MEIRA, Assuero Silva. Estudo do potencial citotóxico de novos ésteres sintéticos derivados da mistura triterpenoidica a-/ß-amirina em modelos experimentais in vitro. 2011. 124 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-07T11:44:40Z
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Previous issue date: 2011 / Triterpenoids are compounds that in recent years have aroused considerable interest because of their structural diversity and the discovery of a broad spectrum of pharmacological activities. This study evaluated the cytotoxic potential of four derivatives of a mixture of α-, β-amyrin in human tumor cell lines. Among these, only compound 3-O-α-Carboximaleinato of, β-amyrin (3a/3b) was active, especially in the leukemic cell line HL-60, with IC50 values ranging from 1.8 to 3.0 µM. This derivative had its cytotoxic evaluated, also at the other leukemia cell line, K562, with IC50 values ranging between 1.76 and 2.96 µM, suggesting a specificity of this substance for leukemia. And their specificity for tumor cells was confirmed in cytotoxicity assays in a strain of macrophages, J774 (IC50 between 3.10 and 3.60 µM) and mononuclear cells in human peripheral blood mononuclear cells, whose proliferation was not prevented, and there wasn’t damage in the DNA of these cells. None of the compounds showed hemolytic activity against erythrocytes of mice (EC50> 200 mg / mL), suggesting a cytotoxic mechanism more specific. Thus, to determine the mechanism of action involved, sequences of in vitro experiments were performed in HL-60 cell line. Cells were treated at different concentrations of the sample 3a/3b (1.5, 3.0 and 6.0 µM) during 24h. The viability of HL-60 cells (trypan blue test and flow cytometry) was reduced at concentrations of 3.0 and 6.0 µM after treatment. Morphological analysis of cellular changes performed by staining methods (May-Grünwald-Giemsa and acridine orange / ethidium bromide (LA / BE)) and by flow cytometry (membrane integrity) showed typical features of apoptotic cells (intact membrane , reduction of cell volume, picnotic nucleus and chromatolysis), also at concentrations of 3.0 and 6.0 µM. Further testing by flow cytometry revealed that there was externalization of phosphatidylserine, there was no formation of reactive oxygen species (ROS) and that the molecule 3a/3b only induced the extrinsic pathway of apoptosis by activation of initiator caspase 8 and subsequent activation of caspases 3 and 7. These data indicate a cytotoxic mechanism induced by an apoptotic pathway, involving death receptors. Therefore, these results indicate the cytotoxic potential of 3a/3b analogue. / Triterpenóides são compostos que nos últimos anos têm despertados grande interesse em razão de sua diversidade estrutural e da descoberta de um amplo espectro de atividades farmacológicas. O presente estudo avaliou o potencial citotóxico de quatro derivados de uma mistura de α-,β-amirina em linhagens tumorais humanas. Dentre estes, apenas o composto 3-O-Carboximaleinato de α-, β-amirina (3a/3b) foi ativo, especialmente na linhagem leucêmica HL-60, com valores de IC50 variando entre 1,8 e 3,0 µM. Este derivado foi avaliado, também frente à outra linhagem leucêmica, K562, com IC50 variando entre 1,76 e 2,96 µM, sugerindo uma especificidade desta substância para leucemias. E sua especificidade para células tumorais foi confirmada em ensaios de citotoxicidade em células não transformadas, sendo testada em uma linhagem de macrófagos, J774 (IC50 entre 3,10 e 3,60 µM) e em células mononucleares do sangue periférico humano (CMSPH), cuja proliferação não foi impedida e não houve dano ao DNA destas células. Nenhum dos compostos mostrou atividade hemolítica contra eritrócitos de camundongos (EC50 > 200 µg/mL), o que sugere uma citotoxicidade por mecanismos de ação mais específicos. Desta forma, a fim de determinar o mecanismo de ação envolvido, uma sequência de experimentos in vitro foram realizados na linhagem HL-60. As células foram tratadas em diferentes concentrações da amostra 3a/3b (1,5, 3,0 e 6,0 µM) por 24h. A viabilidade das células HL-60 (teste azul de tripan e citometria de fluxo) foi reduzida nas concentrações de 3,0 e 6,0 µM, após o tratamento. A análise morfológica das alterações celulares realizada por métodos de coloração (May-Grünwald-Giemsa e laranja de acridina/brometo de etídio (LA/BE)) e por citometria de fluxo (integridade de membrana) revelaram características típicas de células apoptóticas (membrana íntegra, redução do volume celular, núcleo picnótico e cromatólise), também nas concentrações de 3,0 e 6,0 µM. Outros testes por citometria de fluxo revelaram que houve externalização da fosfatidilserina, que não houve formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) e que a molécula 3a/3b induziu apenas a via extrínseca da apoptose, pela ativação da caspase iniciadora 8 e a consequente ativação das caspases efetoras 3 e 7. Estes dados indicam um mecanismo citotóxico por indução de uma via apoptótica, envolvendo receptores de morte. Por conseguinte, estes resultados apontam o potencial citotóxico do análogo 3a/3b.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/2217 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Meira, Assuero Silva |
| Contributors | Pessoa , Cláudia do Ó |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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