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Previous issue date: 2013-09-30 / Lectinas são proteínas de origem não imunológica que se ligam de forma específica e reversível a carboidratos. Alpinia zerumbet é uma planta ornamental utilizada na medicina popular de modo muito abrangente para tratamento de enfermidades como inflamações, febre e gripe. Neste trabalho lectinas foram extraídas e purificadas a partir de folhas (AzeLL, do inglês A. zerumbet leaf lectin) e flores (AzeFL, do inglês A. zerumbet flower lectin) de A. zerumbet e avaliadas quanto à atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Shigella sonnei através da determinação de concentrações mínima inibitória (CMI) e mínima bactericida (CMB), bem como a atividade termiticida contra operários e soldados da espécie Nasutitermes corniger. Extratos em solução salina e tampões com diferentes valores de pH foram preparados. Os extratos em citrato-fosfato 0,1 M pH 7,0 mostraram maior atividade hemaglutinante específica e foram chamados então de extrato de folha (LE, do inglês leaf extract) e extrato de flor (FE, do inglês flower extract). As atividades hemaglutinantes de LE e FE foram inibidas por N-acetilglicosamina. Fracionamento salino utilizando sulfato de amônio não resultou em preparações enriquecidas em lectina. Sendo assim, LE e FE foram cromatografados em colunas de quitina. Os picos proteicos adsorvidos e eluídos com ácido acético 1,0 M foram dialisados e denominados AzeLL e AzeFL, que apresentaram atividade hemaglutinante específica de 640 e 984,6, respectivamente. FE e AzeFL perderam completamente a atividade hemaglutinante após aquecimento a 70 °C por 30 min, enquanto o LE perdeu a sua atividade apenas após aquecimento a 100 °C e AzeLL após aquecimento a 80 °C. LE inibiu o crescimento de E. coli, P. aeruginosa e S. sonnei (CMI de 1235 μg/ml de proteínas para todas as bactérias) e FE inibiu P. aeruginosa e S. sonnei (CMI de 1135 μg/ml de proteínas para ambas). AzeLL só foi capaz de inibir o crescimento de K. pneumoniae (CMI: 970 μg/mL), enquanto AzeFL inibiu apenas S. sonnei (CMI: 820 μg/mL). Os extratos, AzeLL e AzeFL agiram apenas como agentes bacteriostáticos. No ensaio termiticida, a morte de todos os operários mantidos em contato com LE, FE, AzeLL e AzeFL ocorreu em cerca de 3-6 dias, mais cedo que no controle (taxa de mortalidade de 100% após 9 dias). No entanto, não houve diferenças significativas (p> 0,05) entre as curvas de sobrevivência dos operários estabelecidas para o controle e as amostras em todas as concentrações testadas. Por outro lado, LE (0,5 e 1,0 mg/mL de proteínas) FE , AzeLL e AzeFL (0,0625–1,0 mg/mL) induziram significativamente (p<0,05) a morte dos soldados de N. corniger. Em conclusão, AzeLL e AzeFL foram purificadas a partir de cromatografia em coluna de quitina, apresentaram relativa termoestabilidade, foram eficientes em inibir o crescimento das bactérias K. pneumoniae e S. sonnei, respectivamente, e são agentes termiticidas contra soldados de N. corniger. / Lectins are proteins from non-immune origin that bind specifically and reversibly to carbohydrates. Alpinia zerumbet is an ornamental plant used in folk medicine in a very comprehensive manner for treatment of infirmities such as inflammation, fever and flu. In this work, lectins were extracted and purified from leaves (AzeLL, A. zerumbet leaf lectin) and flowers (AzeFL, A. zerumbet flower lectin) of A. zerumbet and evaluated for antibacterial activity against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae and Shigella sonnei by determining the minimal inhibitory (MIC) and minimal bactericidal (MBC) concentrations as well as for termiticidal activity against Nasutitermes corniger workers and soldiers. Extracts in saline solution and buffers at different pH values were prepared. The extracts in 0.1 M citrate-phosphate pH 7.0 showed highest specific hemagglutinating activity and were called LE (leaf extract) and FE (flower extract). Hemagglutinating activities of LE and FE were inhibited by N-acetylglucosamine. Saline fractionation using ammonium sulphate did not result in preparations richer in lectin. Thus LE and FE were cromatographed on chitin columns. The adsorbed protein peaks eluted with 1.0 M acetic acid were dialysed and called AzeLL and AzeFL, which showed specific hemagglutinating activity of 640 and 984.6, respectively. FE and AzeFL completely lost the hemagglutinating activity after heating at 70 ºC for 30 min while LE lost its activity only after heating at 100 ºC and AzeLL after heating at 80 ºC. LE inhibited the growth of E. coli, P. aeruginosa and S. sonnei (MIC of 1235 μg/ml of protein for all bacteria) and FE inhibited P. aeruginosa and S. sonnei (MIC of 1135 μg/ml of protein for both). AzeLL was only able to inhibited the growth of K. pneumoniae (MIC: 970 μg/mL) while AzeFL only inhibited S. sonnei (MIC: 820 μg/mL). The extracts, AzeLL and AzeFL acted only as bacteriostatic drugs. In the termiticidal assay, the death of all workers maintained in contact with LE, FE, AzeLL and AzeFL occurred around 3-6 days, earlier than in control (100% of mortality rate after 9 days). However, there were no significant differences (p>0.05) between the survival curves established for control and the sampels at all tested concentrations. On the other hand, LE (0.5 and 1.0 mg/mL of protein), FE, AzeLL and AzeFL (0.0625–1.0 mg/mL) induced significantly (p<0.05) the death of N. corniger soldiers. In conclusion, AzeLL and AzeFL were purified by chitin chromatography, showed relative thermostability, were effective in inhibit growth of the bacteria K. pneumoniae and S. sonnei, respectively, and are both termiticidal agents against N. corniger soldiers.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/26463 |
| Date | 30 September 2013 |
| Creators | SILVA, Sandro do Nascimento |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/7863845087003953, CORREIA, Maria Tereza dos Santos, NAPOLEÃO, Thiago Henrique |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Bioquimica e Fisiologia, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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