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Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A invasão dos eritrócitos pelos parasitos da malária
garante o sucesso da infecção
humana e, consequentemente, o desenvolvimento da doe
nça clínica. Desse modo,
existe grande interesse no desenvolvimento de vacina
s que possam induzir
anticorpos que bloqueiem o ciclo sanguíneo do parasito
. No caso de
Plasmodium
vivax
, o principal antígeno candidato à vacina é a
Duffy binding protein II
(DBPII),
único ligante conhecido para a invasão dos eritrócit
os humanos. Embora anticorpos
naturalmente adquiridos contra a DBPII induzam proteçã
o, faz-se necessário avaliar
se esta resposta gera memória imunológica de longa dur
ação. O trabalho aqui
desenvolvido teve como objetivo principal avaliar s
e a DBPII e outros antígenos
candidatos à vacina contra
P. vivax
induzem resposta imune humoral (anticorpos e
células B de memória, MBCs) de longa-duração. A popul
ação de estudo foi
constituída de indivíduos com história de exposição
única a
P. vivax
, ocorrida em
2003, durante um surto de transmissão autóctone na
região metropolitana de Belo
Horizonte, Minas Gerais. Para tal, foram selecionado
s indivíduos que se infectaram
(casos, n=13) ou não (não-casos, n=12) durante o pe
ríodo de transmissão. Como
controle negativo, foram incluídos indivíduos nunca
expostos à malária (BH, n=9). A
resposta de anticorpos foi avaliada pela sorologia c
onvencional (ELISA) utilizando
como antígenos diferentes variantes da DBPII (Acre1 e Sa
l1) bem como outros
antígenos candidatos à vacina (MSP1
19
e EBP2). A resposta de células B de
memória para os mesmos antígenos foi avaliada pelo e
nsaio imunoenzimático que
detecta MBCs diferenciadas em células secretoras de
anticorpos IgG (ELISpot).
Após padronizar o ensaio de ELISpot com sucesso, os n
ossos resultados
demonstram que: (1) MBCs antígeno-específicas de vida-
longa (12 anos após
exposição) foram detectadas em todos os indivíduos
do grupo caso e em parte dos
indivíduos não-casos (58%), o que sugere que infecções
assintomáticas podem ter
ocorrido na época do surto; (2) a resposta celular
de DBPII foi variante-específica,
sendo a variante Acre1 (frequente na Amazônia brasile
ira) a mais imunogênica.
Neste contexto, a cepa de referência Sal1 ou um antí
geno sintético desta cepa
(DEKnull) apresentaram pouca ou nenhuma imunogenicidad
e; (3) a MSP1
19
,
presente na superfície do parasito, foi o antígeno m
ais imunogênico, seguido da
EBP2, proteína recém-descrita em
P. vivax
; (4) em relação a sorologia convencional,
anticorpos IgG para os diferente antígenos testados n
ão perduraram após 12 anos
de exposição única a
P. vivax
.
Em conjunto, os resultados aqui apresentados
permitiram concluir que uma única e breve exposição
a
P. vivax
é capaz de induzir
MBCs antígeno-específicas de vida longa, reforçando a
importância de se estudar
estas células na avaliação da memória imunológica da
malária, particularmente,
aquela induzida por antígenos candidatos à vacina. / Erythrocyte invasion by malaria parasites is a key e
vent in ensuring human infeccion
and clinical development of the disease. Therefore,
there is great interest in
generating blocking antibodies through a blood-stage vac
cine, preventing erythocyte
invasion.
Plasmodium vivax
Duffy binding protein region II (DBPII) is the only kn
own
ligand for human reticulocyte invasion, hence being a
n attractive vaccine candidate
against asexual blood-stage
P. vivax
. Although there is evidence that naturally
acquired anti-DBPII antibodies induce protection, it i
s necessary to access if this
response produces sustained long-lasting immunologica
l memory. Thereafter, the
present work aimed to evaluate whether DBPII and other
P. vivax
vaccine candidates
induce long-lasting humoral immune response (antibod
ies and memory B cells,
MBCs). For this purpose, we studied a population with a
single
P. vivax
exposure in
2003, during an autochthonous outbreak in Minas Gera
is state, a non-endemic area
of Brazil. We selected 25 individuals exposed to the
outbreak being 13 with
confirmed
P. vivax
infection (cases) and 12 who had not being diagnosed
with
malaria (non-cases). As negative control, were includ
ed 9 individuals never exposed
to malaria (residents in Belo Horizonte). Antibody re
sponses to
P. vivax
blood
antigens were evaluated by conventional serology (ELISA),
focusing on two DBPII
variants (Acre1 e Sal1) and other vaccine candidates
(MSP1
19
e EBP2). B cell
memory responses to the same antigens were evaluated
through Enzyme-Linked
ImmunoSpot (ELISpot) targeting IgG secreting cells. After
stablishment of the
ELISpot assay, our results showed that: (1) long-last
ing antigen-specific MBCs were
detected 12 years after exposure in all of the case
s and in part of the non-cases
(58%), wich suggests the occurrence of asymptomatic i
nfections during the outbreak;
(2) cellular response to DBPII was variant-specific, wi
th greater immunogenicity of
variant Acre1 (most frequent in the Amazon region). Re
garding cellular response, the
reference strain Sal1 and the synthetic construct (
DEKnull) showed low or absence
of immunogenicity; (3) MSP1
19
, presente in the parasite’s surfasse, was highly
immunogenic, followed by EBP2,
P. vivax
’s new predicted protein; (4) regarding
conventional serology, IgG antibody responses to the
different antigens here tested
did not last after 12 years of exposure to
P. vivax
. Altogether our results showed that
a single brief exposure to
P. vivax
is able to induce antigen-specific long-lasting
MBCs, reinforcing the importance of this cells in acc
essing immunological memory in
malaria, particularly, that induced by vaccine cand
idates.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/15743 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Melo, Ana Luiza de Oliveira |
| Contributors | Kano, Flora Satiko, Carvalho, Luzia Helena, Fiuza, Jacqueline Araújo, Bueno, Lílian Lacerda, Silva, Marcilene Rezende, Carvalho, Luzia Helena |
| Publisher | s.n. |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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