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Previous issue date: 2016-03-01 / FACEPE / Eugenia uniflora L. (Myrtaceae), conhecida como pitangueira, é uma espécie nativa do Brasil, de importância econômica e terapêutica devido ao seu emprego como alimento e na medicina popular. Considerando as propriedades biológicas, diversas atividades são relatadas para E. uniflora entre as quais: antibacteriana, antifúngica, antidiarreica, hipoglicêmicas e antitumorais. A partir de 2009, a espécie foi inclusa na Relação Nacional de Plantas Medicinais de Interesse para o SUS (RENISUS), visando incentivar estudos relativos ao desenvolvimento biológico, analítico e tecnológico da espécie. Neste contexto, relatos acerca de investigações analíticas e tecnológicas para farmacógenos de E. uniflora são escassos. Portanto, o propósito deste trabalho foi o desenvolvimento e avaliação de ferramentas analíticas para a caracterização química de extratos e frações de E. uniflora. Assim, o monitoramento dos metabólitos da espécie foi empregado para o estabelecimento de especificações de qualidade para droga vegetal e avaliação de operações de transformação. As folhas secas e trituradas de pitangueira foram empregadas como material vegetal e caracterizadas de acordo com os Métodos Gerais em Farmacognosia da Farmacopeia Brasileira 5 ed. (2010). Para análise quantitativa de flavonoides e taninos na droga vegetal e extrato bruto foram avaliadas metodologias espectrofotométricas (UV/Vis) usando os reagentes AlCl₃ e Folin Ciocalteau para aumento de seletividade. A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) acoplada a detector de arranjo de fotodo diodos também foi utilizada para análises quantitativas; as análises qualitativas foram conduzidas por CCD/CCDAE e CLAE. Além disso, um fracionamento preliminar das substâncias presentes nas folhas de pitanga foi executado através de sucessivas cromatografias de coluna aberta, utilizando gel de sílica como fase estacionária e posteriormente CCD preparativa para a obtenção das substâncias desejadas. Os procedimentos espectrofotométricos avaliados atendem as exigências preconizadas pela RE 899/2003, apresentando especificidade/seletividade para os marcadores eleitos, comportamento linear (R2 > 0,99); nos ensaios de repetitividade e precisão dentro dos limites determinados pela legislação (< 5%) onde foram encontrados teores médios de flavonoides de 1,82% (matéria prima – MP) e 4,90% (Extrato bruto – EB) na metodologia por doseamento direto, e 1,72% (MP) e 3,90 (EB) na metodologia após hidrólise ácida; no caso de taninos totais os teores médios encontrados foram de 10,12% (MP) e 21,11 (EB). No parâmetro exatidão, os resultados obtidos encontram-se de acordo com o preconizado pela RE899 (80-120%) para as três metodologias (faixa de recuperação de 92 a 107%); além de estabilidade às variações intencionais avaliadas na robustez (tempo de reação, reagentes e solventes). A metodologia por CLAE para a quantificação ácido gálico e ácido elágico e dos flavonoides presentes na matriz, também atendeu aos requisitos preconizados pela legislação, oferecendo dados quantitativos mais específicos relativos às substâncias presentes nas amostras. O fracionamento permitiu a obtenção de frações contendo os compostos de interesse, e através da CCD preparativa foi possível obter uma fração semi-purificada contendo duas substâncias flavonoídicas potenciais marcadoras da espécie. Adicionalmente, os perfis químicos (fingerprints) por CCD e CLAE permitiram identificar nas matrizes (droga, extratos e frações), bandas/picos relacionados a grupos de metabólitos promissores para apoiar a padronização química de produtos derivados das folhas de Eugenia uniflora. / Eugenia uniflora L. (Myrtaceae), known as pitangueira, is a native species from Brazil, with economic and therapeutic importance due to the extensive use as food and in traditional medicine. Considering the biological properties, various activities are reported to E. uniflora: antibacterial and antifungal, antidiarrheal, antitumor and hypoglycemics, among others. From 2009, the species was included in the National Ratio of medicinal plants of interest for the SUS (Brazilian Unified Health System)(RENISUS), to encourage studies about the biological, analytical and technological development of the specie. In this context, the reports about analytical and technological research for pharmacogens of E. uniflora are scarce. Therefore, the purpose of this work was the development and evaluation of analytical tools for chemical characterization of extracts and fractions from leaves of E. uniflora. Thus, the monitoring of the metabolites of the species were employed for the establishing quality specifications of plant drug and for the evaluation of processing operations. The dried and milled leaves of E. uniflora were used as plant material and characterized according to the General Methods in Pharmacognosy of the Brazilian Pharmacopoeia 5th ed. (2010). For the quantitative analysis of flavonoids and tannins in the raw material and crude extract, spectrophotometric methodologies (UV/Vis) were evaluated using AlCl₃ and Folin Ciocalteau reagents to increase selectivity. High performance liquid chromatography (HPLC) coupled to photodiode array detector was also used for quantitative analysis; the qualitative analyzes were conducted by TLC/HPTLC and HPLC. In addition, a preliminary fractionation of substances in ―pitanga‖ leaves was performed by successive classical column chromatographies, using silica gel as the stationary phase and subsequently preparative TLC for obtaining the desired substances. The data revealed that the spectrophotometric procedures evaluated meet the requirements of RE 899/2003, presenting specificity / selectivity for the chosen markers, and linear behavior (R2> 0,99). In the tests of repeatability and precision within the limits determined by the legislation (<5%) where average levels of flavonoids of 1,82% (raw material - MP) and 4.90% (crude extract - EB) were found in the methodology by dosing Direct, and 1,72% (MP) and 3,90 (EB) in the methodology after acid hydrolysis; besides accuracy compatible for the three methods (recovery range 92-107%), and stability to intentional variations evaluated (reaction time, reagents and solvents). The methodology by HPLC for the quantification of gallic acid and ellagic acid and the flavonoids present in the matrix, also have met the requirements preconized by legislation, providing more specific quantitative data relating to substances present in the samples. The fractionation enabled to obtain fractions containing the compounds of interest, and by preparative TLC was possible to obtain a semi-purified fraction containing two flavonoids potential marker species. Additionally, chemical profiles (fingerprints) by HPTLC and HPLC allowed to identified in different matrices (drug, extracts and fractions), bands/peaks related to promising groups of metabolites to assist the chemical standardization of products derived from the leaves of Eugenia uniflora.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/26912 |
| Date | 01 March 2016 |
| Creators | BEZERRA, Isabelle Cristinne Ferraz |
| Contributors | http://lattes.cnpq.br/4290808161139329, SOARES, Luiz Alberto Lira |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Inovacao Terapeutica, UFPE, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
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