análise da composição dos monossacarídeos extrato e fração revelou a presença predominante, de glicose (extrato) e manose (fração). A avaliação da atividade imunoestimulante demonstrou que houve estímulo das citocinas: 6 e 1β. Além de viabilidade celular superior a 90%. Na avaliação antioxidante todos os testes demonstraram o potencial antioxidante superior do extrato em relação a fração. / For some years, increasing interest has been the achievement of therapeutic agents with immunostimulatory and antioxidant potential, able to be used in the treatment of diseases such as T. occidentalis species. Thus, this study aimed to obtain and evaluate the pharmacological activity standardized dry extract of Thuja occidentalis Linn. To this end, it proceeded with the validation method for determination of polysaccharides, and then extraction was performed optimization. From the validated and optimized method, we obtained the rich extraction solution in polysaccharides, as well as the dried extract and polysaccharide fraction. In addition, we evaluated the composition of monosaccharides present in the dry extract and fraction of polysaccharides. Additionally, the immunostimulatory activity of the extract and fraction was evaluated by determining the expression of interferon-gamma (IFN-γ) and interleukins (ILs) 6, 10, 17 and 22 in splenocytes of mice and INFγ and ILs 2, 4 6 and 1β in human PBMC. Likewise, we evaluated the antioxidant activity of the extract and polysaccharides fraction through in vitro tests for the kidnapping of radical 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPH•), 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS • +), hydroxyl (OH•) and nitric oxide (NO). For the assay, it applied the anthrone method. For single-factor tests, the best temperature conditions were selected (85-95 °C) time (4.0-5.0 h) extraction and proportion of vegetable drugs: water (4 g: 30 mL). The effects of temperature and time on polysaccharide content were studied by factorial design. The results demonstrated that the simultaneous increase in these parameters caused reduction of the content of the polysaccharide, so that the optimum conditions for obtaining the extraction solution were: temperature 95 °C and time 4 h. The dry extract obtained proved to be a fine powder, hygroscopic and with low flow capacity, demonstrating the need for the addition of excipients that enable its pharmaceutical use. The analysis of the composition of the extract and monosaccharide fraction revealed the predominant presence of glucose (extract) and mannose (fraction). The evaluation of the immunostimulant activity showed that there was stimulation of cytokines: 6 and 1β. In addition to greater than 90% cell viability. In assessing antioxidant all tests have demonstrated the superior antioxidant potential of the extract compared to fraction.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/24298 |
| Date | 02 March 2015 |
| Creators | SILVA, Caio César de Andrade Rodrigues |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/8152775457567731, ROLIM NETO, Pedro José |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Inovacao Terapeutica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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